(推荐)藻类生物学实验11海科

实验一大型海藻种类形态观察

（4学时第八周）

一、实验目的

了解海洋藻类----大型海藻与微藻的形态与分类。

二、实验材料及用具

1、实验材料：

1）大型海藻标本（学院标本室）；

2）海带孢子体（可用干海带泡发），江篱（海洋学院附近打捞）；（取一部分冻存于-20冰箱，作为叶绿素提取实验的材料）

2、实验器材：显微镜、胶头滴管（每瓶藻一支）、盖玻片、载玻片、刀片（做海藻切片）。

4、试剂：70%乙醇（每组一瓶）

三、实验步骤

1、大型海藻标本观察；将标本馆的拉丁文名抄录下来，网上检索图片和分类。

2、海带的外部形态观察：藻体明显分为固着器、柄部和叶片，在叶片中央有两条平行纵走的浅沟，孢子体幼龄期叶面平滑，小海带期叶片出现凹凸现象，大海带期叶面则平直宽厚。

3、海带的内部构造：

①用徒手切片的方法，取一小块孢子体进行横切片，在显微镜下观察：孢子体的柄和叶均分为表层、皮层和髓部。

②同样取一小块孢子体进行纵切片，在显微镜下观察：表皮层由1-2层排列紧密的小细胞组成，外皮层细胞间分布1-2层粘液腔，其腔内有分泌细胞，髓丝细胞一端膨大为喇叭花，分生细胞位于叶片与柄之间。

4、江蓠的内部构造观察：

①江蓠的纵切面。

②江蓠的横切面。

③江蓠囊果横切面。

5、紫菜的形态与构造：

干紫菜先用水浸泡散开，再进行观察。

固着器：由根丝集合而成。

叶状体：由一层或两层细胞构成。

柄：叶状体基部与固着器之间的部分。

四、作业：

1、绘制大型海藻图：选5个标本，注明拉丁文名，简要说明其生物学特性（利用拉丁文名进行网上检索）。

2、绘出海带和江篱的内部构造，紫菜的外形。

附1：江篱与海带的内部构造

图1. 江篱藻体的内部构造

A.藻体横切面观；

B.藻体纵切面观；1表皮；2髓部细胞 3表皮细胞

图2. 海带构造

A.海带孢子体横切面；

B.髓部，

C.示喇叭丝；皮层部分横切面，示粘液腔道形成的时期；

D.成体横切面，示粘液腔道；co皮层；e分泌细胞；hg藻丝；me髓部；m表面分生细胞；s 分泌腔；v.b.f结合的喇叭丝

实验二微型海藻形态观察和培养

（4学时，第九周）

一、实验目的

观察几种重要经济微藻的形态特征，几种掌握单细胞微藻的实验室培养方法，细胞生长曲线观察。

二、实验材料及用具

1、实验材料：

小球藻、扁藻、等鞭金藻、角毛藻、骨条藻、茧形藻、池塘水样等微藻。

2、实验仪器：电炉、恒温干燥箱、灭菌锅、pH计、可见分光光度计、血球

计数板

3、实验器材：500ml 试剂瓶（每组5个）；0.45m的滤膜（一个）；抽滤装置(或针管)；玻棒、500ml烧杯、50ml容量瓶（每组一个）；250ml锥形瓶（每组2个）、牛皮纸、细绵绳

4、试剂：蒸馏水、消毒海水、各种试剂（见培养基配方），微藻培养母液

三、实验步骤

1、微藻形态观察：分别取各种微藻水样置于载玻片上，盖上盖玻片，于显

微镜下观察。先用10倍镜观察，然后转换物镜转换器用40倍观察。

2、培养基母液配制（配方见附2）：（提前配好，有兴趣的同学可与实验老师

王老师联系好时间，学习配制）1000倍培养基母液（强调维生素母液的配制方法）。配方见附1。

3、培养微藻的容器、工具及用水的消毒（提前准备）：

（1）培养微藻所用的容器、工具应用洗刷干净后晾干，放置恒温干燥箱中加热，120℃恒温1小时以上，自然冷却备用。

（2）加热煮沸消毒海水冷却至室温后备用。

4、配制微藻培养液。按照母液配制比例把母液加入消毒海水，配制培养液（例

如，1000倍母液，则每升消毒海水中加入1毫升母液，摇晃均匀，就成了培养液

）。

5、接种：取两种微藻，各按1/3～1/5接种（即把1份藻种加入3～5份培养

液中）。

6、培养、管理。将接种好的微藻置于适宜的条件下培养，每天摇晃1-2次，。

7、藻细胞密度计数（方法见附3）。分光光度计测定吸光值或血球计数板计

数藻细胞密度。不同种类的微藻所选用的波长不一样，一般绿藻门波长为720-750，金藻门、硅藻门波长为420。

8、本实验采用分光光度计每2天测定一次，培养时间为横坐标，藻细胞的OD值为纵坐标，绘制生长曲线。培养两周。

四、作业：

1、绘制观察到的微藻的形态图。

2、通过哪些具体措施使培养基无菌？

3、为何配制母液？配制培养基时，为何要等消毒海水冷却后再加母液？

4、EDTA的作用？

5.以培养时间为横坐标，相对应藻液的OD值为纵坐标，作图。

6、计算每瓶藻的培养6天的生长速率，公式如下：

K =（lnN2 – lnN1）/（ t2 - t1）（1）

T = 0.6931/K （2）

其中：K为相对生长速率；t1、t2为对应的培养时间；N1和N2分别为t1、t2时的细胞密度(微藻用OD值，江篱用重量)；T为细胞的平均倍增时间。t1就是刚放入培养箱的那天，计算培养6天后（即t2-t1=6,lnN1、lnN2分别为培养第一天和第六天的OD值的自然对数）的K值，再计算一个从培养第1天到最后1天的K值，分别以表格的形式表示。

附1：单细胞微藻的培养基配方

（一）宁波3号培养基配方

试剂名称重量试剂名称重量（mg）

NaNO

3 100 mg KH

2

PO

4

10 mg

FeSO

42.5 mg MnSO

4

0.25 mg

Na

2-EDTA 10 mg 维生素B

1

6μg

维生素B

12

0.05μg

自然海水1000ml

（二）F/2 (+ Si)培养基母液的配制1.A液 500 ml 1000倍

NaNO

3 37.5 g; NaH

2

PO

4

2.5 g

2.B液 500 ml 1000倍

Fe-EDTA 2.5 g (FeCl

3

1.6 g + EDTA 0.9 g) 3.C液 500 ml 1000倍

Na

2SiO

3

.9H

2

O 10 g

4.D液 500 ml 1000倍

盐酸硫铵素(VB1) 5 mg (试剂 50 mg/ml取100 μl)

Biotin VH 0.025 mg (试剂 0.1 mg/ml取250 μl)

VB12 0.025 mg (试剂 0.25 mg/ml取100 μl)

先用维生素分别用纯水溶解混合，稀HCl将pH调到4.5~5.0，最后用纯水稀释至1升。膜过滤后冰冻保存。

5.E液 500 ml 1000倍

CuSO

4

.5H2O 0.0098 mg

ZnSO

4

.7H2O 0.022 mg

CaCl

2

.6H2O 0.01 mg

MgCl

2

.4H2O 0.180 mg

Na

2MoO

4

.2H2O 0.0063 mg

1000 ml (1升) F/2 (+ Si)培养基 = 1000 ml (1升)过滤灭菌海水 + 1ml A 液 + 1ml B液+ 1ml D液+ 1ml E液 (+ 1ml C液)