外周血高分辨染色体制备方法研究

临床和实验医学杂志摇 圆园员员 年 愿 月摇 第 员园 卷摇 第 员缘 期
外周血高分辨染色体制备方法研究
·员员猿怨·
论著
冯治摇 黄元河（ 百色右江民族医学院遗传研究室摇 广西摇 百色摇 缘猿猿园园园）
摇 摇 【 摘要】摇 目的摇 建立一种简易的人外周血高分辨染色体标本制备方法。方法摇 将 猿园 份外周血样本随机分为 猿 组，每组 员园 份：粤 组采用常规法制备 郧 显带染色体，月 组采用过量胸苷（ 栽阅砸）同步化法制备高分辨染色体，实验组采用 低温休克和低浓度的秋水仙胺双重同步处理细胞，再用热蒸气—过氧化氢法制备高分辨染色体。结果摇 实验组与 粤 组 相比，细胞分裂指数差异无统计学意义（ 孕 跃 园援 园缘），但实验组获得的早期染色体分裂相数较多，两组比较差异具有统计学意义 （ 孕 约 园援 园员）；与 月 组相比，两组获得早期染色体分裂相数无差异（ 孕 跃 园援 园缘），但 月 组的细胞分裂指数较低（ 孕 约 园援 园缘）。另外， 实验组染色体分散较好，郧 显带清晰。结论摇 该法不需昂贵的试剂，操作简便易于掌握，能获得较多带纹清晰的高分辨染色体， 适合于临床检测应用。
图 员摇 常规制片染色体分散不良 图 圆摇 热蒸气法制片染色体分散良好
图 猿摇 过氧化氢处理的标本 郧 显带清晰
猿摇 讨论 常规的 郧 显带技术在人类 圆源 条中期染色体上可显
示 猿圆园 条左右的带纹。染色体带纹的分辨率除与标本 的质量及显带有关外，与染色体的长度密切相关。染色 体愈长则带纹愈丰富，分辨率越高（ 如处于晚前期、前中 期和早中期的细长染色体，显带数可增至 缘缘园 条、愿缘园 条 甚至 员 园园园 条以上［源］）。利用常规法制片所获得的分裂 相大部分处于中期，能见到的早期染色体很少，因此，在 高分辨染色体本标制作中，首要问题是如何获得分裂早 期较长的染 色 体。常 规 的 高 分 辨 染 色 体 技 术 是 采 用 药 物作用细胞同步化的基础上运用染色体收缩抑制剂来 增加染色体的相对长度。虽然药物同步化法制片可获 得一定数量的早期染色体，但整个实验耗时长（ 细胞培 养 怨源 澡），操作繁琐，不经济。从多次实验的结果看，经 过同步化后又用药物阻止染色体收缩，在一定程度上影 响了细胞的生长，出现未转化的小淋巴细胞较多，加上 实验过程需要用无血清培养液洗涤细胞 圆 次，容易造成
基金项目：圆园园怨 年度广西教育厅科研项目 桂教科研［圆园园怨］圆缘 号 项目编号为：圆园园怨员员酝杂员怨猿
固定，以 员 缘园园 则 辕 皂蚤灶 离心 远 皂蚤灶，去上清液加入 猿颐 员 甲醇 冰醋酸固定液 缘 皂造 混匀立即离心，重复固定 圆 次后，将细
·员员源园·
允燥怎则灶葬造 燥枣 悦造蚤灶蚤糟葬造 葬灶凿 耘曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 酝藻凿蚤糟蚤灶藻 灾燥造援 员园，晕燥援 员缘摇 粤怎早援 圆园员员
【 粤遭泽贼则葬糟贼】摇 韵遭躁藻糟贼蚤增藻摇 栽燥 泽藻葬则糟澡 葬 泽蚤皂责造藻 皂藻贼澡燥凿 枣燥则 贼澡藻 责则藻责葬则葬贼蚤燥灶 燥枣 澡蚤早澡 原 则藻泽燥造怎贼蚤燥灶 责藻则蚤责澡藻则葬造 遭造燥燥凿 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻援 酝藻贼澡燥凿泽摇 栽澡蚤则贼赠 责藻则蚤责澡藻葬则葬造 遭造燥燥凿 泽葬皂责造藻泽 憎藻则藻 则葬灶凿燥皂造赠 凿蚤增蚤凿藻凿 蚤灶贼燥 贼澡则藻藻 早则燥怎责泽 燥枣 贼藻灶援 陨灶 郧则燥怎责 粤，葬 则燥怎贼蚤灶藻 皂藻贼澡燥凿 憎葬泽 葬责责造蚤藻凿 贼燥 贼澡藻 责则藻责葬则葬贼蚤燥灶 燥枣 郧 糟澡则燥鄄 皂燥泽燥皂藻 遭葬灶凿蚤灶早援 陨灶 郧则燥怎责 月，葬 泽赠灶糟澡则燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿 憎蚤贼澡 藻曾糟藻泽泽蚤增藻 栽阅砸 憎葬泽 葬责责造蚤藻凿 贼燥 贼澡藻 责则藻责葬则葬贼蚤燥灶 燥枣 澡蚤早澡 原 则藻泽燥造怎贼蚤燥灶 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻援 郧则燥怎责 悦 憎葬泽 贼澡藻 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 早则燥怎责，贼澡藻 糟燥皂遭蚤灶藻凿 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 燥枣 造燥憎 原 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 泽澡燥糟噪 葬灶凿 造燥憎 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 糟燥造糟澡蚤糟蚤灶藻 憎藻则藻 葬责责造蚤藻凿 泽赠灶糟澡则燥鄄 灶燥怎泽造赠 贼燥 凿藻葬造 憎蚤贼澡 糟藻造造泽，贼澡藻灶 泽贼藻葬皂 葬灶凿 澡赠凿则燥早藻灶 责藻则燥曾蚤凿藻 憎藻则藻 葬责责造蚤藻凿援 砸藻泽怎造贼泽摇 栽澡藻则藻 憎葬泽 灶燥 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 蚤灶 糟藻造造 凿蚤增蚤泽蚤燥灶 蚤灶凿藻曾 遭藻鄄 贼憎藻藻灶 郧则燥怎责 粤 葬灶凿 贼澡藻 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 早则燥怎责（ 孕 跃 园援 园缘），遭怎贼 蚤灶 郧则燥怎责 悦，贼澡藻 灶怎皂遭藻则 燥枣 藻葬则造赠 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻 皂藻贼葬责澡葬泽藻 憎葬泽 糟燥皂责葬则葬贼蚤增藻造赠 皂燥则藻 葬灶凿 贼澡藻 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 憎葬泽 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼（ 孕 约 园援 园员）；贼澡藻则藻 憎葬泽 灶燥 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 蚤灶 贼澡藻 灶怎皂遭藻则 燥枣 藻葬则造赠 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻 皂藻贼葬责澡葬泽藻 遭藻贼憎藻藻灶 郧则燥怎责 月 葬灶凿 贼澡藻 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 早则燥怎责（ 孕 跃 园援 园缘），遭怎贼 蚤灶 郧则燥怎责 月，贼澡藻 糟藻造造 凿蚤增蚤泽蚤燥灶 蚤灶凿藻曾 憎葬泽 造燥憎藻（则 孕 约 园援 园员）援 陨灶 葬凿凿蚤贼蚤燥灶，糟澡则燥皂燥泽燥皂藻 泽责则藻葬凿 蚤灶 贼澡藻 藻曾鄄 责藻则蚤皂藻灶贼葬造 早则燥怎责 憎葬泽 遭藻贼贼藻则 葬灶凿 贼澡藻 郧 遭葬灶凿蚤灶早 憎葬泽 糟造藻葬则援 悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶摇 栽澡藻 皂藻贼澡燥凿 燥枣 泽赠灶糟澡则燥灶燥怎泽 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 燥枣 造燥憎 原 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 葬灶凿 造燥憎 糟燥灶糟藻灶鄄 贼则葬贼蚤燥灶 糟燥造糟澡蚤糟蚤灶藻泽 枣燥造造燥憎藻凿 遭赠 泽贼藻葬皂 葬灶凿 澡赠凿则燥早藻灶 责藻则燥曾蚤凿藻 枣燥则 贼澡藻 责则藻责葬则葬贼蚤燥灶 燥枣 澡蚤早澡 原 则藻泽燥造怎贼蚤燥灶 责藻则蚤责澡藻则葬造 遭造燥燥凿 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻 蚤泽 泽蚤皂责造藻，藻糟燥灶燥皂鄄 蚤糟 葬灶凿 皂葬赠 燥遭贼葬蚤灶 皂怎糟澡 皂燥则藻 澡蚤早澡 原 则藻泽燥造怎贼蚤燥灶 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽 憎蚤贼澡 糟造藻葬则 造蚤灶藻泽援 栽澡藻 皂藻贼澡燥凿 糟葬灶 遭藻 怎泽藻凿 枣燥则 糟造蚤灶蚤糟葬造 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶援
温同步与热滴片法获取早期染色体的改良方法，简化了 后放入 源益 冰箱 员援 缘 澡，不加任何收缩剂抑制剂，然后加
操作程序，取得良好效果，现报道如下。
入最终浓度为 园援 园圆 μ早 辕 皂造 培养液的秋水仙胺，猿苑益 培
员摇 材料与方法
养箱中继续培养 园援 缘 澡 后收获细胞。
员援 员摇 材料
员援 圆援 圆摇 细胞的收获与制片摇 将细胞培养物移入 缘 皂造 离心
的胰酶消化显带，郧蚤藻皂泽葬 染色，镜检。每次计数 员 园园园 指数无差异（ 孕 跃 园援 园缘），但实验组获得的早期染色体
个有核细胞中分裂相所占的比率即为有丝分裂指数；染 分裂相数较多，具有显著性差异（ 孕 约 园援 园缘）；与 月 组相
色体分期以 阅 组染色体深浅带对照人类细胞遗传学国 比，两组获得早期染色体分裂相数无显著差异（ 孕 跃 园援 园缘），
【 运藻赠 憎燥则凿泽】摇 悦澡则燥皂燥泽燥皂藻；悦澡则燥皂燥泽燥皂藻 遭葬灶凿蚤灶早；匀蚤早澡 原 则藻泽燥造怎贼蚤燥灶 遭葬灶凿蚤灶早；杂责藻糟蚤皂糟灶 澡葬灶凿造蚤灶早
摇 摇 常规的染色体 郧 显带分析是目前临床上诊断染色 员援 员援 圆摇 主要试剂摇 砸孕酝陨员 远源园 培养基（ 郧蚤遭糟燥 公司）；小
胞悬液滴至热玻片上（事先将载玻片平置于水浴锅沸水的 员援 圆援 源摇 统计学分析摇 各组检测所得数据均以均数 依 标
热蒸气上，吸管距离载玻片 圆 耀 猿 糟皂），待滴有细胞面干后 准差（ 曾珋依 泽 ）表示，计数结果采用 杂孕杂杂 员员援 园 统计软件
取下可立即进行 郧 显带处理。
包统计分析，组间均数比较采用 贼 检验。
者阻止收缩法来获得大量细长的早期染色体，但这些方 量胸苷（ 栽阅砸）同步法照参文献［圆］制片；实验组方法按下
法因操作步骤复杂，耗时长，所需成本太贵等诸多因素 列步骤进行。
的限制，长期以来给实验室实际应用带来困难。为此， 员援 圆援 员摇 细胞培养摇 每份样本培养 圆 瓶（ 每瓶含 员远源园 液
我室对改进高分辨染色体制备技术进行研究，建立了低 源 皂造、小牛血清 员 皂员、肝素抗凝血 园援 猿 皂员），培养至 源远 澡
员援 员援 员摇 样本来源摇 采集 猿园 份右江民族医学院 圆园园愿 级 管中，以 员 缘园园 则 辕 皂蚤灶 离心 远 皂蚤灶 收集细胞；加入预温 猿苑益
临床检验本科学生外周血样本，随机分为 猿 组，每组 员园 的 园援 园苑缘 皂燥造 辕 蕴 运悦员 低渗液后置于 猿苑益水浴箱中低渗处理
份。
圆圆 皂蚤灶；在离心前加入 猿颐 员 甲醇冰醋酸固定液 员 皂造 进行预
体病的主要检测手段，运用高分辨染色体技术可提高染 牛血清（ 中国医学科学院血液病研究所）；植物血球凝集
色体带纹分辨率，有助于识别染色体微小缺失及准确定 素（ 孕匀粤，上海伊华公司）；秋水仙胺（ 美国 杂蚤早皂葬 公司）；
位断裂点，检出常规 郧 显带染色体难以察知的一些染色 胸苷（ 栽阅砸，上海索莱宝生物科技有限公司）、缘 原 溴脱氧
【 关键词】摇 染色体摇 染色体显带摇 高分辫带摇 标本制备
栽澡藻 皂藻贼澡燥凿 则藻泽藻葬则糟澡 枣燥则 贼澡藻 责则藻责葬则葬贼蚤燥灶 燥枣 澡蚤早澡 原 则藻泽燥造怎贼蚤燥灶 责藻则蚤责澡藻则葬造 遭造燥燥凿 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻援 云耘晕郧 在澡蚤，匀哉粤晕郧 再怎葬灶 原 澡藻援 阅藻责葬则贼皂藻灶贼 燥枣 郧藻灶藻贼蚤糟泽，再燥怎躁蚤葬灶早 酝藻凿蚤糟葬造 悦燥造造藻早藻 枣燥则 晕葬贼蚤燥灶葬造蚤贼蚤藻泽，月葬蚤泽藻 郧怎葬灶早曾蚤 缘猿猿园园园，悦澡蚤灶葬援
际命名体制［ 陨杂悦晕（员怨怨缘）］标准进行，并计数各期分裂 但实验组的细胞分裂指数较 月 组高，差异具有显著性
相数，同时观察染色体分散质量及显带效果。
（ 孕 约 园援 园员）。
组别 粤组 月组 实验组
表 员摇 各组细胞有丝分裂指数与各期染色体分裂相数的比较
灶
分裂指数（ 豫 ）
贼值
中期染色体分裂相数（ 曾珋依 泽 ）
体缺陷，对提高各种染色体病的检出率及有关肿瘤染色 尿嘧啶（ 月则凿哉，上海伯奥生物科技有限公司 ）；胰蛋白酶
体研究和基因定位等方面都具有重要意义。现有的多 （ 杂蚤早皂葬，进口分装）及常规细胞培养及制片耗材等。
种［员 原 圆］高分辨染色体技术，主要是采用药物同步化法或 员援 圆摇 方法摇 粤 组用常规法参照文献［猿］制片；月 组用过
摇 摇 注：与实验组比较，葬：贼 越 园援 园猿，孕 " 园援 园缘；遭：贼 越 源援 猿，孕 ! 园援 园员；糟：贼 越 圆援 员源，孕 ! 园援 园缘；凿：贼 越 园援 园源，孕 " 园援 园缘。
圆援 圆摇 各组染色体分散质量及显带效果摇 采用冰湿玻片 滴片后按常规显带的 粤、月 两组标本早期染色体相互间 交叉重叠较多，分散不良（ 图 员）；而用热蒸气 原 过氧化 百度文库 法 制 片 的 实 验 组 早 期 染 色 体 重 叠 少，分 散 铺 展 较 好 （ 图 圆），可计数分析的分裂相增多，郧 显带清晰。图 猿 示中期分裂相 郧 显带效果。
员园
愿援 园怨 依 园援 猿圆葬
园援 园猿
苑源援 园园 依 猿援 猿猿
员园
源援 园缘 依 园援 员远遭
源援 猿园
员员援 源园 依 员援 苑愿
员园
愿援 园缘 依 园援 圆缘摇
缘员援 愿园 依 猿援 缘缘
早期染色体分裂相数（ 曾珋依 泽 ） 远援 怨园 依 员援 怨员糟
圆怨援 员园 依 员援 远园凿 圆愿援 苑园 依 圆援 缘愿摇
员援 圆援 猿摇 染色体 郧 显带及镜检摇 染色体 郧 显带制片用 圆摇 结果
热蒸气 原 过氧化氢法，即在热滴片后，直接用 猿园豫 的过 圆援 员摇 各组细胞有丝分裂指数与各期染色体分裂相数的
氧化氢处理标本 员园 皂蚤灶，自来水彻底冲洗后，用 园援 园圆缘豫 比较摇 由表 员 可知，实验组与 粤 组相比，两组细胞分裂