口蹄疫病毒粒子检测方法

常用方法

一、蔗糖/氯化铯梯度密度梯度超速离心法

原理：146S抗原在特定条件下分布在特定浓度的介质中，于259nm处产生最大紫外吸收峰（用OD259表示），OD259与146S浓度成正比。

操作步骤：将口蹄疫病毒样品置于蔗糖密度梯度中离心，在离心力的作用下，样品中的病毒粒子将沉降到相应的密度梯度层内，经紫外分光光度计259纳米检测时有最高吸收峰，而在其他级份层没有吸收峰。收集146S吸收峰级份，用紫外分光光度计进行检测，即可对146S含量进行定量。采用这种简单的方法可以快速测定出在紫外分光光度计图表中病毒峰区域的146S病毒粒子含量，并且可以用于监测生产过程中病毒和抗原的收获量，当然也可以用于成品疫苗中146S抗原含量的测定。

此法的优点是：简单，检测所需的成本低

此法的缺点是：受人为影响大，不能分型检测，且操作较为复杂，对仪器设备有较高要求。

二、高效液相色谱法

原理：以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入紫外检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

此法的优点是：设备自动化程度高，人为影响少，操作简便，重复性好，成本低且耗时短，可用于大批量连续检测。

此法的缺点是：不能区别不同血清型的抗原。

三、单克隆抗体夹心ELISA定量检测法

原理：制备针对口蹄疫病毒146S特异位点的单克隆抗体，然后包被ELISA板，应用酶联免疫吸附原理，根据显色情况判定146S病毒粒子的含量。

此法的优点是：检测速度快，适合大批量检测。

此法的缺点是：制备单克隆抗体成本较高，且过程复杂。针对不同毒株需要制备不同的单克隆抗体。

非常用方法

四、blab/c小鼠免疫抗体测定法

原理：给小鼠在注射抗原之后，免疫抗体水平的高低与146S抗体水平相关，使用液相阻断ELISA试剂盒检测抗体滴度。

此法的优点是：测定结果可以判断疫苗中不同血清型抗原的免疫应答，也可以评价疫苗成分，如佐剂、免疫增强剂等的对免疫应答的影响，是一种综合评价口蹄疫疫苗效力的方法此法缺点：本方法属于间接检测方法，且仍待完善，无法精确定量检测146S病毒粒子的含量。

五、补体结合实验

原理：病毒抗原与血清抗体发生特异反应形成复合物时，补体与该复合物结合而被消耗，溶血系统中没有游离补体将不发生溶血，试验结果显示阳性，将病毒做适当的连续稀释，根据最终阳性显示结果，从而确定病毒抗原量。然后经氟化碳处理除去12S抗原，或者超速离心获得146S抗原，间接或直接估测出主要的免疫原146S的量。

此法的优点是：检测时间短，成本和设备要求低。

此法的缺点是：检测精度低，结果准确性不高。