白细胞介素PPT讲稿
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白细胞介素课件
白细胞介素：
白细胞介素即是由多种细胞产生并作用于多
种细胞的一类细胞因子。
目前至少发现了38个白细胞介素，分别命名为IL-
1~IL38，功能复杂，成网络，复杂重叠;在免疫细胞的成 熟、活化、增殖和免疫调节等一系列过程中均发挥重要作 用，此外它们还参与机体的多种生理及病例反应。
白细胞介素的由来：
白细胞介素的分类
IL-11：il-11由骨髓基质细胞产生，分子量约为23kd，
是造血微环境中一个多功能的调节因子。
IL-12：il-12主要由b细胞和巨噬细胞产生；其分子是一
种异型二聚体，40kd（p40）和35kd(p35)的2个亚基通 过二硫键相连接。
IL-13:细胞来源：il-13由th2细胞产生，分子量约10kd；
生细胞因子，诱导LAK细胞产生。 （3）促进B细胞增殖和分泌抗体。
ຫໍສະໝຸດ Baidu
白细胞介素2生产工艺流程
•
发酵
• 工程菌为大肠杆菌。
• 种子用LB培养基；
• 发酵用M9CA培养基，30℃10小时，后
提高温度至42℃，诱导3小时。
分离纯化
包涵体制备：
离心收集，菌体悬于EDTA溶液中， 用超声波破碎细胞，后8000r/Min离 心，收集沉淀（包涵体和细胞碎片）
包涵体洗涤及裂解
用Tris-HCL洗涤3次，离心收集沉淀，用盐酸
胍变性，离心收集上清液。
凝胶过滤及复性： 上清过Sephacryl S-200柱，醋酸液洗脱，收
集洗脱峰。
干燥： 冷冻真空干燥。
工程菌构建流程
研究内容
目标基因克隆
研究方法
PCR，文库，化学合成
表达载体构建
酶切，连接
遗传转化与筛选 工程菌
显微镜下的白细胞介素
白细胞介素的分类
IL-1：又称淋巴细胞刺激因子。 IL-2：又称T细胞生长因子，TCGF IL-3：又称为多能集落刺激因子（multi-csf
）。
IL-4：由抗原或丝裂原刺激的cd4+t细胞产年，
活化的肥大细胞亦可产生il-4。
IL-5：由抗原活化的cd4+t细胞产生；肥大细
4.转化
转化：把外源基因导入宿主细胞的过程； 某一基因型细胞从周围介质中吸收另一基因型细胞
的DNA，使其基因型和表型发生相应变化的现象
大肠杆菌转化法-
感受态细胞制备：
CaCl2法
➢ 将培养液转入离心管中，冰上放置10 分钟，然后于4℃下离心10 分 钟。
➢ 弃去上清，用预冷的0.05mol/L 的CaCl2 溶液10ml 轻轻悬浮细胞， 冰上放置15-30 分钟后，4℃下，离心10 分钟。
胞也能产生il-5。
IL-6：可由多种细胞合成，包括活化的t细胞
和b细胞、单核－巨噬细胞、内皮细胞、上皮 细胞以及成纤维细胞等。
白细胞介素的分类
IL-7 ：il-7是由骨髓基质细胞分泌的糖蛋白，分子量为
25kd；其基因位于第8号染色体。
IL-8 ： il-8主要由单核－巨噬细胞产生；其他如成纤维细
胞、上皮细胞、内皮细胞、肝细胞等亦可在适宜的刺激条 件下产生il-8。
IL-9：细胞来源：il-9主要是由th细胞产生，在人和实验
鼠的体内都可以自我合成。
IL-10 1、细胞来源：il-10的分子量为35～40kd，通常
为二聚体；主要由th2细胞产生，也可由单核细胞、角质 细胞及活化的b细胞产生。
酶切体系组成：目标和质粒DNA，缓冲液， 限制性内切酶。
反应条件：适宜温度(37℃)，1小时以上。 终止反应：加热；加入EDTA，螯合镁离子。 电泳检查：酶切完全性。
3.连接反应
概念： DNA 双链上相邻的3′-羟基和5′-磷酸基因
共价结合形成3′-5′-磷酸二酯键，使原来 断开的DNA缺口重新连接起来。 连接体系：载体片段与基因片段，缓冲液， 连接酶。 连接反应：16℃-26℃，数小时，或过夜。 终止反应：在70℃加热10分钟。
IL-15 ：il-15是新发现的一种因子，可由活化的单核－
巨噬细胞、表皮细胞和成纤维细胞等多种细胞产生。
白细胞介素2(IL-2)
细胞来源：主要由T细胞产生。又称T细胞生
长因子。
作用方式：以自分泌和旁分泌方式发挥效应。 主要生物学功能：
（1）活化T细胞，促进细胞因子产生 （2）刺激NK细胞增殖，增强NK杀伤活性及产
白细胞介素（interleukin,IL）最初是指由白
细胞产生又在白细胞间发挥作用的细胞因子， 虽然后来发现白细胞介素可由其他细胞产生,也 可作用于其他细胞，这一名称仍被沿用。
在1979年第二届国际淋巴因子专题讨论会上，
白细胞介素将来自单核-巨噬细胞、T淋巴细胞 所分泌的某些非特异性发挥免疫调节和在炎症 反应中起作用的因子称为白细胞介素 （interleukin，IL）。
PCR (Polymerase chain reaction)
聚合酶链式反应：在DNA聚合酶催化下，对特
定的DNA序列进行的复制反应 本质：生物体DNA复制原理在体外合成DNA 发明者：Mullis，生物技术革命的象征，
1993年获得诺贝尔奖
2.酶切反应
概念：在特异位点上催化dsDNA分子的断 裂，产生相应的限制性片段。
外源基因导入与培养 新性状、功能、物质
工程菌构建的目标
获得质粒能稳定遗传、基因能高效和
定向表达的载体，确保药物的生物活 性。
大 肠 杆 菌 构 建 技 术
大肠杆菌
• 细胞：G－，单细胞，杆状。鞭毛、无芽孢、
一般无荚膜。裂殖。
• 菌落:白色至黄白色，光滑，直径2－3mm。
大肠杆菌构建技术
1.PCR扩增
加入连接反应产物：混匀，置冰上30分钟。
热击：42℃，90s； 置冰上，1－2分钟。
扩增培养：加入LB培养基，37℃，45分钟。
涂平板：含有抗生素的LB固体培养基上。
筛选培养：37℃，出现菌落。
5.筛选与鉴定
转化后的细胞类型
非转化子：没有导入外源DNA的非转化宿主细胞 转化子：导入外源DNA的转化细胞 非重组子：仅含有空载体分子的转化子 重组子：含有重组DNA分子的转化子 目标重组子：含有连接正确的重组分子（目的） 非目标重组子：不含目的基因重组子
其基因位于第5号染色体上，与il-4基因紧密连接。il-13 分子的氨基酸顺序与il-4有20％～25％的同源性，在功能 上也与il-4有许多相似之处。
白细胞介素的分类
IL-14; il-14由t细胞分泌，其成熟形式含468个氨基酸残
基，可刺激活化的b细胞增殖，抑制丝裂原诱导的b细胞分 泌免疫球蛋白。
白细胞介素：
白细胞介素即是由多种细胞产生并作用于多
种细胞的一类细胞因子。
目前至少发现了38个白细胞介素，分别命名为IL-
1~IL38，功能复杂，成网络，复杂重叠;在免疫细胞的成 熟、活化、增殖和免疫调节等一系列过程中均发挥重要作 用，此外它们还参与机体的多种生理及病例反应。
白细胞介素的由来：
白细胞介素的分类
IL-11：il-11由骨髓基质细胞产生，分子量约为23kd，
是造血微环境中一个多功能的调节因子。
IL-12：il-12主要由b细胞和巨噬细胞产生；其分子是一
种异型二聚体，40kd（p40）和35kd(p35)的2个亚基通 过二硫键相连接。
IL-13:细胞来源：il-13由th2细胞产生，分子量约10kd；
生细胞因子，诱导LAK细胞产生。 （3）促进B细胞增殖和分泌抗体。
ຫໍສະໝຸດ Baidu
白细胞介素2生产工艺流程
•
发酵
• 工程菌为大肠杆菌。
• 种子用LB培养基；
• 发酵用M9CA培养基，30℃10小时，后
提高温度至42℃，诱导3小时。
分离纯化
包涵体制备：
离心收集，菌体悬于EDTA溶液中， 用超声波破碎细胞，后8000r/Min离 心，收集沉淀（包涵体和细胞碎片）
包涵体洗涤及裂解
用Tris-HCL洗涤3次，离心收集沉淀，用盐酸
胍变性，离心收集上清液。
凝胶过滤及复性： 上清过Sephacryl S-200柱，醋酸液洗脱，收
集洗脱峰。
干燥： 冷冻真空干燥。
工程菌构建流程
研究内容
目标基因克隆
研究方法
PCR，文库，化学合成
表达载体构建
酶切，连接
遗传转化与筛选 工程菌
显微镜下的白细胞介素
白细胞介素的分类
IL-1：又称淋巴细胞刺激因子。 IL-2：又称T细胞生长因子，TCGF IL-3：又称为多能集落刺激因子（multi-csf
）。
IL-4：由抗原或丝裂原刺激的cd4+t细胞产年，
活化的肥大细胞亦可产生il-4。
IL-5：由抗原活化的cd4+t细胞产生；肥大细
4.转化
转化：把外源基因导入宿主细胞的过程； 某一基因型细胞从周围介质中吸收另一基因型细胞
的DNA，使其基因型和表型发生相应变化的现象
大肠杆菌转化法-
感受态细胞制备：
CaCl2法
➢ 将培养液转入离心管中，冰上放置10 分钟，然后于4℃下离心10 分 钟。
➢ 弃去上清，用预冷的0.05mol/L 的CaCl2 溶液10ml 轻轻悬浮细胞， 冰上放置15-30 分钟后，4℃下，离心10 分钟。
胞也能产生il-5。
IL-6：可由多种细胞合成，包括活化的t细胞
和b细胞、单核－巨噬细胞、内皮细胞、上皮 细胞以及成纤维细胞等。
白细胞介素的分类
IL-7 ：il-7是由骨髓基质细胞分泌的糖蛋白，分子量为
25kd；其基因位于第8号染色体。
IL-8 ： il-8主要由单核－巨噬细胞产生；其他如成纤维细
胞、上皮细胞、内皮细胞、肝细胞等亦可在适宜的刺激条 件下产生il-8。
IL-9：细胞来源：il-9主要是由th细胞产生，在人和实验
鼠的体内都可以自我合成。
IL-10 1、细胞来源：il-10的分子量为35～40kd，通常
为二聚体；主要由th2细胞产生，也可由单核细胞、角质 细胞及活化的b细胞产生。
酶切体系组成：目标和质粒DNA，缓冲液， 限制性内切酶。
反应条件：适宜温度(37℃)，1小时以上。 终止反应：加热；加入EDTA，螯合镁离子。 电泳检查：酶切完全性。
3.连接反应
概念： DNA 双链上相邻的3′-羟基和5′-磷酸基因
共价结合形成3′-5′-磷酸二酯键，使原来 断开的DNA缺口重新连接起来。 连接体系：载体片段与基因片段，缓冲液， 连接酶。 连接反应：16℃-26℃，数小时，或过夜。 终止反应：在70℃加热10分钟。
IL-15 ：il-15是新发现的一种因子，可由活化的单核－
巨噬细胞、表皮细胞和成纤维细胞等多种细胞产生。
白细胞介素2(IL-2)
细胞来源：主要由T细胞产生。又称T细胞生
长因子。
作用方式：以自分泌和旁分泌方式发挥效应。 主要生物学功能：
（1）活化T细胞，促进细胞因子产生 （2）刺激NK细胞增殖，增强NK杀伤活性及产
白细胞介素（interleukin,IL）最初是指由白
细胞产生又在白细胞间发挥作用的细胞因子， 虽然后来发现白细胞介素可由其他细胞产生,也 可作用于其他细胞，这一名称仍被沿用。
在1979年第二届国际淋巴因子专题讨论会上，
白细胞介素将来自单核-巨噬细胞、T淋巴细胞 所分泌的某些非特异性发挥免疫调节和在炎症 反应中起作用的因子称为白细胞介素 （interleukin，IL）。
PCR (Polymerase chain reaction)
聚合酶链式反应：在DNA聚合酶催化下，对特
定的DNA序列进行的复制反应 本质：生物体DNA复制原理在体外合成DNA 发明者：Mullis，生物技术革命的象征，
1993年获得诺贝尔奖
2.酶切反应
概念：在特异位点上催化dsDNA分子的断 裂，产生相应的限制性片段。
外源基因导入与培养 新性状、功能、物质
工程菌构建的目标
获得质粒能稳定遗传、基因能高效和
定向表达的载体，确保药物的生物活 性。
大 肠 杆 菌 构 建 技 术
大肠杆菌
• 细胞：G－，单细胞，杆状。鞭毛、无芽孢、
一般无荚膜。裂殖。
• 菌落:白色至黄白色，光滑，直径2－3mm。
大肠杆菌构建技术
1.PCR扩增
加入连接反应产物：混匀，置冰上30分钟。
热击：42℃，90s； 置冰上，1－2分钟。
扩增培养：加入LB培养基，37℃，45分钟。
涂平板：含有抗生素的LB固体培养基上。
筛选培养：37℃，出现菌落。
5.筛选与鉴定
转化后的细胞类型
非转化子：没有导入外源DNA的非转化宿主细胞 转化子：导入外源DNA的转化细胞 非重组子：仅含有空载体分子的转化子 重组子：含有重组DNA分子的转化子 目标重组子：含有连接正确的重组分子（目的） 非目标重组子：不含目的基因重组子
其基因位于第5号染色体上，与il-4基因紧密连接。il-13 分子的氨基酸顺序与il-4有20％～25％的同源性，在功能 上也与il-4有许多相似之处。
白细胞介素的分类
IL-14; il-14由t细胞分泌，其成熟形式含468个氨基酸残
基，可刺激活化的b细胞增殖，抑制丝裂原诱导的b细胞分 泌免疫球蛋白。