同工酶实验宁波大学
大斑马鱼5种同工酶表达的初步分析
稳压稳流电泳仪 （ 北京六一仪器 厂生产 ） Ｄ Ｙ—Ｉ型垂 和 Ｄ Ｉ Ｉ 直平板电泳槽进行 电 泳。加样 前在 １０ ０ Ｖ电压 下预 电泳
３ ｍｎ 经过预 电泳后 每个 加样 孑 加样 ４ 。浓缩 胶 电 ０ ｉ， Ｌ ０
组 织器官 ， １ 按 ：３加入 ０ １ｍｏ Ｌ（ Ｈ ＝７ ０ 磷 酸缓 冲 ． ｌ ｐ ／ ．） 液， 在冰浴 条件下用 Ｄ ８ Ｙ一 ９Ⅱ型 电动玻璃匀 浆机进行组 织匀浆破碎 。匀 浆 后在 高 速低 温离 心 机 中 以 １ ０ ／ ５０ ０ ｒ
ｍｉ ｎ的速度离心 ２ ｉ， ５ ｍ ｎ 取上 清液按照 １ １的 比例加入 ：
泳时电压为 １０ 指示 剂完全进 入 分离胶 后升 高电压 至 ５ Ｖ，
２ ０ 总 电泳时问根据不 同酶而定 。整个 电泳过程 在 ４ ０ Ｖ， ℃ 冰箱内进行 。
１ ４ 染 色 、 色 ． 脱
在构建 中， 以被 喻为 “ 所 带有 星条 的 明星 鱼 ” 。在斑 马 …
鱼 品系选育构建 方 面国外 已经开 始 了较系统 的研 究 Ｊ ２， 国内还没有 品 系选 育 的报 道。 同工酶 作为 一 种生 化 指 标， 已经广泛应 用到 生物 的物种 及杂种 鉴定 ’ 、 亲缘 关 系的 比较及 系统分类 ［６、 ５ １胚胎发 育过程 中的基 因表 达与 ， 调控等研究 。本实验通过对 大斑 马鱼 ５种组织器官 ５ 种酶的研究 ， 旨在为 品 系选育 和发育 生物 学 的进 一步研 究提供参考 。
１ ２ 样 品制 备 ，
编码酶从 阴极到 阳极 的迁移顺序命名 为 １２、……。 、３
２ 结果 与讨论
电泳 图谱见 图 １ ～图 ５ 图中 只表示 酶 的条带 数 ， （ 不 表示基 因的位点 ） 。
《宁波大学学报》(理工版)2008年总目次
一
杰 （ ０ ０） Ｉ： ８
（１： ８ ０ ４） 类次线性算子在齐型 广义 Ｏｌｚ ａ ｐｎｔ空 间上 的加权有 界性 ………………………………张松艳 ，陈琴琴 ｒｃ— ｍ ａａ ｉ Ｃ ｏ 非线性奇异 Ｈ ｍ ｌｎ ａ ｉｏ 系统边值 问题解的存在性与唯一性… …… ………………………… ……… 李 良，綦建刚 （ ： ８ ｔ １ ０ ９）
（ ：３ ） 高校饮食服 务直接成本核算及 管理研究 ……………………………………………………张国良，黄惠琴 ， 陈灵枭 １ １ １
杭州城 市生 态环境质量变化及可持续发展对 策……………………………………………龚小虹 ，李加林 ，袁红辉 （ ： ３ １ ｔ５）
宁波市生活垃圾粒度分布特性研究 一 …………一………………………………… …………………李 兵 ，董志颖 （ ： ４ ） １ １１
重金属离子对中华大蟾蜍蝌 蚪红 细胞 核异常 的诱导 …………………………………………………张永靖 ， 刘
（ ０ ０） 用Ｂ Ｐ神经网络模型评价养殖区水域的富营养化—— 以湖州地 区为例……………赵汉取 ，韦 肖杭 ，姚伟忠 ，等 １：３
１：３ 岱衢族大黄鱼不 同组织 的同工酶 潜……………………………¨ …………………………管丹冬 ，李明云 ，叶帅东 （ ０ ４） 。
第 ２ 卷 第 ４期 １
２０ ０８年 ｌ ２月
宁 波 大 学 学 报 （理 工 版 ）
Ｊ Ｒ ＡＬＯ ＮＧ Ｏ Ｕ Ｖ Ｒ Ｉ Ｙ（ Ｅ ＯＵ Ｎ ＦＭ Ｂ ＮＩ Ｅ Ｓ Ｔ ＮＳ Ｅ）
Ｖ １ ｌ Ｎ ｏ４ ｂ． ２ ． Ｄｅ ． ２ ０ ｃ ０８
甲壳类同工酶研究进展
甲壳类同工酶研究进展
母昌考;王春琳
【期刊名称】《水产科学》
【年(卷),期】2003(022)004
【摘要】@@ 虾蟹类在分类学上属十足目(Decapoda)甲壳动物,在水产养殖业中占有重要的地位.20世纪60年代以来,随着众多经济虾蟹类(如罗氏沼虾、对虾、中华绒螯蟹)人工育苗的成功,使其养殖业发展迅猛,身价倍增.
【总页数】3页(P42-44)
【作者】母昌考;王春琳
【作者单位】宁波大学,海洋与水产系,浙江,宁波,315211;宁波大学,海洋与水产系,浙江,宁波,315211
【正文语种】中文
【中图分类】S966.1
【相关文献】
1.甲壳类年龄鉴定方法研究进展 [J], 蒋瑞;刘必林;张健;陈新军;倪震宇;林静远
2.甲壳类水产品氨基脲残留来源研究进展 [J], 程波;舒秀君;宋蓓;任源远;韩刚;穆迎春;马兵;宋怿
3.甲壳类水产动物蜕壳研究进展 [J], 杨成聪; 戴振炎; 王爱民; 刘飞; 田红艳; 杨文平; 於叶兵; 惠文杰
4.甲壳类水产品中氨基脲研究进展 [J], 朱盼盼;邢丽红;李兆新;孙海新;孙晓杰;郑旭
颖;张梦婷
5.甲壳类水产品变质问题和低温保鲜及其辅助技术的研究进展 [J], 王芳;周国燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
岱衢族大黄鱼不同组织的同工酶谱
第２卷 第１ １ 期 ２０ ０ ８年 ３月
宁 波 大 学 学 报 （理 工 版 ）
Ｊ ＯＵＲＮＡＬＯＦＮ１ ＮＧＢ Ｕ Ｉ ＲＳ Ｔ （ Ｏ Ｎ ＶＥ Ｉ Ｙ ＮＳＥ ） Ｅ
Ｖ １ Ｎｏ １ ｂ． ２１ ．
Ｍａ． ２ ｔ ００８
Hale Waihona Puke 后分装 ， 即用于 电泳 分析或 放入 一８ 立 ３℃超 低温冰 箱 中保存 备用 ．
１２ 电 泳 ．２
采 用不 连 续 垂 直 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电泳 法 ．分
离胶浓度为 ８ ％（Ｈ８ ） 浓缩胶浓度为 ３ ％（Ｈ ． ｐ ． ， ２ ９ ． ｐ ６
６７．电极缓 冲 液 为 Ｔｉ甘 氨酸 ，Ｔ ． １ ｒ一 ｓ Ｇ，ｐ －；采 Ｈ８３ Ｄ Ｙ２ Ｙ －Ｃ型 稳压 稳流 电泳 仪 ， Ｙ Ｚ２ Ｄ型 垂直 Ｄ Ｃ 一４
维普资讯
第１ 期
管 丹 冬 ．等 ：岱 衢 族 大 黄 鱼 不 同组 织 的 Ｈ工 酶 谱
３ ５
１２ 方 法 ．
表 １ 岱 衢 族 大 黄 鱼检 测 的酶 类 及 其 缓 冲 系统
１ ． 样 品制备 １ ２
准确 称取 ９种组 织 ，以 １ ： 比例（ ３的
不稳定的 区带外 ，其他酶类在各组织 中都显示出清晰稳 定的酶谱 ，且这些酶在表型 、分布和活 性上均表现 出高度的组织特异性 ，与各组织的生理功能相一致．
关键 词 ：岱衢 族 大黄 鱼 ； 同工酶 ；组 织特 异性 表 达
中图分 类号 ：Ｑ９ ４６ ；￥ ６ ． ２文 献标 识码 ：Ａ ５． ２ ９ ５３ ２
方 法 ，研 究 分析 了岱衢 族 大黄 鱼眼 睛 、肌 肉、肝脏 、肾脏 、脾脏 、心脏 、胸鳍 、鳃 和 脑 ９种 组 织中ｌ ６种 同工酶（ ＤＨ、Ａ Ｌ ＤＨ、ＭＤＨ、ＭＥ ＯＤ、Ｐ 、Ｓ ＯＤ、Ｅ Ｔ、Ｇ Ｓ ＡＤ、ＡＬ Ａ Ｐ ＤＨ、Ｓ Ｄ、 Ｐ、 Ｔ 、Ｆ Ｃ
实验四 同工酶分析
+
+ ○
○
+ ○
2
【实验原理】—聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 由单体丙烯酰胺（Acr）和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺 （Bis）在加速剂 N,N,N,N-四甲基乙二胺（TEMED）和 催化剂过硫酸铵（AP）的作用下聚合交联成三维网状结 构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝 胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE)
5
【实验原理】—聚丙烯酰胺凝胶电泳
6
【实验原理】—过氧化物同工酶分析
1.同工酶 凡能催化同一种化学反应，但其分子结 构和带电性质不同的一组酶称同工酶。
植物组织中的同工酶是基因表达的产物。 在研究植物基因调控与生长发育、与环境条 件的关系，以及许多生理生化和遗传问题时， 常常需要分析同工酶谱的差异。
10
【实验方法与步骤】
2.样品制备
称取小麦幼苗叶片0.5 克，放入研钵内，加 pH8.0 样品提取液1mL，于冰浴中研成匀浆，转入 离心管，在高速离心机上以 8000rpm 离心 10 分钟， 取上清液，加入等量的上样缓冲液，混匀，即为 样品液。
11
【实验方法与步骤】
3.上样
30-50μL
12
【实验方法与步骤】
实验四 过氧化物同工酶分析
【实验目的】
掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）技术的原理和
操作方法。 掌握PAGE法分离过氧化物同工酶的原理和方法。
1
【实验原理】—聚丙烯酰胺凝胶电泳
1.电泳概念 带电粒子在电场中向与其电性相反的 电极移动的现象。如：琼脂糖凝胶电泳、 聚丙烯酰胺凝胶电泳、毛细管电泳等。
实验十 同工酶分析
实验四同工酶分析同工酶概述酶是以蛋白质为主要成分的生物催化剂。
在生物体内，有一些酶催化相同的反应，但其结构不同。
它们对底物的浓度、pH、温度等的最适要求不同，酶活力的调控反应及其所在的细胞分布也不一样。
把催化相同反应而结构和理化性质不同的酶的分子类型称为同工酶（isozyme）。
同工酶概念的提出，揭示了不同生物、同一生物不同器官和不同组织起源的酶可作用于同一底物，催化相同的反应，但在其他性质方面可以不尽相同。
大量研究表明，同工酶在生物界是广泛存在的。
在动植物和微生物体中、同一物种的不同个体、同一个体的不同器官、组织和细胞、同一细胞的不同部位、生长发育的不同阶段、不同的代谢条件下，都有不同的同工酶分布。
现在已发现的酶中，有一半以上的酶已经发现有同工酶存在。
可以进行同工酶分析的酶已有100多种。
不同同工酶可以根据电泳迁移率予以区别和编号，以向阳极方向泳动最快的编为同工酶1。
从分子结构上看，同工酶的形成有以下学说或原因：（一）亚单位结构学说亚单位结构学说是研究同工酶理论并对作用机理阐述的较为透彻的学说之一。
该学说认为同工酶是由不同亚基按不同方式结合而成的。
这个学说有广泛的实验证据。
如已经证明乳酸脱氢酶（LDH）是由A、B两个亚基，按不同比例结合成的四聚体，所以有5种同工酶：LDH1（A4）、LDH2（A3B1）、LDH3（A2B2）、LDH4（A1B3）、LDH5（B4）。
（二）不同基因编码由不同的基因或等位基因编码会形成一级结构完全不同或有个别氨基酸残基不同的多肽链。
因而产生同工酶。
由不同基因引起的同工酶存在于同一物种的所有个体中，而由等位基因引起的同工酶以一定比率存在于同一族中。
（三）单一亚单位聚合程度不同有些同工酶的亚单位是完全相同的，如胆碱脂酶（ChE），但不同的酶分子中，亚基数目不同，这就形成分子量不同的5种同工酶。
经研究发现，目前发现的100多种同工酶，其组成比例不同，但以单体（26%）、二聚体（52%）、四聚体（20%）较多，三聚体极少。
矿产
矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。
同工酶检测原理
同工酶检测是一种常用的生物学实验技术，用于检测特定分子的存在和浓度。
其原理基于同工酶的特异性反应。
同工酶是指在酶的催化作用下，对于同一底物具有相同的催化活性，但其结构或电荷可能有所不同的酶。
同工酶的存在是由于基因突变或多态性引起的。
同工酶检测的步骤如下：
1. 提取样品中的酶：首先，从待检测的样品中提取出目标酶。
2. 准备底物：选择适当的底物，该底物在酶的催化下会发生特定的反应。
3. 反应：将提取的酶与底物一起反应，使其发生催化作用。
4. 分离产物：通过某种方法（如电泳）将反应产物分离开来。
5. 可视化：使用某种染色剂或显色剂，将分离的产物可视化。
6. 分析结果：根据产物的分离情况和可视化结果，判断样品中是否存在目标酶，并确定其浓度。
同工酶检测的原理是基于同工酶的特异性反应。
由于同工酶的结构或电荷可能有所不同，因此它们对于特定底物的催化活性也可能有所不同。
通过检测底物的反应产物，可以确定样品中是否存在目标酶，并且可以根据产物的浓度来估计目标酶的浓度。
细胞色素P450同工酶2C9及维生素K环氧化物还原酶亚单位1基因多态性对华法林用量的影响
中国乡村医药细胞色素P450同工酶2C9及维生素K环氧化物还原酶亚单位1基因多态性对华法林用量的影响应建波孙浩华法林为临床常用的抗凝药，主要通过抑制肝脏维生素K环氧化物还原酶亚单位1基因（VKORC1）将氧化性维生素K还原为还原型维生素K，阻止凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的活化，达到抗凝血目的[1]。
华法林抗凝效果常以国际标准化比值（INR）和凝血酶原时间（PT）作为检测指标。
如何正确使用华法林，合理调整用量，已成为困扰临床医生的难题。
VKORC1和细胞色素P450同工酶2C9（CYP2C9）基因多态性是影响华法林剂量个体差异大的主要因素[2]。
本文探讨CYP2C9及VKORC1的基因分布情况及其对华法林用量的影响。
1 资料与方法1.1 对象收集2014年3月至2016年10月在宁波大学医学院附属医院心内科服用华法林的患者70例，其中急性冠脉综合征40例（57.1%），心脏瓣膜病30例（42.9%）。
排除有肝、肾功能不全，明确的出血性疾病、血液病、凝血功能障碍等。
1.2 方法1.2.1 试剂与仪器华法林（上海信谊药厂有限公司，2.5mg/片）；人类CYP2C9和VKORC1基因多态性检测试剂盒（P C R-荧光探针法）（武汉友芝友医疗科技有限公司）。
AB I 7500荧光定量P CR仪（美国应用生物系统公司），台式高速离心机（上海圣科仪器设备有限公司）。
作者单位：315012 宁波市妇女儿童医院药剂科（应建波）；宁波大学医学院附属医院药剂科（孙浩）通信作者：应建波，Email:yjb20080808@ 1.2.2 血标本收集收集患者静脉乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝全血3ml，检测CYP2C9、VKORC1基因多态性及INR值。
1.2.3 INR值测定取患者外周EDTA抗凝全血进行INR值测定，由医院检验科生化室进行。
使用日本东亚全自动血凝分析仪，用透射比浊法测定。
2 结果2.1 不同基因型患者基本情况（表1）不同基因型患者的年龄、体重、身高等接近。
岱衢族大黄鱼不同组织的同工酶谱
岱衢族大黄鱼不同组织的同工酶谱管丹冬;李明云;叶帅东【期刊名称】《宁波大学学报（理工版）》【年(卷),期】2008(021)001【摘要】于2006年11月,在象山港采集30尾养岱衢族大黄鱼,采用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳方法,研究分析了岱衢族大黄鱼眼睛、肌肉、肝脏、肾脏、脾脏、必脏、胸鳍、鳃和脑9种组织中16种同工酶(LDH、ADH、MDH、ME、SOD、POD、EST、GAD、ALP、ATP、FDH、SCD、IDH、GDH、ACP、GcDH)的表达情况,发现除IDH、GDH、AOP、GcDH4种酶只显示微弱且不稳定的区带外,其他酶类在各组织中都显示出清晰稳定的酶谱,且这些酶在表型、分布和活性上均表现出商度的组织特异性,与各组织的生理功能相一致.【总页数】5页(P34-38)【作者】管丹冬;李明云;叶帅东【作者单位】宁波大学,生命科学与生物工程学院,浙江,宁波,315211;宁波大学,生命科学与生物工程学院,浙江,宁波,315211;宁波大学,生命科学与生物工程学院,浙江,宁波,315211【正文语种】中文【中图分类】Q954.62;S965.322【相关文献】1.基于计算机视觉的岱衢族大黄鱼选育群体外形特征模式识别方法 [J], 余心杰;吴雄飞;沈伟良2.岱衢族大黄鱼冻藏过程中感官与质构的回归分析 [J], 李娟;桑卫国;张丹3.闽-粤东族与岱衢族养殖大黄鱼的遗传多样性研究 [J], 黄良敏;谢仰杰;苏永全4.岱衢族和闽——粤东族大黄鱼生长对比试验 [J], 陈琳;张达云;郑凯宏;张文剑;赖其昌5.岱衢族大黄鱼亲鱼室内越冬促熟及早繁培育试验 [J], 王雪磊;沈伟良;黄琳;徐胜威;吴雄飞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中国绿螂组织中同工酶表达的差异
中国绿螂 （ ｌｕｏ ｙ ｈｎｎｉ） Ｇａ ｃｍ ａｃｉ ｓ 俗称大头蛏 ， ｅ ｓ 软体动 物 ， 鳃 纲 （ ａ ｌｂａｃｉ） 绿 螂科 （ ｌ ｃｍ ｉａ ） 属瓣 Ｌｍｅ ｉ ｎｈａ 、 ｌｒ Ｇａ ｏ ｙ ｅ 、 ｕ ｄ 绿 螂属 （ ｌｕｏ ｙ ） 主要 分 布在 中 国南 方沿 海 和印 度 、 Ｇａ ｃｍ ａ ， 菲律宾 ， 肉可食用 ， 其 也常用作 养殖虾 、 的饵 料 ， 有一 蟹 具 定 的经济价值。对于 中国绿螂 的研究 目前 仅有生态 学方 面 的报道… 。本 文对 中国绿 螂不同组织 中的同工酶表 达
时 以 １ （／ Ｌ 的 比例 （ 肉为 １ ） ：３ ｇ ｍ ） 肌 ：５ 加入 ０ １ｍ ｌＬ ． ｏ ／
Ｔｉ Ｈ Ｉ ｒ ｓ— Ｃ 缓冲液 （ Ｈ７ ０ ， ｐ ． ） 电动玻璃匀浆 器冰浴匀浆 ，
４ １ ０ ｒ ｎ 心 ２ ｎ 取上清液 ， ℃ ５ ０ｒａ 离 ０ ／ｉ ０ｍｉ， 加入适量 ４ ％的 ０ 甘油 ， 一 Ｏ 置 ４ ℃保存 以供 分析 。
都表现为 ４条酶带 （ １ 。 图 ）
２ ２ 苹 果酸酶 （ Ｅ， ． ． ． ． ．０ ． Ｍ Ｅ Ｃ １ １ １４ ） 中国绿螂 ＭＥ同工酶 由３个位点编码 ， 各组织中都表
现为 ３个酶带区 ， 中 Ｍ ３酶带 区各组 织 都表现 为 ２ 其 Ｅ一
条酶带 ， 外套膜 中的酶活性较 弱。ＭＥ一１和 Ｍ Ｅ一 ２都有 １ 酶带 ， 条 但是 酶带 的迁移率 和酶活性有差异 （ ２ 。 图 ）
进行 了初步研究 ， 以期为 中国绿螂的研究积累基础资料。
１ 材料和 方法
１１ 材 料 ．
实验所用 中国绿 螂购 自宁波 三 江超 市 ， 共计 ２ ４只 ，
矿产
矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。
同工酶实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解同工酶的概念及其在生物体中的生物学意义；2. 掌握同工酶电泳技术的基本原理和方法；3. 通过同工酶电泳实验，观察和分析同工酶在样品中的分布情况。
二、实验原理同工酶是指具有相同催化功能，但氨基酸序列和分子结构不同的酶。
同工酶电泳技术是一种分离和鉴定同工酶的方法，其原理是利用同工酶在电场中的迁移速率差异，将其分离。
三、实验材料1. 实验样品：植物叶片、动物组织等；2. 电泳试剂：琼脂糖、溴酚蓝、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺等；3. 电泳仪器：电泳槽、电泳仪、凝胶成像系统等；4. 其他：移液器、吸管、剪刀、镊子等。
四、实验方法1. 样品制备：将实验样品研磨，加入适量提取液（如Tris-HCl缓冲液），在冰浴中匀浆，离心取上清液；2. 电泳凝胶制备：按照电泳试剂的配方，制备琼脂糖凝胶；3. 电泳样品制备：将提取液加入适量的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺，混合均匀后，加入适量的样品，制成样品胶；4. 电泳：将制备好的样品胶放入电泳槽中，加入电泳缓冲液，接通电源，进行电泳；5. 成像与分析：电泳结束后，取出凝胶，用凝胶成像系统拍照，分析同工酶的分布情况。
五、实验结果1. 通过电泳实验，观察到样品中存在多种同工酶；2. 不同样品的同工酶分布情况存在差异，说明同工酶在生物体中具有特异性；3. 同工酶的迁移速率与酶的分子量有关，分子量较小的酶迁移速率较快。
六、实验结论1. 同工酶在生物体中具有重要作用，其生物学意义包括催化、调控、信号传递等；2. 同工酶电泳技术是一种有效的分离和鉴定同工酶的方法；3. 本实验成功分离和鉴定了样品中的同工酶，为后续研究提供了基础。
七、实验讨论1. 实验过程中，样品制备和电泳操作应注意无菌操作，以避免污染；2. 电泳条件的选择对同工酶的分离效果有较大影响，应根据实验目的和样品特点进行优化；3. 同工酶的研究有助于揭示生物体的遗传、变异和进化规律。
八、实验总结本实验通过同工酶电泳技术，成功分离和鉴定了样品中的同工酶，验证了同工酶在生物体中的生物学意义。
8种经济鲍COⅠ基因全序列比较及系统发育分析
8种经济鲍COⅠ基因全序列比较及系统发育分析王礼闪;薛艳洁;房沙沙;刘晓【摘要】In order to study the phylogenetic relationships of eight species of abalone in different geographical populations, and to provide molecular biological basis for the identification of the species and the genetic breeding of abalone, this study used 8 kinds of abalone as the experimental materials.The whole sequences of 8 CO I genes were obtained by PCR amplification technique, the other 10 were found from GenBank.Through comparative analysis, it was found that the total length of CO I gene was 1542 bp, which encoded 513 amino acids, and the content of A + T was more than G + C.There were 526 mutation sites, and the mutation rate was 34.11%, while the variation rate of amino acid was 7.8%.From the analysis of genetic distance, it was found that the genetic distance of the same species was less than 0.010.The average genetic distance among different species of abalone was between 0.159-0.196.The phylogenetic tree was constructed to get the followingconclusions.Abalone genetic evolution was affected by the influence of geographical distribution, but there was no obvious geographical distribution characteristic between different abalone;and Haliotis rufescens and Haliotis fulgens, which were distributed in the Americas, had a close relationship with Haliotis discus hannai distributing in Asia.%为了研究不同地理种群的8种鲍的系统发育关系,以期为鲍属的种间鉴定与鲍的遗传育种提供分子生物学依据,以8种不同的鲍为实验材料.利用PCR扩增技术得到8条COⅠ基因全序列,10条其他鲍种的COⅠ基因全序列来源于GenBank.对18条的COⅠ基因全序列的比对分析表明,COⅠ基因的全序列共1542 bp,编码513个氨基酸;A+T的含量大于G+C的含量;在1542个碱基位点中存在526个变异位点,变异率为34.11%,氨基酸的变异率为7.8%.从遗传距离的分析中发现,同种鲍的遗传距离小于0.010;不同的鲍种之间的平均遗传距离在0.159~0.196之间;构建的遗传进化树分析得出:鲍的遗传进化受到地理分布的影响,但是不同地理种群的鲍之间并不存在明显的地理分布差异,其中美洲分布的红鲍和绿鲍与亚洲分布的皱纹盘鲍亲缘关系较近.【期刊名称】《生物学杂志》【年(卷),期】2017(034)002【总页数】5页(P36-39,81)【关键词】鲍;COⅠ基因;系统发育树【作者】王礼闪;薛艳洁;房沙沙;刘晓【作者单位】宁波大学海洋学院, 宁波 315211;宁波大学海洋学院, 宁波 315211;宁波大学海洋学院, 宁波 315211;宁波大学海洋学院, 宁波 315211【正文语种】中文【中图分类】Q78;S917.4鲍是隶属于软体动物门(Mollusca)腹足纲(Gastropoda)原始腹足目(Archaeogastropoda)鲍科(Haliotidae)鲍属(Haliotis)的一种具有极高食用和药用价值的贝类。
2020年宁波大学研究生自命题考试专业课741(生物化学1)
(答案必须写在考点提供的答题纸上)科目代码： 741 总分值： 150 科目名称： 生物化学1一、名字解释（共40分，每个4分）1．凯氏定氮2．构型和构象3．亲和层析4．多酶复合体5．同工酶6．诱导锲合学说7．柠檬酸穿梭8．磷酸戊糖途径9．丝氨酸蛋白酶10．焦磷酸测序二、单项选择题 （共40分，每题2分）1． 含有两个羧基的氨基酸是（ ）A ．谷氨酸B ．苏氨酸C ．丙氨酸D ．甘氨酸2． 硫酸铵沉淀蛋白质后，可选用透析法除去它，你选择哪一种试剂检查硫酸铵是否从透析袋中除净（ ）A ．茚三酮试剂B ．双缩脲试剂C ．奈氏试剂D ．酚试剂3．测定小肽氨基酸序列的最好办法是 （ ）A ．2,4-二硝基氟苯法B ．二甲氨基萘磺酰氯法C ．氨肽酶法D ．苯异硫氰酸酯法4．一个分子量为70000的蛋白质分子由两条长度相同的α-螺旋构成，每条α-螺旋的长度是多少? （设氨基酸残基的平均分子量为110）（ ）A ．50nmB ．47. 7nmC ．42. 5nmD ．30nm5．辅酶Q 是（ ） A ．NADH 脱氢酶的辅基 B ．电子传递链的载体C ．琥珀酸脱氢酶的辅基D ．脱羧酶的辅酶6．下列中心哪一种物质是体内氨的储存及运输形式（ ）A ．谷氨酸B ．谷氨酰胺C ．天冬氨酸D ．天冬酰胺7．维生素B 2可以在体内转变成辅酶（基）形式，参与酶促反应，其作用是（ ） A ．递氢作用 B ．递乙酰基作用 C ．转甲基作用 D ．转氨基作用考研专业课(答案必须写在考点提供的答题纸上)科目代码： 741 总分值： 150 科目名称： 生物化学18．具有四级结构的蛋白质特征是（ ）A ．分子中必定含有辅基B ．由两条或两条以上具三级结构的多肽链组成C ．每条多肽链都具有独立的生物学活性D ．依赖肽键维系四级结构的稳定性9．使蛋白质二级结构稳定的主要作用力是（ ）A ．盐键B ．疏水键C ．氢键D ．二硫键10．下列哪一个酶与丙酮酸生成糖无关？（ ）A ．果糖二磷酸酶B ．丙酮酸激酶C ．丙酮酸羧化酶D ．醛缩酶11．生物素是下列哪一个酶的辅酶? （ ）A ．丙酮酸脱氢酶B ．丙酮酸激酶C ．丙酮酸脱氢酶系D ．丙酮酸羧化酶12．嘌呤核苷酸的合成中，最先合成的是（ ）A ．GMPB ．IMPC ．AMPD ．XMP13．在64种遗传密码中，既作为起始密码，又作为蛋氨酸密码子的是（ ）A ．AUGB ．UAAC ．UAGD ．UGA14．需要引物分子参与生物合成反应的有（ ）A ．酮体生成B ．脂肪合成C ．糖异生合成葡萄糖D ．糖原合成15．下列有关酮体叙述，正确的是（ ）A ．酮体是肝内脂肪酸大量分解产生的异常中间产物，可造成酮症酸中毒B ．各组织细胞均可利用乙酰CoA 合成酮体，但以肝内合成为主C ． 酮体只能在肝内生成，肝外氧化D ． 酮体氧化的关键酶是乙酰乙酸转硫酶16．下列化合物中，除了哪一种以外都含有高能磷酸键（ ）A ．NAD ＋B ．ADPC ．NADPHD ．FMN17．下列关于化学渗透学说的叙述哪一条是不对的（ ）A ．电子传递链各组分按特定的位置排列在线粒体内膜上B ．各递氢体和递电子体都有质子泵的作用C ．H ＋返回膜内时可以推动ATP 酶合成ATPD ．线粒体内膜外侧H ＋不能自由返回膜内18．利用操纵子控制酶的合成属于哪一种水平的调节（ ）A ．翻译后加工B ．翻译水平C ．转录后加工D ．转录水平19．切除修复可以纠正下列哪一项引起的DNA 损伤（ ）A ．碱基缺失B ．碱基插入C ．碱基甲基化D ．胸腺嘧啶二聚体形成考研专业课(答案必须写在考点提供的答题纸上)科目代码： 741 总分值： 150 科目名称： 生物化学120．肌肉组织中肌肉收缩时需要的大部分能量以哪种形式储存（ ）A ．ATPB ．磷酸肌酸C ．GTPD ．磷酸烯醇式丙酮酸三、问答题 (共70分)1．信号转导中第二信使指的是什么？试举两个第二信使的例子。
同工酶鉴定技术
同工酶鉴定技术同工酶鉴定技术是一种常用的生物学实验技术，用于鉴定和比较不同生物体中的同工酶。
同工酶是指在同一种酶的功能相同但结构稍有差异的变种，其产生是由于基因突变或多态性所致。
同工酶鉴定技术可以帮助研究人员进行种属鉴定、亲缘关系分析、遗传多样性评估等。
同工酶鉴定技术基于酶的特异性反应，通过测定酶的催化活性来确定同工酶的存在和差异。
该技术通常包括以下步骤：1. 提取酶：首先，从待测样品中提取酶。
提取方法根据不同的酶类型和待测样品的特性而有所差异。
一般来说，可以通过细胞破碎、超声波处理或离心等方法将酶从细胞或组织中释放出来。
2. 准备底物：接下来，准备适当的底物，以便酶能够催化反应。
底物的选择取决于待测酶的特性和所需的反应结果。
3. 反应条件优化：为了获得准确可靠的结果，需要优化反应条件。
这包括反应温度、pH值、反应时间和底物浓度等。
4. 酶活性分析：将提取的酶与底物进行反应，观察并测量反应产物的生成情况。
不同的同工酶可能会产生不同的反应产物，通过对产物进行分析和比较，可以确定同工酶的存在和差异。
5. 数据分析和解释：根据实验结果，进行数据分析和解释。
可以使用统计学方法对同工酶数据进行聚类分析、相似性分析和群体结构分析等。
同工酶鉴定技术有许多优点。
首先，它是一种相对简单和经济的技术，不需要复杂的设备和昂贵的试剂。
其次，同工酶鉴定技术可以同时分析多个样品，提高工作效率。
此外，该技术还可以对不同种群、不同物种和不同组织进行比较和分析，为遗传学研究提供了有力的工具。
然而，同工酶鉴定技术也存在一些局限性。
首先，同工酶的鉴定结果受到环境因素的影响，如温度、pH值和离子浓度等。
其次，同工酶鉴定技术对样品数量和质量要求较高，样品来源的限制也会影响到结果的准确性。
此外，同工酶鉴定技术只能鉴定已知的酶，无法发现新的酶。
在实际应用中，同工酶鉴定技术被广泛应用于种属鉴定、亲缘关系分析和遗传多样性评估等领域。
例如，在生物多样性保护和物种保护中，同工酶鉴定技术可以用于鉴定和保护濒危物种。
同工酶的检测方法和原理
同工酶的检测方法和原理同工酶是指在氨基酸序列相同但功能不同的蛋白质之间的酶。
在不同的物种中，由于进化的压力和不同的生理需要，可能会形成具有相同功能但结构和氨基酸序列不同的酶，这些酶被称为同工酶。
同工酶的存在使得生物体能适应不同的环境和生理需求。
检测同工酶的方法可以分为直接方法和间接方法，下面将分别介绍。
直接方法主要是通过电泳技术进行测定，包括凝胶电泳和等电聚焦电泳。
1. 凝胶电泳：是一种常用的同工酶检测方法。
凝胶电泳是将样品分离成带状，在电场作用下，带状样品经由电泳从一端移动到另一端。
电泳分离的原则是根据同工酶的电荷和分子大小的差异。
凝胶电泳通常使用聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶，将样品施加在凝胶表面形成样品带状条带。
样品通过电泳迁移时，在凝胶中形成不同迁移距离的带状物，通过对不同带状物进行染色，可以检测到同工酶。
2. 等电聚焦电泳：等电聚焦电泳是根据同工酶的等电点差异进行分离。
等电聚焦电泳是一种高分辨率电泳技术，利用一个有缓冲液梯度的平板进行分离。
在平板两端施加电场，使样品中的蛋白质在不同的等电点处停留。
等电聚焦完成后，通过其他电泳技术如SDS PAGE等对蛋白质进行分离和检测。
间接方法主要是通过特定底物的测定来检测同工酶的活性。
1. 酶活性测定：通过酶的催化反应来测定同工酶的活性。
这种方法通常使用特定底物，底物与酶发生催化反应后，产生某种可检测的物质，例如：酶联免疫吸附测定法（ELISA）通过酶催化反应来检测同工酶的存在和活性。
2. 免疫学检测：使用特异的抗同工酶抗体进行检测。
抗体与酶形成复合物，然后通过标记系统如酶标记二抗、荧光标记等来检测复合物的存在和活性。
典型的方法如免疫印迹（Western Blotting）可以通过抗体和抗原相互作用来检测同工酶的存在。
同工酶检测的原理是通过不同的分离和检测技术来找到同工酶的差异。
这些差异可以是电荷、分子大小以及底物的反应等。
通过对同工酶的差异进行测定和分析，我们可以了解同工酶的分布、活性和功能等。
同工酶实验ppt课件
小心拔出样品梳（两端同时向外拔）。
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点样
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加样
样品迁 移方向
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五、电 泳
电压和电流：电压180V， 电流流18－30mA； 溴酚蓝跑至分离胶末端，电泳结束。
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六、染色与观察
揭去上面长型玻璃板，凝胶从短型玻璃板上剥离，慢慢地把 胶板冲入白瓷盘或大培养皿内，避光于37度摇床中染30min。
D储备液： 浓缩胶储备液：16g Acr，4g Bis，用双蒸水定容到 100ml，备用， 4℃可以保存1个月。
E储备液： 10% Aps（W/V）：1g定容到10ml，-20℃保存。 F储备液： 40%蔗糖：40g蔗糖溶解到60ml双蒸水中。 TEMED
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2.电泳缓冲液： Tris6.0g，28.8gGly 加双蒸水到900ml调节pH到8.3，定容到1000ml，使 用 时稀释10倍。
取上清液至新管，吸取其中150ul样品，加100ul 甘油和 10ul溴酚蓝，混匀之后即可点。
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三、分离胶的制备
储备液
配方表 A储备液 C储备液 双蒸水 E储备液
TEMED 总体积
用量（ml）2.5
5.0
12.5 100ul
10ul
20
TEMED最后一个加入，轻轻混匀，操作迅速。胶高度距样品凹玻璃板 下缘约1cm，用移液枪在凝胶表面沿短玻板边缘轻轻加一层水以隔绝空 气，并使胶面平整。
3.乳酸脱氢酶染色剂的配制 1M －乳酸钠 0.5ml NAD 25mg PMS 2mg NBT 15mg 0. 2M Tris－Hcl溶液（PH8.0）2ml 去离子水定容至50ml
遗传学实验
• 实验报告：
绘制所观察到的分散较好的唾液腺染色 体图像。
实验四：核型分析
• 实验目的：
掌握骨髓细胞染色体标本的制备技术； 了解和掌握染色体核型分析的方法。
• 实பைடு நூலகம்原理：
秋水仙素是一种生物碱，它能抑制细胞分裂时 纺锤体的形成，使染色体不走向两极而被阻止在分 裂中期，这样细胞就不能继续分裂，从而产生染色 体数目加倍的核。若染色体加倍的细胞继续分裂， 就能形成多倍性的组织。通过一定的方法，将染色 体制成片子，就能在显微镜下观察和鉴定染色体的 数目。
后期II： 着丝粒纵裂，姐妹染色单体分开。
末期：染色体解旋，核膜重建等。
实验报告
• 根据你所观察的结果绘制蝗虫精巢减数分
裂过程中的染色体图像
实验二：果蝇杂交实验
1、果蝇培养及主要性状观察
一、遗传学实验常用的五个果蝇品系：
• 品系
• • • • •
体色 翅形
眼色
刚毛
野生型： 灰身、长翅（翅过体）、 红眼、 直刚毛
1．非显带染色体的识别 1968年以前，不通过带纹，而从染色体整体分析。 1960年，丹佛会议上，提出了人类有丝分裂染色 体命名标准体制草案，为以后的所有命名报告奠定了 基础。 1963年，伦敦会议上，正式批准Patan 提出的A、 B、C、D、E、F、G七个字母表示七组染色体的分类 法。 1966年，芝加哥会议上，提出人类染色体组和畸变速 记符号的标准命名体制。
煮沸后加约1毫升丙酸（抑菌），待稍冷却后 再加入C，搅拌均匀后分装。
三、果蝇培养基的配制
（三）注意事项：
• 配制培养基前先要对指管及棉塞进行消毒处理，
121℃ 25分钟；
• 分装时培养基不要碰到管壁； • 酵母粉可以等到玉米粉煮沸后再加，这样可以避免
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染色与观察
将胶从中间切成2块，各自切去一个小 角（作为标记），去离子水轻轻从玻 璃板上吹下，
置于大培养皿中，去离子水浸洗之后 倒入染
染色剂浸没，避光于37度摇床中染色 30min。
观察拍照
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思考题：
根据实验过程的体会，总结如何做好 聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳？哪些是 关键步骤？哪些过程中是 为什么要在样品中加入少许溴酚蓝和 甘油溶液？分别有何用途？
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谢谢
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取上清液至新管，吸取其中150ul样品，加１００ul 甘油
和１０ul溴酚蓝，混匀之后即可点样。
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分离胶的制备
将需要的凝胶储备液从冰箱中取出，放置备
用。取一100ml烧杯，按表比例混匀之后使
用。
配方表
储备液
A储备液 C储备液 E储备液 双蒸水
TEMED 总体积
用量（ml） 2.5
3.75
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样品制备
取材： 大黄鱼若干条，解剖取1.肠、2.眼睛、3.鳃、4.肌肉、 5.脾、6.鳍、7.肝、8.心脏 放入冰箱保存。
提取酶：取不同组织块，加入提取缓冲液Tris-Hcl(pH=7.0) 此溶液需４℃预冷，组织重量（g）与缓冲液体积（mL）之 比为１：5,用研钵研磨充分。浆液４℃离心约３０分钟，１ ５０００转／分钟。
加入少量电泳缓冲液，小心拔出样品梳（两端同时向外拔），再注满缓 冲液备用。
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点样
加样
样品迁 移方向
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电泳
➢ 电压和电流：浓缩胶电压100v，分离胶电压180V. 电流流18－30mA
➢ 溴酚蓝跑至分离胶末端，电泳结束。大约2-3个小时
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电泳 缓冲液
80ml，调节pH到
Ｂ储备液 ： pH6.7 Tris~HCl缓冲液：1 M HCl 48ml，5.98g Tris，加双蒸水到80ml，调节pH到6.7 定容到100ml。
Ｃ储备液： 分离胶储备液（30% Acr/Bis）：30g Acr，0.8g Bis，用双蒸水定容到100ml，备用， 4℃存放可以保存1个月。
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实验流程
试剂的配制 仪器的准备 动物组织的样品的获取 分离胶（30分钟）
浓缩胶（30分钟） 电泳（2-3小时） 染色（30分钟）
观察结果
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一、试剂： 1.凝胶储备液：
Ａ储备液： pH8.9 Tris~HCl缓冲液：1 M HCl 48ml，36.6g Tris，加双蒸水到 8.9定容到100ml。
加在槽中的样品
夹在两块玻璃 板之间的凝胶
电泳 缓冲液
电 泳 示 意 图
电源
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分子量大
分子量小
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电泳过程中分子迁移的规律，小分子走在前头，大分 子滞后。电泳凝胶相当于凝胶过滤中的一个带孔胶粒。
电泳方向
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混合样品 电泳
大分子
带孔胶
小分子
按分子 15 大小分离
乳酸脱氢酶染色剂的配制
0.1
13.75
10ul
20
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浓缩胶的制备
储备液 B储备 液
用量
1.25
（ml）
D储备 液
0.8
配方表
E储备液 F储备液 双蒸水
TEMED 总体积
60ul
5
2.9
16ul
10
TEMED最后一个加入，轻轻混匀。移液枪吸取加入约2.0CM左右高度 的浓缩胶液，然后插入样品梳，注意不要产生气泡。当浓缩胶上出现水 层后表明聚合完成。再放置30－60min后可以使用。
Ｄ储备液： 浓缩胶储备液：10g Acr，2.5g Bis，用双蒸水定容到100ml，备用，4℃可以保存1个月。
Ｅ储备液： 10% Aps（W/V）：1g定容到10ml，-20℃保存。
Ｆ储备液： 40%蔗糖：40g蔗糖溶解到60ml双蒸水中。
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2.电泳缓冲液： Tris6.0g，28.8gGly 加双蒸水到900ml调节pH到8.3，定容到1000ml，使用时稀释10倍。
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聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理来自净电荷聚丙烯酰胺凝胶电泳是对 天然状态生物大分子进行的电泳，利 用蛋白质分子中所带净电荷、分子质 量、形状的差异，而在电场中泳动的 速度和方向不同，达到分离的目的。
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实验器材：
夹心式垂直板电泳槽，梳子，直流稳 压电源（电压300-600V，电流50100mA），移液枪（各种量程），烧杯 （100mL），培养皿,
2. 由于同工酶存在蛋白结构及理化性质的不同， 在电泳时条带略有差异,因此可用电泳将它们分 离开来。
3. 本实验做的是乳酸脱氢酶的分离鉴定
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乳酸脱氢酶
用电泳方法将LDH同工酶分离，分析其酶谱，发现脊椎动物各组 织中有五条酶带。每条酶带的酶蛋白都是由四条肽链组成的四聚 体，LDH有两类肽链，A（M）或B（H），各有不同 同工酶的 免疫性质，按排列组合可形成符合于电泳酶带数的五种同工酶。 LDH1及LDH5分别由纯粹的4条B链（B4）和4条A链（A4）形 成，称为纯聚体；而LDH2、LDH3和LDH4都是由两类肽链杂交 而成的，分别可写成AB3、A2B2、A3B，称为杂交体
垂直电泳分离同工酶
（活性染色鉴定法）
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实验目的：
理解同工酶的概念及遗传学意义 学习聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳操作技术 掌握乳酸脱氢酶同工酶及酶活性染色
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1. 同工酶是指能够催化相同的化学反应，但酶
分子结构、理化特性乃至免疫学性质不同的一 组酶。 它们是由遗传体系决定的在不同组织中 表达的蛋白质作用相同,但分子结构、理化特性 等不同.