土壤有机磷测定

一、土壤有机磷的分组测定（四组）
试剂：
1、1.0mol/L硫酸溶液：55ml浓硫酸（分析纯）慢慢倒入500ml水中，冷却后定容到1000ml。

2、0.5mol/LNaOH溶液：称20g氢氧化钠（分析纯）溶于500ml水中，冷却后定容到1000ml。

3、0.5mol/LNaHCO3溶液：称42g碳酸氢钠（分析纯）溶于1000ml水中，用稀硫酸或氢氧化钠调节pH至8.5。

4、二硝基酚指示剂：0.2g2,6-二硝基酚溶于100ml水中。

5、钼锑抗显色剂：称1.5g抗坏血酸+100ml钼锑抗存储液
实验仪器：
分光光度计、细口瓶、三角瓶、容量瓶（25ml 、50ml）
实验步骤：
（一）活性有机磷（OP）的测定
称 2.50g（2mm）风干土样至细口瓶中+50ml碳酸氢钠溶液+小半勺无磷活性炭，振荡30min，用无磷滤纸过滤。

做两个空白
①滤液中总磷量（TP）的测定
a、取滤液20ml于50ml三角瓶中，至沸水浴中蒸干+3ml浓硫酸摇匀+10d高氯酸摇匀，在瓶口放弯颈小漏斗，至于电热板上加热消煮。

待三角瓶中硫酸溶液开始变白或灰白继续消煮15min，使浓硫酸发烟回流，全部消煮时间约为30min。

b、消煮液冷却后，用蒸馏水转移到50ml容量瓶，待溶液完全冷却后定容，摇匀，澄清或过滤。

c、取消煮后的待测液5ml于25ml容量瓶+10ml水+1d2,6-二硝基酚指示剂，用稀酸或稀碱调节至淡黄色，加钼锑抗指示剂2.5ml，摇匀，排二氧化碳，用水定容，30min后比色（660nm）。

标准曲线的绘制：5ppm的磷标液
计算公式：
TP(mg/kg)=(p×V×ts)/m
P————从工作曲线上查得显色液中磷的浓度（mg/L）
V————显色液体积
Ts————分取倍数
M————土样重
两次平行测定结果允许误差为0.02‰
②滤液中的无机磷（IP）测定
a、取滤液5ml于25ml容量瓶+1d2,6-二硝基酚指示剂，用稀酸或稀碱调节至淡黄色，加钼锑抗指示剂2.5ml，摇匀，排二氧化碳，用水定容，30min后比色（660nm）。

b、标准曲线、计算公式同上。

③活性有机磷（OP）
OP（mg/kg）=T P－IP
（二）中等活性有机磷（OP1）
称2.00g（2mm）土样至三角瓶中，加100ml硫酸，摇匀，浸提3小时后，过滤。

①滤液中总磷量（TP1）的测定
a、取滤液20ml于三角瓶中，至沸水浴中蒸干+3ml浓硫酸摇匀+10d高氯酸摇匀，在瓶口放弯颈小漏斗，至于电热板上加热消煮。

待三角瓶中硫酸溶液开始变白或灰白继续消煮15min，使浓硫酸发烟回流，全部消煮时间约为30min。

b、消煮液冷却后，用蒸馏水转移到50ml容量瓶，待溶液完全冷却后定容，摇匀，澄清或过滤。

c、取消煮后的待测液5ml于25ml容量瓶+10ml水+1d2,6-二硝基酚指示剂，用稀酸或稀碱调节至淡黄色，加钼锑抗指示剂2.5ml，摇匀，排二氧化碳，用水定容，30min后比色（660nm）。

②滤液中的无机磷（IP1）测定
取滤液20ml于三角瓶中，加小半勺无磷活性炭，摇匀脱色，过滤。

取滤液5ml于25ml 容量瓶+1d2,6-二硝基酚指示剂，用稀酸或稀碱调节至淡黄色，加钼锑抗指示剂2.5ml，摇匀，排二氧化碳，用水定容，30min后比色（660nm）。

结果计算：
OP1= T P1－IP1
（2）中等活性有机磷（OP2）
上述用硫酸溶液处理过的土样过滤后，滤纸上残留的土壤用2-3ml乙醇洗涤，风干后放在三角瓶中，加0.5mol/LNaOH溶液100ml，摇匀，浸提6h后过滤，清液（A液）盛于三角瓶中，取A液20ml于三角瓶中，加小半勺无磷活性炭，摇匀脱色，过滤。

取滤液5ml于25ml容量瓶+1d2,6-二硝基酚指示剂，用稀酸或稀碱调节至淡黄色，加钼锑抗指示剂2.5ml，摇匀，排二氧化碳，用水定容，30min后比色（660nm）。

中等活性有机磷计算：
OP(mg/kg)= OP1＋OP2
(三) 中稳性有机磷
取A液50ml于三角瓶中，加浓盐酸酸化至pH1.0-1.8，静置过夜，过滤。

①滤液中总磷量（TP）的测定
a、取滤液20ml于50ml三角瓶中，至沸水浴中蒸干+3ml浓硫酸摇匀+10d高氯酸摇匀，在瓶口放弯颈小漏斗，至于电热板上加热消煮。

待三角瓶中硫酸溶液开始变白或灰白继续消煮15min，使浓硫酸发烟回流，全部消煮时间约为30min。

b、消煮液冷却后，用蒸馏水转移到50ml容量瓶，待溶液完全冷却后定容，摇匀，澄清或过滤。

c、取消煮后的待测液5ml于25ml容量瓶+10ml水+1d2,6-二硝基酚指示剂，用稀酸或稀碱调节至淡黄色，加钼锑抗指示剂2.5ml，摇匀，排二氧化碳，用水定容，30min后比色（660nm）。

②滤液中的无机磷（IP）测定
取滤液20ml于三角瓶中，加小半勺无磷活性炭，摇匀脱色，过滤。

取滤液5ml于25ml 容量瓶+1d2,6-二硝基酚指示剂，用稀酸或稀碱调节至淡黄色，加钼锑抗指示剂2.5ml，摇匀，排二氧化碳，用水定容，30min后比色（660nm）。

结果计算：
中稳性有机磷P（mg/kg）=TP－IP
(四) 高稳性有机磷
a、取A液20ml于三角瓶中, 至沸水浴中蒸干+3ml浓硫酸摇匀+10d高氯酸摇匀，在瓶口放弯颈小漏斗，至于电热板上加热消煮。

待三角瓶中硫酸溶液开始变白或灰白继续消煮15min，使浓硫酸发烟回流，全部消煮时间约为30min。

b、消煮液冷却后，用蒸馏水转移到50ml容量瓶，待溶液完全冷却后定容，摇匀，澄清或过滤。

c、取消煮后的待测液5ml于25ml容量瓶+10ml水+1d2,6-二硝基酚指示剂，用稀酸或稀碱调节至淡黄色，加钼锑抗指示剂2.5ml，摇匀，排二氧化碳，用水定容，30min后比色（660nm）。

测得A液中的总磷（TP），则A液中的有机磷（OP）= TP－OP2(中等活性有机磷2)，A液中的有机磷即为富里酸磷和胡敏酸磷之和，其中减去富里酸磷便为高稳性有机磷——胡敏酸磷。

土壤碳酸钙含量的测定—————中和滴定法
基本原理：土壤中的碳酸钙与一定量的过量标准盐酸作用，剩余的酸用标准碱回滴，以酚酞为指示剂。

由净消耗的酸量计算土壤碳酸钙的含量。

仪器设备：高型烧杯（100ml）、天平（1/100）、表面皿、玻璃棒、容量瓶（100ml）、三角瓶（150ml）、碱式滴定管等。

试剂配制：
①0.5mol/L盐酸标准液：43ml盐酸，用蒸馏水定容至1L，用硼砂标定其标准浓度。

②0.25mol/L氢氧化钠标准溶液：10g氢氧化钠用蒸馏水定容至1L。

用标准稀酸标定其浓度。

③1%酚酞指示剂。

方法及步骤：
1.称取通过2mm筛孔的风干土样3.0-10.0g（含碳酸钙0.2-0.4g），放在100ml高型烧杯中，用移液管加入20.00ml0.5mol/L盐酸标准液，盖上表面皿，用玻璃棒搅拌，加热微沸5min，加速盐酸与碳酸钙的作用，并驱出产生的二氧化碳。

冷却后转移入100ml容量瓶中，用水冲洗土壤及烧杯5-6次定容。

2.吸取50ml较清的溶液放入150ml三角瓶中，并加2滴酚酞指示剂，用0.25mol/L氢氧化钠标准溶液回滴剩余的盐酸，滴定至明显的红色在1min左右不褪色为止。

记录所用氢氧化钠标准溶液的毫升数。

计算方法：
碳酸钙（%）=[（0.5C1×V1-C2×V2）×Ts+0.050] ×100/烘干土质量
C1和v1————盐酸标准溶液的浓度（mol/L）和体积（20ml）
C2和v2————氢氧化钠标准溶液的浓度（mol/L）和体积（ml）
0.5——————滴定时吸取酸溶液的体积是定容体积的一半
0．050————1/2碳酸钙分子的摩尔质量（g/mmol）
Ts——————分取倍数=（定容体积/滴定用浸出液体积）100/50
烘干土质量=[风干土质量/吸湿水（%）+100] ×100%。