脂质的提取、分离与分析

脂质存在于细胞、细胞器和细胞外的体液如血浆、胆汁、乳和肠液中。欲研究某一特定部分（例如红细胞、脂蛋白或线粒体）的脂质，首先须将这部分组织或细胞分离出来。由于脂质不溶于水，从组织中提取和随后的分级分离都要求使用有机溶剂和某些特殊技术，这与纯化水溶性分子如蛋白质和糖是很不相同的。一般说，脂质混合物的分离是根据它们的极性差别或在非极性溶剂中的溶解度差别进行的。含酯键连接或酰胺键连接的脂肪酸可用酸或碱处理，水解成可用于分析的成分。

（一）脂质的有机溶剂提取

非极性脂质（三酰甘油、蜡和色素等）用乙醚、氯仿或苯等很容易从组织中提取出来，在这些溶剂中不会发生因疏水作用引起的脂质聚集。膜脂（磷脂、糖脂、固醇等）要用极性有机溶剂如乙醇或甲醇提取，这种溶剂既能降低脂质分子间的疏水作用，又能减弱膜脂与膜蛋白之间的氢键结合和静电相互作用。常用的提取剂是氯仿、甲醇和水（1:2:0.8，V/V/V）的混合液。此比例的混合液是混溶的，形成一个相。组织（例如肝）在此混合液中被匀浆以提取所有脂质，匀浆后形成的不溶物包括蛋白质、核酸和多糖用离心或过滤方法除去。向所得的提取液加入过量的水使之分成两个相，上相是甲醇/水，下相是氯仿。脂质留在氯仿相，极性大的分子如蛋白质、多糖进入极性相。取出氯仿相并蒸发浓缩，取一部分干燥，称重。（二）脂质的色谱分离

被提取的脂质混合物可采用色谱方法进行分级分离。例如硅胶柱吸附层析可把脂质分成非极性、极性和荷电的多个组分。硅胶是硅酸的一种形式，一种极性的不溶物。当脂质混合物通过硅胶柱时，由于极性的荷电的脂质与硅胶结合紧密被留在柱上，非极性脂质则直接通过柱子，出现在最先的氯仿流出液中，不荷电的极性脂质（例如脑苷脂）可用丙酮洗脱，极性大的或荷电的脂质（如磷脂）可用甲醇洗脱。分别收集各个组分，再在不同系统中层析，以分离单个脂质组分。例如磷脂可分离成磷脂酰胆碱、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺等。

此外可采用更快速，分辨率更高的高效液相色谱HPLC和薄层层析TLC进行脂质分离。TLC中层板上被分离的脂质组分可喷上染料罗丹明加以检测，因为它与脂质结合会发荧光；或用碘蒸气熏层析板，碘与脂肪酸中双键反应给出黄色或棕色，因而也能检测那些含不饱和脂肪酸的脂质。

（三）混合脂肪酸的气液色谱分析

气液色谱（GLC）可用于分析分离混合物中的挥发性成分。除某些脂质具有天然挥发性外，大多数脂质沸点很高，6碳以上的脂肪酸沸点都在200℃以上。因此进行分析前必须先将脂质转变为衍生物以增加它们的挥发性（即降低沸点）。为分析油脂或磷脂样品中的脂肪酸，首先需要在甲醇/HCl或甲醇/HaOH混合物中加热，使脂肪酸成分发生转酯（基）作用，从甘油酯转变为甲酯。然后将甲酯混合物进行气液色谱分析。洗脱的顺序决定于柱中固定液的性质以及样品中成分的沸点和其他性质。利用GLC技术，具有各种链长和不饱和程度的脂肪酸可以得到完全分开。