高效液相色谱法论文

高效液相色谱法论文
液相色谱法流动
摘要：介绍高效液相色谱仪的流动相的调制方法。

关键词：高效液相色谱仪缓冲液流动相调制
液相色谱法的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂,或它们的混合液。

另外,水性溶剂也常用于缓冲液。

有的资料[1]介绍了用于高效液相色谱法的代表性缓冲液的具体调制方法,但通常对缓冲液的解释往往含糊不清。

因此,常因资料上表示的内容与实际的配置方法的不同,而产生流动相的差异,影响色谱图和分析结果。

而且,不仅缓冲液,有时还要考虑到溶剂的混合方法等流动相调制方法方面的漏洞等因素[2]。

本文以具体的事例,研究流动相调制方法对分析结果的影响。

1)缓冲液的调制
例如,写的是“20mM磷酸缓冲液(PH2.5)”在实际中该怎样调制?不妨举几个能想到的情况。

首先,可以确定是使用磷酸的缓冲液,但是,是什么离子不明确。

即使就以钠离子而言,“20mM”的浓度弄不清是指磷酸,还是指磷酸钠的浓度。

若认为是“20mM”磷酸(钠)缓冲液,“20mM”可看作是磷酸的浓度。

另一方面,若把“20mM”看作是钠
的浓度,也可以认为是“20mM磷酸二氢钠水溶液调整PH后的缓冲液(而且, 20mM磷酸钠水溶液的PH在5.0附近,只要稍用一点酸就可以调到PH2.5)”,这时,由于调整PH用的酸,产生离子对的效果,或者也许会对分析结果有影响。

从上述考虑,会产生对缓冲液有多种解释的可能性。

上述例,具体有3种解释。

对分析结果会产生多大影响,见图1所示。

上段是“20mM”作为磷酸浓度的解释,将作为“20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5)”调制的溶液用于流动相的结果。

中段和下段“20mM”作为磷酸二氢钠的浓度解释,分别加磷酸和高氯酸调整PH为2.5时的结果。

像此例中的二氢可待因那样对保留时间有明显的影响时,给分析方法造成困难。

对缓冲液应尽量明确溶液的特性和调制方法,以免产生不同的解释。

(如图1）
2)有机溶剂和水性溶剂的混合方法
有机溶剂和水性溶剂的混合液作为流动相是经常的,但是由于混合方法的不同,有时分析结果相关很大。

作为一例,20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5)90%与乙腈10%的混合时,混合比为9:1的话,20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5)与乙腈的体积比为9:1,也就是可以解释为各自按体积比率的相当量称取后进行混合。

另外,按10%乙腈解释的话,解释为用
20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5),将乙腈稀释调制也可以成立。

在后者的情况下,产生混合体积减少部分,余下的添加20mM磷酸钠缓冲液。

两者虽然没有太大的差别,但,如图2所示,由于混合的方式不同,分析结果(特别是保留时间)也会有显著差别,这点必须注意。

（如图2）
在一般情况下,调制高效液相色谱法用流动相时,用A液:B液=3:2(V:V)的表示方法,即A液体积比相当于3,B液体积相当于2,分别称取混合(实际上本溶液混合后的溶液体积比合计体积比5要少)。

不仅是流动相的调制方法,试样溶液和其他溶液的调制也经常有上述问题。

另外,在不同部门(医药部门或化工部门)各自都有自己的常识习惯,这也是困惑的原因,在这种情况下,例如,日本药典、卫生试验法、日本工业规格等法定书都有各自作为通则和定义涉及溶液的调制,因此可参考这些书,避免混乱,在日常更好地记住这些表示。

参考文献
[1] 刘珍.仪器分析.化学工业出版社.2004.
[2] 岛津液相色谱仪培训讲义.岛津国际贸易(上海)有限公司北京分析中心.。