苦参碱的提取纯化工艺研究
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
２ ０ １ ３ 年 （ 第 ３ ４ 卷 ） 第 ３ 期
纛 南
苦 参 碱 的 提 取 纯 化 工 艺 研 究
郭德 祥 ， 郭 亚楠 ， 李向阳 （ 国家兽 用药 品工 程技 术研究 中心 ， 河南 洛 阳 ４ ７ １ ０ ０ ３ ）
摘
要： 为了优化苦参碱的提取工艺 ， 以浸膏收率、 苦参 总碱含量为评价指标 ， 选择用水量 、 提取 时间及提
要 的有 效 成分 为苦 参 碱 、 氧化苦 参碱 等 生物 碱 。该 研 究 采 用最 为方 便 、 易 于工 业化 生产 的水 煎煮 法 ， 以浸膏 收率 、
对照品溶液 的制备 ： 精密称取 ５ ｍ ｇ 苦参碱对 照品于
１ ０ ０ ｍ ｌ 容量瓶中 ， 加 乙腈 一 无 水 乙醇 （ ８ ０ ： ２ ０ ） 溶 解定 容 ， 制 成每 １ ｍ ｌ 含苦 参碱 ０ ． ０ ５ ｍ ｇ 的溶液 ， 即得 。 供试 品溶 液 的制 备 ： 精 密称 取 １ Ｏ ｍ ｇ 干燥 物 甲醇 超声 溶解， 并定 容于 １ ０ ｍ ｌ 容量瓶 中 ， 即得 。 测定法 ： 分 别 精 密 吸 取 对 照 品 溶 液 与供 试 品溶 液各
液（ ８ ０ ： １ ０ ： １ ０ ） 为流动相 ； 检测波长为 ２ ２ ０ ｎ ｍ。理 论 板 数
干， ７ ０ ℃减压干燥至完全干燥后 ， 称重并计算浸膏收率（ 浸 膏收率％＝ 浸膏重量， 样品重量ｘ １ ０ ０ ％） ， 结果见表 ２ 。
２ ． ２ － ３ 结 果 按苦参碱峰计算应不低 于 １ ５ ０ ０ 。 线性 范 围考 察 ： 精 密称取 苦参碱对 照品 ２ ０ ． ９ ｍ ｇ 于
均为 分析 纯 。 ２ 方法 与结 果
２ ． １ 含 量 测 定 方 法
２ ． ２ ． ２ 考察 指标 的确 定 和测定 苦 参 碱 为苦 参 的 主要 有 效成 分 ， 将其 作 为 考察 指 标 ， 同 时结 合 浸 膏 收 率优 选 最 佳 工 艺 。分 别 称 取 苦 参 药 材 ９
可行 。
关键词 ： 苦参碱 ； 提取纯化 ； 正交试验
中 图分 类 号 ： ￥ ８ ５ ９ ． ７ ９ 文 献标 识码 ： Ｂ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ４ — ５ ０ ９ ０ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ３ — ０ ０ １ ２ — ０ ３
苦参为豆科植物苦参的干燥根 ， 具有清热燥湿 、 杀虫 利尿的功效 ｉ Ｉ － ｚ ］ ， 临床上常用于治疗热痢便血 、 黄疸尿闭 、 赤 白带下 、 阴肿阴痒 、 湿疹瘙痒等。现代研究表明， 苦参主
色谱 条件 与系 统适用 性试 验 ： Ｚ Ｏ Ｒ Ｂ Ａ Ｘ Ｎ Ｈ 柱
份各 １ ０ ０ ｇ ， 按照Ｌ ９ （ ３ ） 正交表 ２ 设计的条件进行煎煮 ， 合
并煎煮液 ， 滤过 ， 滤液 浓 缩 ， 置 已恒重 的蒸 发皿 中 ， 水 浴 蒸
（ ４ ． ６ ｍ ｍｘ ２ ５ ０ ｍ ｍ， ５ ｍ） ； 以乙腈 一 无 水 乙醇一 ３ ％磷酸溶
取次数 为考察因素 ， 利用Ｌ（ ３ ） 正交试验法优选 出水煎煮法提取苦参总碱的最佳工 艺条件为用８ 倍量水提取 ３ 次， 每次提取 ２ ｈ ， 并采用 乙醇沉淀及三氯甲烷萃取相结合的方法对苦参粗提物进行 纯化 ， 浓缩药液浓度为每毫
升１ ． ０ ｇ 生 药 时进 行 醇沉 ， 醇沉后 调 节 药液 的 ｐ Ｈ ｉ ＆９ － １ １ 用三 氯 甲烷 萃取 ３ 次 。优 选 出的提取 工 艺稳 定 、 合理、
由表 ２ 直 观分 析 可 知 ， 以浸 膏 收率 为 评 价 指标 时 ， 在
所考察的影响因素中， 重要性依次为Ｃ ＞ Ａ ＞ Ｂ ； 以苦参碱含
量 为评 价 指标 时 ， 在所 考 察 的影 响 因素 中 ， 重要 性 依次 为 Ａ ＞ Ｃ ＞ Ｂ ， 得 到最佳 工 艺条件 Ａ Ｂ Ｃ ， 。
２ ６ ． １ ｍ ｌ 、 １ ３ ． １ 咖 ｌ 的对照品溶液 ， 分别精密吸取上述５
采用水煎煮法进行提取 ， 以用水量 、 提取时间和提取 次数为 ３ 个 因素 ， 设计 ３ 个水平 ， 进行 ｋ（ ３ ） 正交试验 ， 筛 选最佳工艺条件。因素水平表见表 １ 。
表 １ 因素水 平表
依利特高效液相色谱 仪（ Ｐ ２ ３ ０ 型高压输液泵 ； Ｕ Ｖ ２ ３ ０ 型检测器 ； Ｅ Ｃ ２ ０ ０ ０ 色谱工作站 ） ； Ｚ Ｏ Ｒ Ｂ Ａ Ｘ Ｎ Ｈ 色谱 柱 ， ４ ． ６ ｍ ｍ ｘ ２ ５ ０ ｍ ｍ， ５ ｍ； Ａ ｂ ２ ６ ５ 一 ｓ 电子分析天平。
１ ． ２ 材料
苦参 ， 购 自洛阳康鑫中药饮片公 司， 符合《 中华人民共 和国兽药典￣ ２ ｏ ｏ ５ 年版二部第 ２ ７ ０ 页苦参项下 的有关规
定； 苦参碱对照品 ， 批号 ： １ １ ０ ８ ０ ５ — ２ ０ ０ ５ ０ ７ ， 由 中 国药 品生
物制品检定所提供 ； 乙腈为色谱纯 ， 水为重蒸水 ， 其他试剂
苦参总碱提取率为评价指标 ， 通过正交试验筛选苦参提取 的最佳工艺条件 ， 为新药研究和充分利用苦参药材资源提
供 试验 依据 。
１ 仪 器与 材料
１ ． １ 仪 器
１ ０ ｌ ， 注入液相色谱仪 ， 测定 ， 即得。
２ ． ２ 正 交试验 法提取 苦 参碱 ２ ． ２ ． １ 苦参 总碱 提取 工艺 条件 的选择
１ ０ ０ｍ ｌ 容量 瓶 中 ， 加 乙腈 一 无 水 乙醇 （ ８ ０ ： ２ ０ ） 溶解 、 定容 ， 制 成 浓度 为 ２ ０ ９ ｍ ｌ 的储 备 液 ， 将上 述储 备 液用 乙腈 一 无水 乙醇 （ ８ ０ ： ２ ０ ） 稀释成浓度分别为 １ ０ ４ ． ５ ｇ ， ｍ ｌ 、 ５ ２ ． ２ ｍ ｌ 、
纛 南
苦 参 碱 的 提 取 纯 化 工 艺 研 究
郭德 祥 ， 郭 亚楠 ， 李向阳 （ 国家兽 用药 品工 程技 术研究 中心 ， 河南 洛 阳 ４ ７ １ ０ ０ ３ ）
摘
要： 为了优化苦参碱的提取工艺 ， 以浸膏收率、 苦参 总碱含量为评价指标 ， 选择用水量 、 提取 时间及提
要 的有 效 成分 为苦 参 碱 、 氧化苦 参碱 等 生物 碱 。该 研 究 采 用最 为方 便 、 易 于工 业化 生产 的水 煎煮 法 ， 以浸膏 收率 、
对照品溶液 的制备 ： 精密称取 ５ ｍ ｇ 苦参碱对 照品于
１ ０ ０ ｍ ｌ 容量瓶中 ， 加 乙腈 一 无 水 乙醇 （ ８ ０ ： ２ ０ ） 溶 解定 容 ， 制 成每 １ ｍ ｌ 含苦 参碱 ０ ． ０ ５ ｍ ｇ 的溶液 ， 即得 。 供试 品溶 液 的制 备 ： 精 密称 取 １ Ｏ ｍ ｇ 干燥 物 甲醇 超声 溶解， 并定 容于 １ ０ ｍ ｌ 容量瓶 中 ， 即得 。 测定法 ： 分 别 精 密 吸 取 对 照 品 溶 液 与供 试 品溶 液各
液（ ８ ０ ： １ ０ ： １ ０ ） 为流动相 ； 检测波长为 ２ ２ ０ ｎ ｍ。理 论 板 数
干， ７ ０ ℃减压干燥至完全干燥后 ， 称重并计算浸膏收率（ 浸 膏收率％＝ 浸膏重量， 样品重量ｘ １ ０ ０ ％） ， 结果见表 ２ 。
２ ． ２ － ３ 结 果 按苦参碱峰计算应不低 于 １ ５ ０ ０ 。 线性 范 围考 察 ： 精 密称取 苦参碱对 照品 ２ ０ ． ９ ｍ ｇ 于
均为 分析 纯 。 ２ 方法 与结 果
２ ． １ 含 量 测 定 方 法
２ ． ２ ． ２ 考察 指标 的确 定 和测定 苦 参 碱 为苦 参 的 主要 有 效成 分 ， 将其 作 为 考察 指 标 ， 同 时结 合 浸 膏 收 率优 选 最 佳 工 艺 。分 别 称 取 苦 参 药 材 ９
可行 。
关键词 ： 苦参碱 ； 提取纯化 ； 正交试验
中 图分 类 号 ： ￥ ８ ５ ９ ． ７ ９ 文 献标 识码 ： Ｂ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ４ — ５ ０ ９ ０ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ３ — ０ ０ １ ２ — ０ ３
苦参为豆科植物苦参的干燥根 ， 具有清热燥湿 、 杀虫 利尿的功效 ｉ Ｉ － ｚ ］ ， 临床上常用于治疗热痢便血 、 黄疸尿闭 、 赤 白带下 、 阴肿阴痒 、 湿疹瘙痒等。现代研究表明， 苦参主
色谱 条件 与系 统适用 性试 验 ： Ｚ Ｏ Ｒ Ｂ Ａ Ｘ Ｎ Ｈ 柱
份各 １ ０ ０ ｇ ， 按照Ｌ ９ （ ３ ） 正交表 ２ 设计的条件进行煎煮 ， 合
并煎煮液 ， 滤过 ， 滤液 浓 缩 ， 置 已恒重 的蒸 发皿 中 ， 水 浴 蒸
（ ４ ． ６ ｍ ｍｘ ２ ５ ０ ｍ ｍ， ５ ｍ） ； 以乙腈 一 无 水 乙醇一 ３ ％磷酸溶
取次数 为考察因素 ， 利用Ｌ（ ３ ） 正交试验法优选 出水煎煮法提取苦参总碱的最佳工 艺条件为用８ 倍量水提取 ３ 次， 每次提取 ２ ｈ ， 并采用 乙醇沉淀及三氯甲烷萃取相结合的方法对苦参粗提物进行 纯化 ， 浓缩药液浓度为每毫
升１ ． ０ ｇ 生 药 时进 行 醇沉 ， 醇沉后 调 节 药液 的 ｐ Ｈ ｉ ＆９ － １ １ 用三 氯 甲烷 萃取 ３ 次 。优 选 出的提取 工 艺稳 定 、 合理、
由表 ２ 直 观分 析 可 知 ， 以浸 膏 收率 为 评 价 指标 时 ， 在
所考察的影响因素中， 重要性依次为Ｃ ＞ Ａ ＞ Ｂ ； 以苦参碱含
量 为评 价 指标 时 ， 在所 考 察 的影 响 因素 中 ， 重要 性 依次 为 Ａ ＞ Ｃ ＞ Ｂ ， 得 到最佳 工 艺条件 Ａ Ｂ Ｃ ， 。
２ ６ ． １ ｍ ｌ 、 １ ３ ． １ 咖 ｌ 的对照品溶液 ， 分别精密吸取上述５
采用水煎煮法进行提取 ， 以用水量 、 提取时间和提取 次数为 ３ 个 因素 ， 设计 ３ 个水平 ， 进行 ｋ（ ３ ） 正交试验 ， 筛 选最佳工艺条件。因素水平表见表 １ 。
表 １ 因素水 平表
依利特高效液相色谱 仪（ Ｐ ２ ３ ０ 型高压输液泵 ； Ｕ Ｖ ２ ３ ０ 型检测器 ； Ｅ Ｃ ２ ０ ０ ０ 色谱工作站 ） ； Ｚ Ｏ Ｒ Ｂ Ａ Ｘ Ｎ Ｈ 色谱 柱 ， ４ ． ６ ｍ ｍ ｘ ２ ５ ０ ｍ ｍ， ５ ｍ； Ａ ｂ ２ ６ ５ 一 ｓ 电子分析天平。
１ ． ２ 材料
苦参 ， 购 自洛阳康鑫中药饮片公 司， 符合《 中华人民共 和国兽药典￣ ２ ｏ ｏ ５ 年版二部第 ２ ７ ０ 页苦参项下 的有关规
定； 苦参碱对照品 ， 批号 ： １ １ ０ ８ ０ ５ — ２ ０ ０ ５ ０ ７ ， 由 中 国药 品生
物制品检定所提供 ； 乙腈为色谱纯 ， 水为重蒸水 ， 其他试剂
苦参总碱提取率为评价指标 ， 通过正交试验筛选苦参提取 的最佳工艺条件 ， 为新药研究和充分利用苦参药材资源提
供 试验 依据 。
１ 仪 器与 材料
１ ． １ 仪 器
１ ０ ｌ ， 注入液相色谱仪 ， 测定 ， 即得。
２ ． ２ 正 交试验 法提取 苦 参碱 ２ ． ２ ． １ 苦参 总碱 提取 工艺 条件 的选择
１ ０ ０ｍ ｌ 容量 瓶 中 ， 加 乙腈 一 无 水 乙醇 （ ８ ０ ： ２ ０ ） 溶解 、 定容 ， 制 成 浓度 为 ２ ０ ９ ｍ ｌ 的储 备 液 ， 将上 述储 备 液用 乙腈 一 无水 乙醇 （ ８ ０ ： ２ ０ ） 稀释成浓度分别为 １ ０ ４ ． ５ ｇ ， ｍ ｌ 、 ５ ２ ． ２ ｍ ｌ 、