生化项目间试剂的交叉污染及其避免方法

生化自动分析仪项目间试剂的交叉污染及其避免方法
很多类型的全自动生化分析仪因其清洗系统的工作模式所致，一个项目对紧随其后的一个甚至几个项目的测定会带来一定程度的试剂污染，并且随着仪器使用时间的累加，仪器状况的下降，试剂交叉污染的程度会有所加剧。

在实际工作中主要表现为某一项目的测定结果一直符合临床要求，可是一段时间以后测定结果趋高，并且日益明显；而单独测定该项目时测值又合理起来，给日常工作带来极大的不便。

因此避免试剂间的干扰，变的非常重要。

试剂间的干扰有两个的原因：一是试剂中含有下一个测试所要测定的底物，或是含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的底物有作用，因而直接干扰下一反应的测定结果；另一个则是该试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来了间接的干扰，因为在有试剂污染的情况下，下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。

下面通过对试剂成分的分析和相应试验来找出试剂交叉污染可能带来的情况，进而指导相应的项目调整和结果分析。

1 试剂间可能发生的干扰情况
1-1
ALT（IFCC）、AST（IFCC）试剂中含有高活力LD成分，有可能会对LD的测定带来干扰。

1-2
ALP（IFCC）、CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）、CO2（PEPC）、α-Amy(EPS)等试剂中使用磷酸缓冲液，可能会对其后的Mg2+ 测定带来干扰。

1-3
ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、UA(Uricase)、α-HBDH(DGKC)等试剂使用磷酸缓冲液，可能会对无机磷的测定带来干扰。

1-4
CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）试剂中含有Glu成分，其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反应过程，因此可能对Glu测定带来干扰，尤其对Glu的HK法测定可能带来严重干扰。

1-5
Mg2+试剂(Calmagite)中含有EGTA成分，为Ca2+络合剂，可能对Ca2+的测定带来干扰。

1-6
个别试剂以甘油做酶的保护剂，因此可能对TG的测定带来干扰，等等。

1-7
低密度脂蛋白、甘油三酯、胆固醇的试剂成分中都含有CE、CHOD、POD 酶，都会与血清成分反应，生成的中间反应产物是H2O2浓度,因为低密度脂蛋白和甘油三酯检测单位都是mmol/L级,而尿酸检测单位是μmol/L级,二者之间相差1 000倍,故检测尿酸的反应杯中只要残留极少量的低密度脂蛋白和胆固醇试剂就可产生大量的H2O2,直接导致尿酸的检测结果的升高。

1-8
葡萄糖对尿酸试剂的干扰GLU(OX)与UA测定原理均采用Trider's反应方法,试剂探针残留携带的GLU带入到UA反应体系,发生血糖反应其产物红色醌亚胺与UA产物红色醌亚胺颜色叠加,而血清中正常血糖含量远高于尿酸水平,从而导致UA结果严重偏高。

很多类型的全自动生化分析仪因其清洗系统的
1-9
胆固醇(TC)、甘油三醋(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL) 会对总胆汁酸检测的影响，导致胆汁酸测定值增加。

这些试剂中为了保证反应充分，往往含有胆酸钠成分或是一些脂类水解促进剂等，这些物质导致了样本胆汁酸测定的携带性增高及内源产物等副反应性增高。

1-10谷丙中的含有的酮戊二酸NADH反应体系会干扰总胆汁酸检测中的
Thio-NAD－Thio-NADH循环指示体系，导致测定值偏低
2 干扰的排查和发现
事实上各个公司所提供的产品说明书常不能够全面反映试剂组成的情况，因此通过实验发现试剂交叉污染可能带来的干扰变得相当重要。

下面以两个试验来加以说明。

2-1
将某一试剂作为样本进行全套项目测定，考察结果的情况，进而确定发生试剂交叉污染时造成直接干扰的项目。

2-2 1 将一份样本分为两份，一份加生理盐水或其他适当的稀释液，另一份加等量的试剂，同时测定、考察结果的变化，进而确定可能发生试剂交叉污染时造成干扰的项目。

进行这一实验时，使用半自动生化分析仪可能会得到更为理想的结果，尤其是针对双试剂反应时，R1、R2加入时机可以得到更为精确的控制。

此外，由于试剂成分的复杂多样性，实时仪器状况的独特性，可能发生的试剂间的交叉污染的情况不尽相同。

3 干扰的避免
试剂间的严重干扰会极大的影响测定结果的准确性，因此隔绝二者间的联系非常必要。

一般在安排项目顺序时要求两个项目间至少要有一个非干扰项目，而最彻底的做法则是将被干扰项目置于干扰项目之前，以消除干扰发生的可能。

同时要求检验人员对仪器的工作状态要了如指掌，并在一个样本的项目选择或一个样本的最后一项与下一样本的第一个项目选择时对于试剂交叉污染的可能
性加以考虑，合理安排项目顺序，以便得到更为合理的结果。

通常情况下可以按照以下顺序安排项目：ALT 、AST、ALP、γ–GT 、ChE 、TP、Alb 、TBIL、DBIL 、Urea、UA 、Cr、CK 、CK-MB、α–HBDH 、LD、Glu 、TG 、TC、HDL-C、LDL-C、ApoAI、ApoB、α–Amy 、CO2 、P3-、Fe3+、Ca2+、Mg2+。

实际工作中，用全自动生化分析仪进行连续的多个项目的测定，每个反应的详细过程难以探知，因此理论分析结合实际应用可以摸索出一套符合本单位工作的方法。