栀子中有效成分的提取及柱色谱法分离纯化及

题目:栀子中有效成分的提取及柱色谱法分离纯化及

RP—HPLC测定栀子中栀子苷的含量

作者：侯升书（第二军医大学研究生管理大队药学队，上海200433）学号：3032010015 [摘要] 目的测定栀子中栀子苷的含量。方法:采用岛津-ODS-C18对栀子中栀子苷的含量的测定。色谱柱(150 mm×4．6 mm，5μm)，流动相：乙腈-1％醋酸水溶液（15:85，v/v），流速：1．0 ml／min，检测波长：238 nm，柱温：室温，进样量：20μl。结果：栀子药材中栀子苷含量为11.05mg/g ;栀子有效部位中栀子苷的含量为18.95mg/g.；栀子苷的得率为：85.1% 。

结论：柱色谱提取栀子有效成分的方法有效，简便，得率较高。HPLC法测定栀子苷含量的方法简便﹑准确﹑可靠。

[关键词]栀子、栀子苷、含量测定、柱色谱法、HPLC；层析柱

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中药栀子为茜草科植物栀子Gardenia 一jasminoides Ellis的干燥成熟果实，具有泻火除烦，清热利尿，凉血解毒之功效，为临床常用中药[1]。其主要活性成分为环烯醚萜苷类，其中栀子苷是药典规定的药材鉴别和含量测定的指标性成分。《中国药典》2005年版一部,其桅子昔的测定方法为采用甲醉超声提取,高效液相色谱法测定,限度为1.8%。另有报道采用50%甲醇振摇提取,高效液相色谱法测定,结果桅子昔含量为3.。%。

1 仪器与试药

仪器层析柱（3㎝内径玻璃柱）；减压旋转蒸发仪；真空干燥箱；高效液相色谱仪（岛津）；电子分析天平

试药栀子粗提物溶液和环烯醚萜苷类有效部位固体粉末、95％乙醇；醋酸（分析纯）；去离子水；乙腈（色谱纯）、栀子苷对照品（纯度>98%）

2 方法和结果

2．1 栀子中环烯醚萜苷类成分的提取及柱色谱法分离纯化

2．1．1 提取

干燥栀子苷药材100g置于1000ml烧杯中，加50％乙醇600ml，80℃回流提取2小时，过滤，滤渣再加50％乙醇500ml于80℃回流提取2小时，再过滤，合并滤液，40℃减压旋转蒸发回收溶剂，浓缩至120ml，离心除去沉淀，得到含有栀子环烯醚萜苷的提取液。留10ml 浓缩提取液作为下次实验的样品，其余用于柱色谱分离纯化。

2.1.2 柱色谱分离纯化

2.1.2.1 大孔吸附树脂预处理

树脂用95％乙醇浸泡4小时，然后用乙醇淋洗，至流出液在试管中用水稀释不浑浊为止，最后用水反复洗地至无明显乙醇气味后即可使用。

2.1.2.2 装柱

洗净层析柱，底部塞入玻璃棉少许。适量大孔吸附树脂于烧杯中，加水搅动倒入层析柱，控制层析柱出口水流。树枝约装满柱的2/3,顶端再用少许玻璃棉覆盖。

2.1.2.3 柱色谱分离

将浓缩的提取上样，先用水洗脱约1000ml，洗脱液弃去。然后用20％乙醇洗脱，收集洗脱液约3000ml，减压旋转蒸发回收溶剂，真空干燥得到栀子环烯醚萜苷类有效部位的固体产

品

2.2. RP—HPLC测定栀子药材及其提取物中栀子苷的含量

2.2.1 色谱条件

采用岛津-ODS-C18色谱柱(150 mm×4．6 mm，5μm)，流动相：乙腈-1％醋酸水溶液（15:85，v/v），流速：1．0 ml／min，检测波长：238 nm，柱温：室温，进样量：20μl。

2．2．2 溶液的制备

2.2.2.1有效部位的制备

取0,9955g配制成10ml，取0.1ml配制成10ml，再取1ml配制成10ml，得到溶液

约2mg/ml

2.2.2.2 粗提物的制备

取粗提液0.24ml，配制成10ml，取1ml配制成10ml。

2.2.2.3对照品溶液的制备

分别取0.05ml，0.10 ml.，0.20 ml，0.30 ml，0.40 ml，配制成5ml，10µg/ml20µg/ml40µg/ml，60µg/ml，80µg/ml的溶液

2.2.3 测定法

分别精密吸取对照品溶液，有效部位溶液和粗提物溶液20µL，注入液相色谱仪，测定，用外标法计算含量，即得。

2.2.4 线性关系考察线性范围分别取0.05ml，0.10 ml，0.20 ml，0.30 ml，0.40 ml，配制成5ml，得到10µg/ml，20µg/ml，40µg/ml，60µg/ml，80µg/ml的溶液，按照“2.3”的色谱条件，，分别精密吸取对照品溶液20µL注入液相色谱仪，测得峰面积。以峰面积(y)对栀子苷A进样量（x）绘制标准曲线，栀子苷A回归方程为：y=137441-86675，r=0.98816，实验结果表明在10～60µg/ml内，栀子苷A进样量与峰面积呈良好的线性关系

表1 实验结果

拟合峰面积-浓度曲线，得到粗提物的浓度：22.1µg/ml，有效部位浓度：18.9µg/ml

栀子药材中栀子苷的含量（mg/g）=22.1*10*10^-3/2*10^-2=11.05mg/g，栀子有效部位中栀子苷含量（mg/g）=18.9*10*10^-3/0.9955=189.54mg/g，栀子苷得率（%）=

（189.54*4.9515/11.05*100）*100%=85.1%

结论：本实验采取了大孔吸附树脂柱色谱法分离纯化栀子药材得到含有栀子苷的有效成分，再运用高效液相色谱法测定栀子药材和有效成分的栀子苷含量，栀子药材中栀子苷含量11.05mg/g，故临床运用时应该加强质量控制；有效成分中栀子苷得率85.1%足够高，表明了大孔吸附树脂柱色谱法分离纯化栀子药材的有效性。

参考文献

【1】中国药典一部[S].2005.

【2】肖崇厚.中药化学[M].上海:上海科学技术出版社,1997.

【3】赵成城,杨军宣,施俊辉,周子渝,杨明．对《中国药典))2005年版I部栀子中栀子苷含量测定方法的探讨[J]．时珍国医国药，2012，21(11)：2793