血液制品

• 在病毒检测方面，近年来欧美和日本已开 在病毒检测方面， 始推广和执行核酸扩增技术（ 始推广和执行核酸扩增技术（NAT）对原 ） 料血浆的病毒检测。 料血浆的病毒检测。快速发展的生物芯片 技术， 技术，也使血浆中病毒的快速检测成为可 虽然尚有很多问题需解决。 能，虽然尚有很多问题需解决。
最理想的病毒灭火方法
上清液 沉淀Ⅳ 沉淀Ⅳ 乙醇： 乙醇：40%，PH：4.8 ， ： Ⅳ
–8℃，N：2.0% ℃ ：
血蛋白制品
上清液（废弃） 上清液（废弃）
N–K法分离人血白蛋白的工艺（N表示蛋白质浓度） 法分离人血白蛋白的工艺（ 表示蛋白质浓度 表示蛋白质浓度）
• 沉淀得到的白蛋白粗品中含有乙醇，精制 沉淀得到的白蛋白粗品中含有乙醇， 时必须除去。去乙醇的方法有多种， 时必须除去。去乙醇的方法有多种，如透 析、冻干及超滤等。超滤可以一次完成脱 冻干及超滤等。超滤可以一次完成脱 脱盐和浓缩工作，因此， 醇、脱盐和浓缩工作，因此，血液制品企 业目前普遍采用超滤技术来完成人血白蛋 白的乙醇去除工作，一般采用8000或 白的乙醇去除工作，一般采用 或 10000的超滤膜。 的超滤膜。 的超滤膜
• 将目的外源基因直接注入动物受精卵或早期胚 胎内，然后植入假孕的母体动物， 胎内，然后植入假孕的母体动物，所生子代动 物既能表达外源基因，又可遗传给下一代， 物既能表达外源基因，又可遗传给下一代，成 为转基因动物。 为转基因动物。
转基因蚊子
• 另外，也利用基因重组技术将编码抗原决 另外， 定簇或功能蛋白的外源基因插入植物病毒 基因组中，用以感染植物， 基因组中，用以感染植物，使其在植物体 内复制和装配，成为转基因植物， 内复制和装配，成为转基因植物，从而高 效表达所需抗原或蛋白。 效表达所需抗原或蛋白。
第五节 血液制品
主讲人：张琳 组成员：陈玉欣 贾娟 殷亚兰 李影
什么是血液？ 什么是血液？
• 简称血。人或高等动物体内循环系统中的 简称血。 液体组织，暗赤或鲜红色，有腥气， 液体组织，暗赤或鲜红色，有腥气，对维 持生命起重要作用。 持生命起重要作用。
水：91-92% 血 浆 （55%） 固体成分：8-9% ） 固体成分： 血液 白细胞 血细胞 红细胞 （45%） 血小板 ） 各种蛋白质、 各种蛋白质、 无机盐、脂类、 无机盐、脂类、 内分泌激素、 内分泌激素、 维生素等
血液制品的发展趋势
• 近十年来，层析技术在血液制品的纯化、 近十年来，层析技术在血液制品的纯化、 分离方面也得到广泛的应用， 分离方面也得到广泛的应用，但昂贵的操 作成本使其在大规模生产中的应用受到很 大的限制。 大的限制。 • 从理论上来说，现在人类可利用基因工程 从理论上来说， 技术从非人源途径无限量获得各种血浆蛋 该技术的优点是可以不用人血资源， 白。该技术的优点是可以不用人血资源， 并从根本上防止经血液传播的疾病对人类 的感染。 的感染。
• 最理想的病毒灭火处理方法，应该是既不 最理想的病毒灭火处理方法， 破坏蛋白质的分子结构和生物活性， 破坏蛋白质的分子结构和生物活性，又能 彻底灭火所有的各类病毒。但迄今为止， 彻底灭火所有的各类病毒。但迄今为止， 用于血液制品的病毒灭火技术都各有不足 之处，研究新的病毒灭活处理方法，仍是 之处，研究新的病毒灭活处理方法， 各国研究者的重要课题。 各国研究者的重要课题。
免疫球蛋白
N-K法分离免疫球蛋白的工艺流程 法分离免疫球蛋白的工艺流程 I 表示离子强度 ，N 表示蛋白质浓 度
血液制品的安全性
• 制备血液制品的原料是人的血浆，因而通 制备血液制品的原料是人的血浆， 过血液传播的病原体，特别是某些病毒， 过血液传播的病原体，特别是某些病毒， 如乙肝病毒（ ）、丙肝病毒 如乙肝病毒（HBV）、丙肝病毒（HCV）、 ）、丙肝病毒（ ）、 艾滋病病毒（ 艾滋病病毒（HIV）等对血液制剂的污染， ）等对血液制剂的污染， 影响血液制剂安全性的主要原因。 是影响血液制剂安全性的主要原因。 • 因目前检测手段及病毒灭活有限，只能采 因目前检测手段及病毒灭活有限， 综合防范系统最大限度的减少这种危险 用综合防范系统最大限度的减少这种危险 性。
（三）是对最终产品的质量控制和对临 床使用的信息反馈。 床使用的ห้องสมุดไป่ตู้息反馈。
• 大量经 大量经S/D法灭活的血液制品通过长期临床 法灭活的血液制品通过长期临床 应用，已证明其安全可靠， 应用，已证明其安全可靠，因此被广泛采 用。 • 为了最大限度地灭活和去除原料血浆中可 能污染的致病病毒， 能污染的致病病毒，WHO和国内外专家建 和国内外专家建 议和要求在血液制品生产过程中， 议和要求在血液制品生产过程中，必须至 少采用一种灭活和去除病毒技术， 少采用一种灭活和去除病毒技术，以保证 血液制品的安全。 血液制品的安全。
• 人体内的血液量大约是体重的 ～8％，如 人体内的血液量大约是体重的7～ ％ 体重60公斤 则血液量约4200～4800毫升。 公斤， 毫升。 体重 公斤，则血液量约 ～ 毫升 各种原因引起的血管破裂都可导致出血， 各种原因引起的血管破裂都可导致出血， 如果失血量较少，不超过总血量的10％ 如果失血量较少，不超过总血量的 ％， 则通过身体的自我调节，可以很快恢复； 则通过身体的自我调节，可以很快恢复； 如果失血量较大，达总血量的20％ 如果失血量较大，达总血量的20％时，则 出现脉搏加快，血压下降等症状； 出现脉搏加快，血压下降等症状；如果在 短时间内丧失的血液达全身血液的30%或 短时间内丧失的血液达全身血液的 或 更多，就可能危及生命。 更多，就可能危及生命。
（2）免疫球蛋白
免疫球蛋白的制备过程与人血白蛋白很 相似， 相似，也是用乙醇作为沉淀剂进行分离纯 制备免疫球蛋白是从血浆制备人血白 化。制备免疫球蛋白是从血浆制备人血白 蛋白的一个分支。 蛋白的一个分支。比较常见的低温乙醇法 制备免疫球蛋白的工艺有Cohn6和N-K法。 制备免疫球蛋白的工艺有 和 法 下面主要介绍一下N-K法分离免疫球蛋 下面主要介绍一下 法 白的工艺流程： 白的工艺流程：
血浆
乙醇： ， ： 乙醇：8%，PH：7.2 3℃，N：5.0% ℃ ：
上清液Ⅰ 上清液Ⅰ
乙醇： 乙醇：19%，PH：5.8 ， ： –5℃，N：4.5% ℃ ：
沉淀Ⅰ 沉淀Ⅰ
上清液Ⅱ 上清液Ⅱ+Ⅲ
沉淀Ⅱ 沉淀Ⅱ+Ⅲ（用于分离免疫球蛋白） 用于分离免疫球蛋白
乙醇：40%，PH： 乙醇：40%，PH：5.8 –7℃，N：2.5% ℃ ：
血液制品的定义
• 血液制品：由健康人的血浆或特异免疫人 血液制品： 血浆分离，提纯或由重组DNA技术制成的 血浆分离，提纯或由重组 技术制成的 血浆蛋白组分或血细胞组分制品， 血浆蛋白组分或血细胞组分制品，如人血 白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子（ 白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子（天 然或重组的）、红细胞浓缩物等， ）、红细胞浓缩物等 然或重组的）、红细胞浓缩物等，用于诊 治疗或被动免疫预防。 断、治疗或被动免疫预防。 • 血液制品属于生物制品范围，主要指以健 血液制品属于生物制品范围， 康人血液为原料，采用生物学血液制品工 康人血液为原料， 艺或分离纯化技术制备的生物活性制剂。 艺或分离纯化技术制备的生物活性制剂。
N-K法的沉淀 法的沉淀II+III 法的沉淀
乙醇： 乙醇：12%，PH：4.8 ， ： 0°C，I：0.05，N：0.8% ° ，： ， ：
上清液III 上清液 废弃） （废弃）
沉淀III 沉淀
乙醇： 乙醇：25%，PH：7.2 ， ： -7°C，I：0.03，N：0.5% ° ，： ， ：
上清液II 上清液 废弃） （废弃）
（二）病毒灭活/去除处理 病毒灭活/
• 对血液制品进行灭活和去除病毒处理，是 对血液制品进行灭活和去除病毒处理， 保证输血安全的重要环节。 保证输血安全的重要环节。 • 目前，被公认有效的、广泛用于工业化生 目前，被公认有效的、 产的灭活病毒的方法有巴斯德消毒法 巴斯德消毒法、 产的灭活病毒的方法有巴斯德消毒法、有 机溶剂/表面活性剂法 表面活性剂法（ 机溶剂 表面活性剂法（S/D法）和干热灭 法 活法等。 活法等。 • 去除病毒的方法有低温乙醇血浆蛋白组分 去除病毒的方法有低温乙醇血浆蛋白组分 分离法、各种层析法 膜过滤法。 层析法和 分离法、各种层析法和膜过滤法。
血液制品的优点
• 血液制品是在临床输血的基础上发展起来 的，它通过将血浆中的有效组分分离出来 并用于治疗，较好地解决了全血不易运输 并用于治疗，较好地解决了全血不易运输 大量长期贮存中的问题 中的问题。 和大量长期贮存中的问题。
血液制品的生产工艺
（1）人血白蛋白 ）
• 人血白蛋白是血浆中含量最高的蛋白，占 人血白蛋白是血浆中含量最高的蛋白， 血浆蛋白的60%左右。目前国际上主要采 左右。 血浆蛋白的 左右 用低温乙醇法分离血浆蛋白。此法最初由 低温乙醇法分离血浆蛋白。 分离血浆蛋白 Cohn教授于 教授于1946年开发成功，当时称 年开发成功， 教授于 年开发成功 Cohn6法。此后许多学者提出了多种改良 法 方法，最有价值的是Nitschman等提出的 方法，最有价值的是 等提出的 经改良的低温乙醇分离血浆的方法， 经改良的低温乙醇分离血浆的方法，简称 N-K法。 法
血液的功能
• 红细胞：携带 2和CO2。 红细胞：携带O • 白细胞：防御功能（杀灭病原体，排斥外 白细胞：防御功能（杀灭病原体， 来异物）。 来异物）。 • 血小板：血液凝固功能（止血作用）。 血小板：血液凝固功能（止血作用）。 • 血 浆：运送营养物质和代谢物，参加调 运送营养物质和代谢物， 节体温和维持酸碱平衡。 节体温和维持酸碱平衡。
该系统必须从三个环节严格控制： 该系统必须从三个环节严格控制： 一、原料血浆的控制。 原料血浆的控制。 去除处理； 二、生产过程的病毒灭活/去除处理； 生产过程的病毒灭活 去除处理 三、对最终产品的质量控制和对临床使用的 反馈。 反馈。
（一）原料血浆的控制
• 主要从严格执行相关的原料血浆管 理政策法规以及对已采集的血液进 行严格的化验等措施来实施。 行严格的化验等措施来实施。
• 原料：血浆 原料： 水：92% - 93%；蛋白质：7% - 8%， ；蛋白质： ， 血液制品就是从这部分蛋白质分离提纯制 成的。 成的。 • 现有种类：人血白蛋白，人胎盘血白蛋白， 现有种类：人血白蛋白，人胎盘血白蛋白， 静脉注射用的免疫球蛋白等13种制品 种制品。 静脉注射用的免疫球蛋白等 种制品。 • 就我国目前的血液制品而言，还是以血浆 就我国目前的血液制品而言， 中提纯的血浆蛋白制剂为主。 中提纯的血浆蛋白制剂为主。