微生物的生长及其控制演示课件
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2、血球计数板法 计数一定容积中的细胞总数的常用方法，此法对细胞较大的酵母菌较 为适用。详细方法见实验指导书。
（二）间接法
是一种活菌计数法，其原理是活菌在液体培养基中生长繁殖使液体混浊，在固体培养基 表面形成菌落，然后计数活菌的方法。
1、平板菌落计数法 是一种常用的食品中细菌总数的计数法，有标准方法将待测样品稀 释，然后取适宜的稀释度样品与固体培养基混匀，凝固后培养，然后计数平板上出现的 菌落数乘以样品的稀释度，即可计算出样品的含菌数。也可用涂布法将稀释样品接种在 凝固的平板培养基上，后续方法同前。此法的优点是检测的结果较为精确，缺点是方法 烦琐，获得检测结果的时间长。
二、间接法
1、生理指标法 与生长量相平行的生理指标很多，它们均可用作生长测定的相 对值。
（1） 测定细胞总含氮量来确定细菌浓度 大多数细菌的含氮量为干重的12.5%， 酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%。总氮量与细胞粗蛋白的含量（因其中包括了杂 环氮和氧化型氮）的关系可用下式计算：
粗蛋白总量=含氮量%×6.25
第五章 微生物的生长及其控制
第一节 微生物生长 1 微生物生长的概念 2 微生物生长量的测定 3 微生物群体生长的规律 第二节 影响微生物生长的因素 1 物理因素对微生物生长的影响 2 化学因素对微生物生长的影响 第三节 微生物生长的控制 1.控制微生物生长的物理方法 2.控制微生物生长的化学方法
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含氮量的测定方法有很多，常用凯氏定氮法。此法适用于细胞浓度较高的样 品，同时操作过程也较麻烦，主要用于科学研究中。
（2）含碳量的测定 微生物新陈代谢的结果，必然要消耗或产生一定量的物 质，以表示微生物的生长量。一般生长旺盛时消耗的物质就多，或者积累的 某种代谢产物也多。将少量生物材料混入1ml水或无机缓冲液中，用2ml2% 重铬酸钾溶液在100℃下加热30分钟，冷却后，加水稀释至5ml，在580nm 波长下测定光密度值（用试剂作空白对照，并用标准样品作标准曲线），即 可推算出生长量。
精确的测定，要用分光光度计进行。在可见光的450~650nm波长内均可测 定。
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三、计数法
计数法即是计算微生物繁殖出的个体数目，此法适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生 物所产生的孢子。
（一）直接法
直接法即是在显微镜下直接观察细胞并进行计数的方法，其计数结果是包括死细胞在内 的总菌数。
1、比例计数法 是一种粗放的计数方法。将已知颗粒（例如霉菌的孢子或红细胞等）浓 度的液体与待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，然后镜检各自的数目，求出未知 菌液中的细胞浓度。
单细胞微生物如细菌的生长，往往伴随着细胞数目的增加。当细胞 增长到一定程度时，就以二分裂方式，形成两个相似的子细胞，子 细胞又重复上述过程，使细胞数目增加，称为繁殖。在多细胞微生 物中，例如某些霉菌，细胞数目的增加如不伴随着个体数目的增加， 只能叫生长，不能叫繁殖。例如菌丝细胞的不断延长或分裂产生同 类细胞均属生长，只有通过形成无性孢子或有性孢子使得个体数目 增加的过程才叫做繁殖。
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2 生长量的测定：
一、直接法
1．测体积 它是一种较为粗放的方法，例如将待测培养液放在刻度离心管中作 自然沉降或进行一定时间的离心，然后观察沉降物的体积。
2．称干重 采用离心法或过滤法测定，一般干重为湿重的10~20%。如用离心 法，将待测培养液离心，再用清水洗涤离心1~5次后干燥，可用105℃、100℃ 或红外线烘干，也可在较低的温度（80℃或40℃）下进行真空干燥，然后称干 重。如细菌一个细胞一般重10-12~10-13g。如为丝状真菌可用滤纸过滤，细菌 可用醋酸纤维膜等滤膜进行过滤。过滤后，细胞可用少量水洗涤，再真空干燥 （40℃以下），称干重。以乳酸菌为例，在液体培养基中，细胞的浓度大约为 2×108个/ ml。100 ml培养物可得10~70mg干重的细胞。
（3）其它 磷、DNA、RNA、ATP和 N–乙酰胞壁酸等的含量，以及产酸、 产气、产CO2（用标记葡萄糖作基质）、耗氧、粘度和产热等指标，均可用于 生长量的测定。
2、比浊法 微生物在液体培养基中生长，由于原生质含量的增加，引起培养 物混浊度的增高。最古老的比浊法是采用McFarland比浊管，用不同浓度的 Bacl2与稀H2SO4配制成的10支试管，其中形成的BaSO4有10个梯度，表示 10个相对的细菌浓度（预先用相应的细菌测定）。某一未知浓度的菌液在透 射光下用肉眼与某一比浊管进行比较，如果两者的浊度相当，即可目测出该 菌液的大致浓度。
格
均菌落数乘上稀释倍数
生长的特殊性
呈片状生长的菌落超过培养皿 的一半不能计数
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在一般情况下，当环境条件适合，生长与繁殖始终是交替进行的。 从生长到繁殖是一个由量变到质变的过程，这个过程就是发育。
生长是细胞逐步发生的量变过程， 繁殖是产生新的细胞个体的质变过程，伴随着细胞总数的增加。 个体生长 → 个体繁殖 → 群体生长
群体生长=个体生长+个体繁殖 微生物特别是单细胞微生物，体积很小，个体生长很难测定，意义 也不大。通常测定微生物的生长是测群体的生长，而测定繁殖则都 要建立在计数这一基础上。 测生长量的方法如下： 测定生长量的方法生物生长的概念
微生物在适宜的外界环境条件下，不断地吸收营养物质，并按自身 的代谢方式进行新陈代谢，如同化作用大于异化作用，其结果是原 生质的总量（包括重量、体积、大小）不断地增加，称为微生物的 生长现象。生长定义为微生物细胞在群体水平上增加，也可以认为 是微生物群体数量增加。许多微生物是以二分裂的方式生长的。一 般细胞分裂和染色体复制是协调控制的。
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血球计数板方法
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检样
做成几个适当倍数的稀释液
选择2～3个适宜稀释度， 各以1ml量加入灭菌平皿内
每皿内加入适量营养琼 脂
36+1℃ 48+2h
菌落计数
结果
菌落总数实验程序
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计数的方法
GB方法
要求计数范围在30—300之间 的菌落，当大于300或小于30
培养的温度、时间严 时，则以最接近30或300的平
（二）间接法
是一种活菌计数法，其原理是活菌在液体培养基中生长繁殖使液体混浊，在固体培养基 表面形成菌落，然后计数活菌的方法。
1、平板菌落计数法 是一种常用的食品中细菌总数的计数法，有标准方法将待测样品稀 释，然后取适宜的稀释度样品与固体培养基混匀，凝固后培养，然后计数平板上出现的 菌落数乘以样品的稀释度，即可计算出样品的含菌数。也可用涂布法将稀释样品接种在 凝固的平板培养基上，后续方法同前。此法的优点是检测的结果较为精确，缺点是方法 烦琐，获得检测结果的时间长。
二、间接法
1、生理指标法 与生长量相平行的生理指标很多，它们均可用作生长测定的相 对值。
（1） 测定细胞总含氮量来确定细菌浓度 大多数细菌的含氮量为干重的12.5%， 酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%。总氮量与细胞粗蛋白的含量（因其中包括了杂 环氮和氧化型氮）的关系可用下式计算：
粗蛋白总量=含氮量%×6.25
第五章 微生物的生长及其控制
第一节 微生物生长 1 微生物生长的概念 2 微生物生长量的测定 3 微生物群体生长的规律 第二节 影响微生物生长的因素 1 物理因素对微生物生长的影响 2 化学因素对微生物生长的影响 第三节 微生物生长的控制 1.控制微生物生长的物理方法 2.控制微生物生长的化学方法
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含氮量的测定方法有很多，常用凯氏定氮法。此法适用于细胞浓度较高的样 品，同时操作过程也较麻烦，主要用于科学研究中。
（2）含碳量的测定 微生物新陈代谢的结果，必然要消耗或产生一定量的物 质，以表示微生物的生长量。一般生长旺盛时消耗的物质就多，或者积累的 某种代谢产物也多。将少量生物材料混入1ml水或无机缓冲液中，用2ml2% 重铬酸钾溶液在100℃下加热30分钟，冷却后，加水稀释至5ml，在580nm 波长下测定光密度值（用试剂作空白对照，并用标准样品作标准曲线），即 可推算出生长量。
精确的测定，要用分光光度计进行。在可见光的450~650nm波长内均可测 定。
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三、计数法
计数法即是计算微生物繁殖出的个体数目，此法适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生 物所产生的孢子。
（一）直接法
直接法即是在显微镜下直接观察细胞并进行计数的方法，其计数结果是包括死细胞在内 的总菌数。
1、比例计数法 是一种粗放的计数方法。将已知颗粒（例如霉菌的孢子或红细胞等）浓 度的液体与待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，然后镜检各自的数目，求出未知 菌液中的细胞浓度。
单细胞微生物如细菌的生长，往往伴随着细胞数目的增加。当细胞 增长到一定程度时，就以二分裂方式，形成两个相似的子细胞，子 细胞又重复上述过程，使细胞数目增加，称为繁殖。在多细胞微生 物中，例如某些霉菌，细胞数目的增加如不伴随着个体数目的增加， 只能叫生长，不能叫繁殖。例如菌丝细胞的不断延长或分裂产生同 类细胞均属生长，只有通过形成无性孢子或有性孢子使得个体数目 增加的过程才叫做繁殖。
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2 生长量的测定：
一、直接法
1．测体积 它是一种较为粗放的方法，例如将待测培养液放在刻度离心管中作 自然沉降或进行一定时间的离心，然后观察沉降物的体积。
2．称干重 采用离心法或过滤法测定，一般干重为湿重的10~20%。如用离心 法，将待测培养液离心，再用清水洗涤离心1~5次后干燥，可用105℃、100℃ 或红外线烘干，也可在较低的温度（80℃或40℃）下进行真空干燥，然后称干 重。如细菌一个细胞一般重10-12~10-13g。如为丝状真菌可用滤纸过滤，细菌 可用醋酸纤维膜等滤膜进行过滤。过滤后，细胞可用少量水洗涤，再真空干燥 （40℃以下），称干重。以乳酸菌为例，在液体培养基中，细胞的浓度大约为 2×108个/ ml。100 ml培养物可得10~70mg干重的细胞。
（3）其它 磷、DNA、RNA、ATP和 N–乙酰胞壁酸等的含量，以及产酸、 产气、产CO2（用标记葡萄糖作基质）、耗氧、粘度和产热等指标，均可用于 生长量的测定。
2、比浊法 微生物在液体培养基中生长，由于原生质含量的增加，引起培养 物混浊度的增高。最古老的比浊法是采用McFarland比浊管，用不同浓度的 Bacl2与稀H2SO4配制成的10支试管，其中形成的BaSO4有10个梯度，表示 10个相对的细菌浓度（预先用相应的细菌测定）。某一未知浓度的菌液在透 射光下用肉眼与某一比浊管进行比较，如果两者的浊度相当，即可目测出该 菌液的大致浓度。
格
均菌落数乘上稀释倍数
生长的特殊性
呈片状生长的菌落超过培养皿 的一半不能计数
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在一般情况下，当环境条件适合，生长与繁殖始终是交替进行的。 从生长到繁殖是一个由量变到质变的过程，这个过程就是发育。
生长是细胞逐步发生的量变过程， 繁殖是产生新的细胞个体的质变过程，伴随着细胞总数的增加。 个体生长 → 个体繁殖 → 群体生长
群体生长=个体生长+个体繁殖 微生物特别是单细胞微生物，体积很小，个体生长很难测定，意义 也不大。通常测定微生物的生长是测群体的生长，而测定繁殖则都 要建立在计数这一基础上。 测生长量的方法如下： 测定生长量的方法生物生长的概念
微生物在适宜的外界环境条件下，不断地吸收营养物质，并按自身 的代谢方式进行新陈代谢，如同化作用大于异化作用，其结果是原 生质的总量（包括重量、体积、大小）不断地增加，称为微生物的 生长现象。生长定义为微生物细胞在群体水平上增加，也可以认为 是微生物群体数量增加。许多微生物是以二分裂的方式生长的。一 般细胞分裂和染色体复制是协调控制的。
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血球计数板方法
7
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检样
做成几个适当倍数的稀释液
选择2～3个适宜稀释度， 各以1ml量加入灭菌平皿内
每皿内加入适量营养琼 脂
36+1℃ 48+2h
菌落计数
结果
菌落总数实验程序
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计数的方法
GB方法
要求计数范围在30—300之间 的菌落，当大于300或小于30
培养的温度、时间严 时，则以最接近30或300的平