毕业论文

决明炭疽病菌生物学特性研究

沈凤

（四川农业大学农学院，四川成都，611130）

摘要:：对决明炭疽病果组织进行分离、病原茵鉴定及其生物学特性测定。结果表明，该病原菌初步鉴定为胶孢炭疽Colletotdchum gloeosparioides Penz．.

本实验主要研究了光照、温度、pH值、湿度、碳氮源等因素对决明炭疽病生长、产孢和分生孢子萌发的影响。结果表明,光照条件对该菌菌丝生长、产孢和分生孢子萌发的影响不明显。该菌的菌丝生长温度范围为15～35 ℃,最适生长温度30 ℃;在pH 3～12 的范围内均能生长,最适pH范围为5～7。分生孢子在15～

30 ℃都能萌发,最适萌发温度是25 ℃;在pH 3～10 范围内都能萌发,最适萌发pH 为6～8。在相对湿度低于97 %时,分生孢子不能萌发。该菌可以利用多种碳源和氮源,在供试碳氮源中,菌丝生长的最佳碳氮源分别是蔗糖和酵母粉而孢子萌发的最佳碳氮源分别为麦芽糖和酵母粉。

关键词:生物学特性炭疽病决明

Identification and Biological Characteristics of

Colletotr ichum Gloeosporioides on Semen cassiaen；Abstract：The identification and biological characterization of the pathogen isolated from Semen cassiaen induced by anthracnose were studied in this paper．The results showed that the pathogen was Colletotrlchum gloeosporioides Penz.The effects of illumination , temperature, pHvalue,humidity , carbon source and nitrogen source on the mycelialgrowth , sporulation and conidial germination of Colletotrichum gloeosporioides Penz．was primarily studied. The results showed that illumination have no much effect on the mycelial growth , sporulation and conidial germination of the fungi. Its mycelium grew between 15 -

35 ℃, and optimum temperature was at 30 ℃. It grew between pH 3 - 12 , and optimum pH volue was between pH 5 - 7. The conidia germinated between 15 - 30℃, and optimum was at 25 ℃, It germinate between pH 3 - 10 ,and optimum was between 6 - 8．The pathogen could use a variety of carbohydrates and nitrogen sources , but for the mycelial growth , the optimum carbon source was sucrose , and the optimum nitrogen source was yeast. For the sporulation , the optimum carbon source was maltose , and the optimum nitrogen source was yeast.

Key words：：Biological characteristics；Colletotrichum gloeosporioides Penz；Semen cassiaen；

决明为CassiatoraL.别名草决明。决明的种子为决明子，英文名CassiaSeed：拉丁名药材为Semen cassiaen，决明子是我国传统中药，具有清肝明目、润肠遁便的作用，用于治疗各种眼科疾病[1]。现代药理学研究又表明，决明子还具有降血压、降血脂，保肝及抑菌等活性，被应用于多种降脂

减肥的成方制剂中[2],最早记录在《神农本草经》中．目前我国23个省市有大规模种植，绝大部分分部在安徽，广东，广西，四川，浙江，山西等省。决明属(Cassia L)全世界约有600种，我国产10余种，引种栽培lO余种[3]，均可药用，对其种子研究较为深刻的有，徐国钧对小决明种子进行了粉末鉴定[4]；秦波对钝叶决明和小决明进行了生药学研究[5]。然而据

田间调查发现，炭疽病(Colleto．wichura gloeosporioides Penz．)是决明子生产中发病最严重的病害之一，该病害在决明生长期内发病呈上升趋势，且主要危害果实，严重影响了决明子的产量和品质。通过文献检索，国内其他关于炭疽病生物学特性的研究[8-12较多，却尚未发现对决明炭疽病的研究报道，本实验从采集炭疽病标样，对其进行分离鉴定，并对病原菌生长的营养成分、环境因素等生物学特性进行研究，为科学防治该病害提供理论依据。

1 材料与方法

试验于2011年3月至2010年5月在四川农业大植物病理系实验室进行。1.1试验材料

采集四川省成都市具有病斑的炭疽病病叶，按常规方法进行组织分离[6]，单孢纯化后，根据柯赫氏法则和形态学鉴定[7]后获得供试菌株，并于PDA培养基上培养7 d后用于下列实验。

1.2培养基

马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200 g，琼脂粉18 g，葡萄糖15 g，定容至1 ooo mL；燕麦培养基：称取燕麦50g，加水煮沸20min，四层纱布过滤，加入琼脂粉18 g，定容至1 000mL；胡萝卜培养基：胡萝卜200 g，琼脂粉18 g，葡萄糖l5 g，定容至1 000 mL；玉米粉培养基：称取玉米粉200 g，加水煮沸20min，四层纱布过滤，加人琼脂粉18 g，定容至1 000mL；查氏(Czapek)培养基：NaNO3 3 g，K2HPO4 l g，KC1 0．5 g，MgSO4-7H20 0．5 g，FeSO4 0．01 g，蔗糖30 g，定容至l 000 mL；绿豆培养基：称取绿豆200 g，加水煮沸20min，四层纱布过滤，加人琼脂粉18 g，葡萄糖l5 g，定容至1 000mL；西红柿培养基：称取西红柿200 g，加水煮沸20min，四层纱布过滤，加人琼脂粉18 g，葡萄糖l5 g，定容至1 000mL；

1.3 病原菌的鉴定

病原菌的分离培养采用常规的组织分离法，将采集的病叶先用洗洁精清洗叶片，自来水冲洗干净，切取病健交界处4 mm× 4 mm 的叶片及枝干小块，放入75％酒精消毒15~30 s，然后将其转入0.1％升汞消毒30 s，用无菌水清洗3 遍后，用灭菌滤纸吸干组织块，植入倒好的PDA 培养基平板上。28 ℃恒温下培养，2 d 后及时挑取菌种进行纯化，经单孢分离后保存在PDA 培养基试管斜面上。7 d 后镜检观察菌丝、孢子的形态，并进行病原菌鉴定。

1.4病原菌生物学特性的测定

1.4.1 培养基对菌丝生长的影响