第一篇 病理技术操作常规
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第一篇病理技术操作常规1.病理标本接收、固定及登记常规
2.病理标本的描写、收费常规
3.组织标本脱水常规
4.石蜡包埋操作常规
5.石蜡切片操作常规
6.冰冻切片操作常规
7.细胞学操作常规
8.苏木素-伊红染色常规
9.冷切片染色常规
10.细胞学染色常规
11.病理报告登记及发送常规
12.特殊染色操作常规
13.免疫组化操作常规
14.心、肺活检组织标本快速石蜡切片操作常规
15.病理资料保存归案及借用、借阅常规作常规
1.病理标本接收、固定及登记常规
1.1.收检标本时必须仔细检查:
a. 送检的标本和送检单上所写的是否符合(常规、冷冻、细胞学检查或其他);
b. 送检标本容器上是否贴有病人的姓名(或送检单联号)和病案号及部位的标签;同一患者同时取有数种组织,或同一组织由不同部位取出,是否应分盛容器,分别注明。
是否在病理送检单上注明送检标本的份数及部位。
c. 标本是否已固定,固定液的种类和量(固定液的量一般为标本的5~10倍)是否合适。
d. 送检单是否安要求逐项填写清楚,字迹是否清晰易于辨认。
若发现有错误、疑问或不符合要求时,应立即查询清楚或做适当处理。
e. 合格者即签收,如标本已干涸或腐败,则不应接收。
1.2.固定:普通病理检查标本一般用10%的甲醛固定液固定,细胞学检查标本用95%酒精固定。
冷冻切片的标本一般不固定。
1.3.对当日送检整体脏器或大件新鲜标本由当日值班医师进行适当处理,使标本保持良好的形态和充分固定:
a. 食管、胃、肠管:食管沿纵轴,胃沿大湾,肠管沿系膜附着纵行剪开;若该部位有病变时,应从无病变或病变较轻处剪开,按自然状态平辅在木板上固定。
b. 脾:循脾长轴切开数片,每片约为1.5~2cm固定。
c. 肺叶:从支气管灌入适量的10%福马林液,放入标本缸中固定。
d. 子宫:于前壁做“Y”形切开,下达宫颈管口,上端分别达二侧子宫角,放入标本缸中固定。
e. 乳腺:沿乳腺最长径经乳头切开,在分别向两侧每隔1.5~2cm切开数片,放入标本缸中固定。
f. 肾:经血管内注入10%福马林液固定。
沿肾脏凸面的中部作一水平切面,深及肾盂。
剪开肾盂和肾盏,将输尿管找出,并沿管壁剪开,放入标本缸中固定。
g. 其它需要切开固定的标本(大件的脂肪组织等)
1.4.收到标本后按标本性质分类编号:
a. 活体组织检查标本编号年份+流水号(以千位数开始-0001)。
b. 各种体液、穿刺液、刮片及刷片等检查标本编号以“C”为字首+年份+流水号(以千位数开始-0001)。
c. 尸体解剖标本编号以“A”为字首+年份+流水号(以十位数开始-01)。
d. 动物实验标本编号“E”为字首+年份+流水号(以百位数开始-001)。
1.5.登记:各类标本编号后按各类登记册所列项目进行登记,并将标本按顺序放置在规定的地方,以备处理及检查,不得遗失。
2.病理标本的描写、收费常规
2.1.收到标本后,将标本分类、编号在登记本逐项登记。
2.2.将当日取材的标本编号按顺序抄写在取材单上。
2.3.扼要、重点记录取材医师的描述,分别在送检单、取材单和脱水盒上记录每例的实际取材的组织块数。
2.4.送检单上记录的组织块编号应于取材单和脱水盒上的编号相一致,字迹清晰。
尽量不用或少用文字标记。
2.5.皮肤科的标本应在取材单和脱水盒上分别注明“皮”的字样。
2.6.补取或重新取材的病例,除在送检单上注明外,应分别在取材单和脱水盒上注明“补”取的字样。
2.7.取材完成后应在取材单的右下角注明取材医师和记录者。
2.8.收费:每例病例按北京市物价局统一卫生事业收费标准进行收费。
每例按实际取材的组织块数进行累计,冷冻切片按每例每次累计;免疫组化和特殊染色逐项累积。
并将收费的实际金额数记录在取材单每例标本的后面,以便核对。
3.组织标本处理系统操作常规
3.1.打开脱水槽,放入样品框,关闭脱水槽。
3.2.输入起动密码0000(当日下午)。
3.3.调整到所需工作程序,周一至周四使用工作程序I;周五使用工作程序II;若需其它工作程序可临时调整。
3.4.检查起止时间。
3.5.次日上午,查看组织处理系统液晶荧屏提示,启动抽出脱水槽内的石蜡,打开脱水槽,取出组织置入包埋中心蜡缸中,待包埋。
3.6.从烤箱取出已烤好的脱水篮及铁片放入脱水槽中,关闭脱水槽。
3.7.启动自动清洗程序,待清洗结束后,取出脱水框,检查及擦拭脱水槽。
3.8.检查I号蜡缸内的石蜡,若低于标准线,可将II号蜡缸的蜡倒入I号蜡缸内,依此循环,将IV号蜡缸内补足新蜡。
3.9.每周五更换一次清洗试剂(二甲苯与无水酒精同时更换)。
3.10.每周五更换一次固定液(AF液:甲醛10ml,95%酒精90ml)。
3.11.每月更换一次固定液、脱水液及透明液,或根据需求及时更换。
并记录更换的日期。
4.石蜡包埋操作常规
4.1.打开或自动定时起动包埋中心和冷冻台;打开工作灯,调节石蜡流量开关,预热包埋框及镊子。
4.2.选择合适的包埋框,先加入少量的蜡,用热镊子夹取组织块,使病灶或指定面向下埋入蜡中,并用镊子轻轻按压,加上该组织的塑料框格,再加合适的蜡,待蜡稍凝后将其移入冷冻台上使其加速凝固。
4.3.待全部包埋结束后,将蜡块从包埋框中取出,修整蜡块边缘多余的石蜡,按序号排列,并与取材单上逐一核对,数据准确后放入冰盒内于冰箱冷冻层内。
4.4.关闭流量开关及包埋工作灯,清理包埋机上剩余残蜡,将脱水篮及铁片于烤箱内烘烤备用。
4.5.将包埋框按大小规格清理排列放好备用。
4.6.检查包埋机溶蜡槽中的石蜡量,并及时添加。
4.7.在包埋过程中,如遇组织块的数目与所标记的数目不相符合;脱水盒开盖,组织块滑出脱水盒,不易辨认或丢失等。
应及时与取材医师联系核对,并在取材单上签字注明。
5.石蜡切片操作常规
5.1.将切片刀片装于持刀座上,调整(检查)刀刃与蜡块表面呈5度夹角。
5.2.将蜡块装于切片机的持物器内固定,旋转持物器于适当位置。
5.3.移动刀座、使蜡块与刀刃近似接触,旋紧刀座。
5.4.定好欲取切片的厚度标尺(4~6微米)。
5.5.右手速度均匀的转动切片机旋转轮。
左手轻轻转动微动装置,使样品徐徐向前推进,直至组织平面完全修出平整或所需的部分已切出,微小组织应注意勿修切过多。
5.6.右手持镊子夹住切片的上端,左手以毛笔衬于切片下面,轻轻将切片平摊于40℃左右温水内,切片即自行展平,或用镊子将少许折皱摊平;用镊子由切片相连的骑缝处分开,取玻片插入切片下,以镊子将蜡片引向玻片之适当位置。
5.7.裱片于玻片下1/3中间位置,使切片与玻片之间无气泡,裱好后随即在切片写上号码。
5.8.将切片置烤片机内烤干30分钟以上即可染色。
5.9.有特殊要求者应按要求切片。
5.10.切片结束后,将切片机上蜡絮彻底清理。
6.冷冻切片操作常规
6.1.接通电源开关,打开箱内照明灯,设定或调整切片温度(-25℃左右)。
6.2.将切片刀装入持刀架上固定。
6.3.将待切样品以OCT包埋在持物托上置于切片机冷冻台冷冻,打开速冻开关。
6.4.待切片机箱内温度达到设定温度及样品冻硬后,将样品连同持物托一同置于持物架上,固定。
6.5.右手转动旋转轮,左手间断按动样品前进开关,使样品徐徐向前推进,直至组织平面完全修出平整。
6.6.调整好防卷板至刀刃平行,定好欲取切片的厚度标尺(6~10微米),放下防卷板,速度均匀的转动切片机旋转轮,切片。
6.7.打开防卷板,用玻片吸附切片,切片会自然附贴于玻片上。
6.8.以丙酮固定1-3分钟即可进行染色。
6.9.染色完毕后,将持物托上的剩余组织放入10%甲醛液内固定,并在容器上注明病人姓名。
6.10.将持物托用水洗涤干清、擦干备用。
6.11.将切片机中的碎组织彻底清理干净,用棉花蘸无水酒精轻轻擦拭防卷板及刀架。
6.12.关闭箱内照明灯,将切片机温度调至保持温度(-16℃)。
7.细胞学操作常规
7.1.痰:标本必须新鲜,咯痰前应先潄口,要求患者从呼吸道深部咯出,痰中不应含食物碎渣。
挑取标本,应选择痰中坏死组织、带血丝;透明而高度粘稠部分;灰白色细丝状、血痰外的粘液等。
做成厚薄均匀的涂片2~4张。
7.2.浆膜腔抽出液:标本应是新鲜(80分钟以内)送检。
以2000r/min离心5~10分钟,取沉淀物作均匀涂片2~4张。
若标本为脓性无法离心时,可直接做推片。
7.3.尿液:收集新鲜晨尿,1000~2000r/min离心5~10分钟,取沉淀物作涂片2~4张。
7.4.脑脊液:新鲜标本以2000r/min离心10~15分钟,取沉淀物涂片1~2张。
脑脊液中细胞较少,离心后尽量倒出全部上清,再取沉淀物。
7.5.胃液、胃冲洗液:将全部标本以3000r/min离心10~20分钟,取沉淀物做2~4张涂片。
7.6.其它:内镜的细胞刷采取的刷片、子宫颈的刮片、细针穿刺物及其它分泌物的标本,由临床医师做成涂片,固定后送检。
7.7.固定:各类涂片编号后,以95%酒精溶液固定15分钟以上。
并每日更换1~2次。
8.苏木素-伊红染色操作常规
8.1.石蜡切片入二甲苯溶液I脱蜡5~10分钟。
8.2.二甲苯溶液II脱蜡5~10分钟。
8.3.二甲苯溶液III脱蜡5~10分钟。
8.4.纯酒精溶液洗5~10分钟。
8.5.95%酒精溶液5~10分钟。
8.6.80%酒精溶液洗5~10分钟。
8.7.自来水冲洗。
8.8.入苏木精染液5~10分钟,水洗。
8.9.1%盐酸酒精溶液分化数十秒钟。
8.10.流水洗至细胞核呈蓝色。
8.11.伊红染色液染30秒钟~5分钟。
8.12.自来水洗数秒钟。
8.13.80%酒精溶液脱水1分钟。
8.14.95%酒精溶液脱水1~5分钟。
8.15.纯酒精溶液I脱水1~5分钟。
8.16.纯酒精溶液II脱水1~5分钟。
8.17.纯丙酮脱水1~5分钟。
8.18.二甲苯溶液I透明5~10分钟。
8.19.二甲苯溶液II透明5~10分钟。
8.20.中性树胶封固,粘贴标签。
9.冷冻切片染色常规
9.1.丙酮固定5~10分钟(术中冷冻切片固定1~2分钟)。
9.2.自来水冲洗。
9.3.入苏木精染液2~5分钟。
9.4.自来水洗。
9.5.1%盐酸酒精溶液分化数秒钟。
9.6.自来水洗、兰化。
9.7.伊红染色液染30秒钟~2分钟。
9.8.自来水洗数秒钟。
9.9.80%酒精溶液脱水1分钟。
9.10.95%酒精溶液脱水1~5分钟。
9.11.纯酒精溶液I脱水1~5分钟。
9.12.纯酒精溶液II脱水1~5分钟。
9.13.纯丙酮脱水1~5分钟。
9.14.二甲苯溶液I透明5~10分钟。
9.15.二甲苯溶液II透明5~10分钟。
9.16.中性树胶封固,粘贴标签。
10.细胞学染色常规
10.1.95%酒精溶液固定15分钟。
10.2.自来水冲洗。
10.3.入苏木精染液2~5分钟。
10.4.自来水洗。
10.5.1%盐酸酒精溶液分化数秒钟。
10.6.自来水洗、兰化。
10.7.伊红染色液染30秒钟~5分钟。
10.8.自来水洗数秒钟。
10.9.80%酒精溶液脱水1分钟。
10.10.95%酒精溶液脱水1~5分钟。
10.11.纯酒精溶液I脱水1~5分钟。
10.12.纯酒精溶液II脱水1~5分钟。
10.13.纯丙酮脱水1~5分钟。
10.14.二甲苯溶液I透明5~10分钟。
10.15.二甲苯溶液II透明5~10分钟。
10.16.中性树胶封固,粘贴标签。
11.病理报告的登记及发送常规
11.1.病理报告的发出:病理报告一旦发出应及时送登记室(登记处)登记。
登记时发现报告有疑问或字迹不清时,应及时通知报告医师更改。
登记完后,将送检单存根按编号顺序排列放置指定的位置存放,以便装订。
11.2.报告登记后,将报告单按科室及病房登记其编号,于每日下午4:00前由卫生员分送到相应的科室和病房,并由临床医师或护士签收。
11.3.冷冻切片病理报告一经发出,由卫生员或当班技术员立刻送到手术室。
11.4.门诊自取病理报告,由病人或病人亲属签字后方可取走。
住院病人的病理报告,一律不能由病人或病人亲属自行取走,临床医师签字后方可取走。
12.特殊染色操作常规
12.特殊染色操作常规(目录)
12.1.Mallory氏三色染色法(简称MCT法)
12.2.Masson氏改良三色染色法
12.3.Van Gieson氏苦味酸酸性复红染色法(简称VG法)
12.4.Verhoeff氏铁苏木素弹力纤维染色法
12.5.Weigert氏间苯二酚品红染色法
12.6.Foot氏网状纤维染色法
12.7.PAS过碘酸雪夫氏反应法
12.8.AB-PAS阿尔辛蓝过碘酸雪夫氏反应法
12.9.Alcian blue染色法(pH2.5)
12.10.Alcian blue染色法(pH1.0)
12.11. Perls氏反应法(显示含铁血黄素)12.12.Masson-Fontana氏银染色法
12.13.Groctt-Gomori氏六胺银染色法
12.14.Mallary磷钨酸苏木素法(PTH)12.15.梗死心肌的鉴别染色法
12.16.苏丹IV染色法
12.17.油红O染色法
12.18.Mayer粘液染色法
12.19.碱性刚果红法
12.20.Von Kossa显示钙盐法
特殊染色操作常规I
12.1.Mallory氏三色染色法(简称MCT法)[试剂配制]
明矾苏木素染液
0.5-1%盐酸酒精
0.5%酸性复红水溶液:酸性复红0.5g
蒸馏水100ml
Mallory氏苯胺蓝橘黄G溶液:水性苯胺蓝0.5g
橘黄G 2g
磷钨酸1g
蒸馏水100ml
配制:先配制成1%磷钨酸水溶液,然后用两个烧杯,各加入约三分之一的磷钨酸水溶液,再分别加入苯胺蓝和橘黄G,稍加温溶解。
待两液完全溶解后,分别过滤,并将滤液混合在一起。
最后用剩于的磷钨酸溶液冲洗容器亦过滤入混合容器中。
染色前最好再过滤一次即可使用。
[操作步骤]
1.石蜡切片3~5μm,脱蜡至水洗。
2.组织系用含汞盐固定液脱去汞盐沉淀。
3.用明矾苏木素染液染色2~3分钟。
4.水洗1~2分钟。
5.用0.5~1%盐酸酒精液分化片刻。
6.水洗返蓝,镜检胞核着色程度。
7.蒸馏水稍洗。
8.用0.5%酸性复红水溶液染色1~5分钟。
9.不经水洗,直接用苯胺蓝橘黄G染液染色20~40分钟。
10.用80%酒精液速洗一次,再以95%酒精液分化兼脱水。
11.无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
[结果]
胶原纤维、网状纤维、碱性颗粒呈深蓝色,黏液、软骨、淀粉样物质呈淡蓝色,纤维素、肌纤维神经胶质、酸性颗粒呈鲜艳的红色,弹力纤维、红血球、髓鞘呈橘黄色或橘红色,细胞核呈黑蓝色。
12.2.Masson氏改良三色染色法
[试剂配制]
Weigert氏铁苏木精
丽春红酸性复红染液:丽春红0.8g
酸性复红0.4g
蒸馏水99ml
冰醋酸1ml
亮绿染液:亮绿2g
蒸馏水98ml
冰醋酸1ml
0.2%冰醋酸水溶液
1%磷钼酸水溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水洗。
2.蒸馏水稍洗。
3.用Weigert氏铁苏木精或明矾苏木素液染核5~10分钟。
4.充分水洗蓝化后镜检。
如过染时,可用0.5%盐酸酒精稍分化,水洗。
5.蒸馏水洗1~2分钟。
6.用丽春红酸性复红染液染色5~10分钟。
7.以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。
8.用1%磷钼酸水溶液分化处理3~5分钟。
9.以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。
10.用2%亮绿染液染色3~5分钟。
11.0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。
12.95%酒精至无水酒精脱水。
13.二甲苯透明,中性树胶封固。
[结果]
胶原纤维呈绿色或蓝色,弹力纤维呈棕色,肌纤维、纤维素、红血球呈红色,细胞核呈黑蓝色。
12.3.Van Gieson氏苦味酸酸性复红染色法(简称VG法)
[试剂配制]
Weigert氏铁苏木素染液:苏木精1g
纯酒精100ml
29%三氯化铁溶液4ml
盐酸1ml
蒸馏水95ml
配制将苏木精溶于酒精内,放置1—4周使其成熟,为A液。
将29%三氯化铁水溶液及盐酸加入蒸馏水中为B液,临用时A,B两液等量混合。
Van Gieson氏溶液:1%酸性品红水溶液10ml
苦味酸饱和水溶液(1.22%)90ml。
配制:先将两液分别配制好备用,临用时按所需要的比例混合,过滤后即可使用。
新配制的染液着色能力强,放置一定时间后,染色力则逐渐减弱。
[操作步骤]
1.石蜡切片3~5μm,脱蜡至水洗。
2.用Weigert氏铁苏木精或明矾苏木素液染色5~10分钟。
3.充分水洗。
4.用Van Gieson氏溶液染色1~5分钟。
5.倾去染液,直接用95%酒精液急速分化约数秒钟。
6.无水酒精脱水。
7.二甲苯透明,中性树胶封固。
[结果]
胶原纤维呈红色、肌肉、神经胶质、胞浆、红血球呈黄色,细胞核呈黑蓝色或棕蓝色。
12.4.Verhoeff氏铁苏木素弹力纤维染色法
[试剂配制]
Verhoeff氏铁苏木素染液:5%苏木素纯酒精液20ml
10%三氯化铁水溶液8ml
Verhoeff氏碘溶液8ml
将上述三液分别配制贮存,临用时按比例混合摇荡使用。
此液不可久存。
Verhoeff氏碘溶液:碘2g
碘化钾4g
蒸馏水100ml
2%三氯化铁水溶液
5%硫代硫酸钠水溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡蒸馏水洗。
2.用Verhoeff氏染液染色15~30分钟,至颜色呈深黑色。
3.自来水洗。
4.2%三氯化铁溶液分化10~20秒钟(至弹力纤维清晰为止)。
5.充分自来水洗。
6.用5%硫代硫酸钠溶液处理5分钟。
7.充分自来水洗,再用蒸馏水洗。
8.95%酒精急速分化。
9.无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
[结果]
弹力纤维呈黑色或蓝黑色,肌纤维、纤维素、神经胶质呈黄色,胶原纤维呈红色,胞核呈蓝黑色。
12.5.Weigert氏间苯二酚品红染色法
[试剂配制]
Weigert氏间苯二酚品红染液:盐基性品红2g
间苯二酚(雷锁辛)4g
蒸馏水200ml
配制:将上述染料和蒸馏水放入烧杯内加热煮沸,再加入29%三氯化铁水溶液25ml,用玻璃搅棒不停的混合搅拌2-5分钟。
室温冷却,然后过滤,倾去滤液,将滤液和上面的沉淀物一同放回烧杯中,并置于干燥箱内烘干,烘干后取出并加入95%酒精液200ml,在水浴上加热至沉淀物完全溶解,取出滤纸,待液体冷却后过滤,再添补蒸发失去的酒精量至200ml,最后加入4ml浓盐酸,即可应用。
此液密封可保持数月,但其染色力能够逐渐减弱最终失败。
Van Gieson氏染液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至95%酒精。
2.用Weigert氏间苯二酚品红染液1~2小时或更长时间,视染色液的新旧定。
3.切片从染液中取出直接用95%酒精洗去多余染液,并分化至无余色脱下为止。
此时可在镜下观察,如果染色弥漫不清晰,可再用1%盐酸酒精稍加分化。
4.充分水洗5分钟。
5.需复染胞核,可用明矾苏木素水溶液染色2-5分钟。
6.水洗2-3分钟。
7.用Van Gieson氏液作对比染色。
8.95%酒精急速分化。
9.无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
[结果]
弹力纤维呈深蓝色或黑蓝色,胶原纤维呈红色,肌纤维和红血球呈黄色,胞核呈黑蓝色。
12.6.Foot氏网状纤维染色法
[试剂配制]
0.25%高锰酸钾水溶液
1%草酸水溶液
Foot氏银溶液:10%硝酸银水溶液10ml
40%氢氧化钠水溶液10滴
配制:取10%硝酸银水溶液,加入40%氢氧化钠水溶液10滴,立即产生棕褐色的氢氧化银沉淀,经摇荡、静置、待沉淀物全部沉底,倾去上清夜,用二次蒸馏水将沉淀洗涤3-4次,倒掉最后一次蒸馏水,再加入二次蒸馏水至10ml。
然后再逐滴加入浓氨水,边加边摇动,直至沉淀物接近溶解为止。
应避免氨水加至过量,以能滤出一些沉淀微粒为妥。
最后加至蒸馏水50ml,过滤后使用。
此液只能在低温处保存数月。
2%硝酸银水溶液
20%甲醛水溶液
0.2%氯化金水溶液
5%硫代硫酸钠水溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片4~6μm,脱腊至水洗。
2.蒸馏水稍洗。
3.用0.25%高锰酸钾水溶液氧化5分钟。
4.蒸馏水洗1~2分钟。
5.1%草酸水溶液漂白5分钟。
6.水洗1~2分钟。
7.蒸馏水稍洗。
8.2%硝酸银水溶液置于阴暗处,在室温下染色12-24小时。
9.蒸馏水速洗。
10.用Foot氏银溶液染20~40分钟。
11.蒸馏水速洗。
12.用20%甲醛水溶液还原5~10分钟(中间更换1-2次)。
13.蒸馏水洗2~3分钟。
14.用0.2%氯化金水溶液调色5分钟。
15.蒸馏水洗2~3分钟。
16.用5%硫代硫酸钠水溶液固定5分钟。
17.充分水洗,根据需要可用HE或VG氏液复染。
18.95%酒精及无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
[结果]
网状纤维呈黑色或黑褐色,其它组织呈复染的颜色。
12.7.PAS过碘酸雪夫氏反应法
[试剂配制]
1%过碘酸水溶液
Schiff氏试剂:1mol/L盐酸20ml
碱性品红1g
亚硫酸氢钠1g
活性炭2g
蒸馏水200ml
配制:先将蒸馏水加热煮沸后,去火加入碱性品红,并不停摇荡5分钟使其溶解;待溶液冷却至50摄氏度时过滤,在加入当量盐酸;冷至25摄氏度再加入亚硫酸氢钠摇荡。
将容器密闭后存放暗处或冰箱内静止12-24小时,此时的溶液以淡黄色或无色为好,为消除溶液的颜色再加入活性炭2g,摇荡1分钟后过滤,溶液将成为无色透明状态;贮存于4摄氏度冰箱内,临用前取出,待溶液升至室温时使用。
亚硫酸氢钠溶液:亚硫酸氢钠2g
蒸馏水180ml
1mol/L盐酸20ml
[操作步骤]
1.石蜡切片3~5μm,脱腊至水洗。
2.蒸馏水洗1~2分钟。
3.用1%过碘酸水溶液氧化5~10分钟。
4.充分水洗。
5.蒸馏水洗涤数次。
6.Schiff氏试剂染5~10分钟(温度低时可延长浸染时间)。
7.倾去Schiff氏试剂,不经水洗直接浸入新配制的亚硫酸氢钠液内洗3次,每次2分钟,然后流水冲洗10分钟。
8.过染时可用明矾苏木素液浅染胞核2~3分钟,用0.5%盐酸酒精液稍分化。
9.流水冲流5~10分钟。
10.脱水、透明,中性树胶封固。
[结果]
糖原及其它PAS反应阳性物质均呈红色,细胞核呈蓝色。
PAS反应阳性物质
12.8.AB-PAS阿尔辛蓝过碘酸雪夫氏反应法[试剂配制]
1%阿尔辛蓝醋酸水溶液:阿尔辛蓝1g
蒸馏水97ml
冰醋酸3ml
临用前过滤使用,pH值为2.5-3.0之间。
1%过碘酸水溶液
Schiff氏试剂
亚硫酸氢钠溶液:亚硫酸氢钠2g
蒸馏水180ml
1mol/L盐酸20ml
[操作步骤]
1.石蜡切片3~5μm,脱腊至水洗。
2.蒸馏水洗1~2分钟。
3.用1%阿尔辛蓝醋酸水溶液染色10-20分钟。
4.蒸馏水洗3~4次。
5.用1%过碘酸水溶液氧化5~10分钟。
6.蒸馏水洗3~4次。
7.用Schiff氏试剂浸染10~20分钟。
8.倾去染液直接用亚硫酸氢钠液洗3次,每次2分钟。
9.流水冲洗5~10分钟。
10.过染时可用明矾苏木素液浅染胞核2~3分钟,用0.5%盐酸酒精液稍分化。
11.充分水洗返蓝。
12.脱水、透明、中性树胶封固。
[结果]
酸性黏液物质呈蓝色,中性黏液物质呈红色,混合黏液物质呈紫红色,细胞核呈浅蓝色。
12.9.Alcian blue染色法(pH2.5)
[试剂配制]
3%醋酸水溶液
1%阿尔新蓝染液:阿尔新蓝1g
3%醋酸水溶液100ml
1%中性红水溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片4~6μm,脱腊至蒸馏水洗数次。
2.用3%醋酸水溶液洗涤。
3.1%阿尔新蓝染液染10~30分钟。
4.3%醋酸水溶液洗涤,吸水纸吸干。
5.1%中性红水溶液染细胞核2~3分钟。
6.水洗,常规脱水,透明,中性树胶封固。
[结果]
酸性粘液(唾液酸粘液)呈鲜蓝绿色,细胞核呈红色。
12.10.Alcian blue染色法(pH1.0)
[试剂配制]
0.1mol/L盐酸溶液
1%阿尔新蓝染液:阿尔新蓝1g
0.1mol/L盐酸溶液100ml
1%中性红水溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片4~6μm,脱腊至蒸馏水洗数次。
2.用0.1mol/L盐酸溶液。
3.1%阿尔新蓝染液染10~30分钟。
4. 0.1mol/L盐酸溶液,吸水纸吸干。
5.1%中性红水溶液染细胞核2~3分钟。
6.水洗,常规脱水,透明,中性树胶封固。
[结果]
硫酸化性粘液呈鲜蓝绿色,细胞核呈红色。
特殊染色常规II
12.11. Perls氏反应法(显示含铁血黄素)
[试剂配制]
Perls氏溶液:2%亚铁氰化钾水溶液25ml
2%盐酸水溶液25ml
两液分别配制贮存,临用前等量混合过滤使用。
0.5%碱性品红酒精溶液:碱性品红0.5g
50%酒精液100ml
[操作步骤]
1.石蜡切片4~6μm,脱腊至蒸馏水洗数次。
2.用Perls氏溶液染色20~30分钟。
4.0.5%碱性品红酒精溶液复染30~50秒钟。
5.直接以95%酒精液迅速分化及脱水。
6.无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
[结果]
含铁血黄素成蓝色,其它组织均呈红色。
12.12.Masson-Fontana氏银染色法
[试剂配制]
氨银溶液:5%硝酸银水溶液40ml
浓氨水
配制:取5%硝酸银水溶液40ml,然后逐滴加入浓氨水至产生沉淀,逐渐溶解变清,再滴加硝酸银水溶液数滴至溶液呈轻度浑浊为度。
此溶液虽可短期保存,但最好临用前现配制。
0.2%氯化金水溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片4~6μm,脱腊至水洗。
2.蒸馏水充分洗涤3~5分钟。
3.用氨银溶液置于避光浸染12~18小时或更长时间。
4.蒸馏水洗1~2分钟。
5.用0.2%氯化金水溶液处理5~10分钟。
7.用5%硫代硫酸钠水溶液固定5分钟。
8.充分水洗5分钟。
9.需要时可用HE、VG氏液或中性红液等复染。
10.95%酒精及无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
[结果]
黑色素及嗜银细胞颗粒呈黑色,其它组织呈复染的颜色。
12.13.Groctt-Gomori氏六胺银染色法
[试剂配制]
5%铬酸水溶液
1%亚硫酸氢钠液
六胺银液染液:环六亚甲基四胺银原液25ml
蒸馏水25ml
25%硼砂水溶液(四硼酸钠)5ml
将硼砂水溶液加入蒸馏水内,然后再加入六胺银原液,用前配制。
环六亚甲基四胺银原液:5%硝酸银水溶液5ml
3%乌洛脱品100ml
两液混合,立即产生白色沉淀,振荡后即溶解而澄清。
此液放置于冰箱内备用,可保存数月。