油脂DNA的提取方法

油脂DNA的提取方法
人工手提法
一、试剂
植物油；
PBS缓冲溶液：NaC1(138mmo1/L )，KCI(2.7 mmo1/L )，Na2HPO4(10 mmo1/L ),NaH2PO4 (1．8 mmo1/L ) ；
正己烷，硫酸铵溶液，酚，氯仿，无水乙醇。

二、仪器
磁力搅拌器，离心机。

三、步骤
1.500 ml精炼植物油加入500ml正己烷，在磁力搅拌器中充分混匀，4 h；
2.加入1000ml PBS缓冲溶液在磁力搅拌器中充分混匀，6 h；
3.12O00xg离心20 min，小心取出下层水相．加入(NH4)2SO4沉淀过夜。

12O00xg离心20 min，保留沉淀；
4.在沉淀中加入800 μl水，充分溶解沉淀后，加入等体积的酚和氯仿抽提，12 O00xg离心10 min，取上清，加入二倍体积的无水乙醇，4 摄氏度20 min，12 000xg离心10min，保留沉淀，自然风干后，加50μl的水溶解沉淀，4摄氏度保存备用。

离心柱法
一、试剂
植物油，异丙醇；
PBS缓冲溶液：NaC1(138mmo1/L )，KCI(2.7 mmo1/L )，Na2HPO4(10 mmo1/L ),NaH2PO4 (1．8 mmo1/L ) ；
二、仪器
磁力搅拌器，离心机，离心柱。

三、步骤
1、取10m1精炼植物油加入10m1正己烷，在磁力搅拌器中充分混匀，2 h；
2、加入20 ml PBS在磁力搅拌器中充分混匀，2～3 h；
3、12 O00xg离心20min，小心取出下层水相；
4、加入等体积的异丙醇，混匀，常温置lOmin后，12 000×g离心10 min，去上清，保留沉淀；
5、加入1 ml H2O溶解沉淀，加入1 ml异丙醇，混匀，常温置10 min 后，12 000×g离心10 min，去上清，保留沉淀；
6、在沉淀中加入60μl水，充分溶解沉淀，5 min后过离心柱，分别加入配套试剂，最后离心获得的溶液即得DNA。

DNA试剂盒提取法
一、试剂
植物油，蛋白质沉淀溶液（硫酸铜溶液），异丙醇，70％乙醇，DNA水合液。

二、仪器
Wizard Genomic DNA Purification Kit（购自Promega）,离心机。

三、步骤
1、在1．5 ml离心管中加人0．5 mI植物油，然后按照Wizard Genomic DNA Purification Kit说明书操作步骤提取DNA；
2、加入200 μl蛋白质沉淀溶液，充分混匀20秒，13000 g离心3 min，小心地移出含有DNA的上清液，将其转移到预先加入600 μl室温异丙醇的1．5 ml的离心管中，轻轻地颠倒混匀溶液，室温离心13000 g lmin。

3、小心倒出上清，添加室温70％乙醇600 μl；轻轻的颠倒管几次，以洗涤DNA，13000 g室温离心1 min，小心吸出乙醇；
4、室温干燥15 min，添加100 μlDNA水合液，65摄氏度温育1 h，其间周期性的敲打管壁，置4摄氏度保存备用。