多糖的分离纯化及药理作用

多糖的分离纯化及药理作用多糖包括植物多糖、动物多糖和微生物多糖。

人们已发现多糖不仅是机体的能量来源和骨架成分，而月还具有抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、免疫调节及降血糖等多种生物活性。

1.板栗多糖的分离纯化及抗氧化活性研究
1. 1板栗多糖的提取及纯化
（1）板栗粗多糖的提取
称取原料粉末50 g，加入去离子水1000 ml在100℃水浴中回流2h.先用纱布过滤，然后离心除去不溶物质。

将提取液减压浓缩至约200 ml然后将体积比为4: 1的三氯甲烷/正丁醇混合液等体积加入多糖溶液中。

振荡30 min后，静置，除去中间层变性蛋白质，并收集上层清液，重复以上操作3次去除蛋白。

向滤液中加入95%乙醇至含乙醇量达到80%，边加边搅拌，得灰白色絮状沉淀。

静置6h后，倾出上层清液，余下进行离心分离沉淀，回收上层乙醇溶液。

固体部分用少量无水乙醇洗涤2次，再用无水乙醚洗涤2次，自然晾干即为粗多糖(CPS)。

（2）板栗粗多糖的纯化
将二乙胺基乙基纤维素（DE-A E- 52)处理后填充3. 0 x 50 cm层析柱,用2倍量蒸馏水平衡。

取0. 5 g多糖用蒸馏水溶解后上样，蒸馏水洗脱后分别用0. 1. 0. 3. 0. 5 mol/ L氯化钠溶液梯度洗脱，洗脱液流速为60 ml/ h 分部收集，每管10 ml隔管取0. 2 ml洗脱液用苯酚-硫酸法检测洗脱液中多糖的含量。

以480 nm处吸收值为纵坐，分部收集的管数为横坐标，做出多糖的洗脱曲线。

将柱层析分出的各个组分分别合并收集，减压浓缩至100 ~ 200 ml，自来水流水透析48 h,去离子水透析24 h,每4—6 h换一次水。

离心除去不溶性杂质后，用4倍体积的95%乙醇进行沉淀，固体部分用少量无水乙醇洗涤2次，再用无水乙醚洗涤2次，自然晾干后得纯化多糖( CPS1)
2胡萝卜多糖的分离纯化及抑制小鼠酒精肝损伤作用研究
2.1胡萝卜粗多糖的制备
（1）将胡萝卜洗净，切丝，于50℃烘干，粉碎。

按料液比1:10，超声波处理时间为25 min，超声波功率800 W，纤维素酶用量为0.8 %（w/w)，酶解温度50℃，酶解pH为4.5 ,酶解时间50 min. 6层纱布过滤，4500 r/min离心15min，取上清液，浓缩，用3倍量浓缩体积的95%乙醉沉淀24 h, 4500 r/min离心10 min，收集沉淀，冷冻干燥，得到胡萝卜粗多糖
2．2胡萝卜多糖的分离纯化
胡萝卜粗多糖经除蛋自后，既得精制胡萝卜多糖CP。

采用DEAE-cellulose 52柱层析对精制胡萝卜多糖进行初步分级分离，为获得精制多糖，将分离所得组分分别经过SephadexG-100凝胶柱层析进一步纯化.
3玉米花粉多糖的分离纯化
3. 1玉米花粉多糖提取
预处理过的玉米花粉加水，在一20℃冷冻24 h以上(或加碱或不作处理)，取出后迅速加人到60 0C以上的热水中搅拌，使花粉内部的物质自萌发孔处溢出，经真空抽滤或离心收集滤液;滤渣再经此操作数次。

合并提取液并浓缩。

浓缩液加3~5倍体积95%以上乙醇，收集沉淀物，经过低温真空干燥或常压80℃干燥，即为玉米花粉粗多糖PPM 。

3. 2玉米花粉多糖纯化
PPM通过Savag法脱蛋白后透析、离心。

上清液加人乙醇使之体积分数达到30%，离心得沉淀PPMA;继续向上清液中加乙醇使之体积分数达到60%，离心得沉淀PPMB;再向溶液中继续加乙醇使之体积分数达到75%，离心得沉淀PPMC。

然后将PPMC经过DEAE-Sephadex A-25柱层析，得到多糖PPMC-1。

后者再用DEAE-Sepha-dex U-200凝胶柱层析，进行纯度鉴定。

3. 3玉米花粉多糖的理化性质
玉米花粉多糖为淡黄色絮状固体，可溶于水，溶解性随PPMC, PPMB, PPMA依次增加，各级分都不溶于乙醇、丙酮、乙醚等有机溶剂。

3种多糖与碘化钾的反应均不显蓝色，说明是非淀粉类多糖。

3种多糖的斐林试剂反应及三氯化铁反应为阴性，说明它们都不含单糖和多酚类物质。

而CTAB反应、考马斯亮蓝反应和260 nm吸收均为阳性，说明3种多糖含有糖醛酸、蛋白质，而且可能含有核酸。

以上结果进一步说明3种多糖级分可能为含蛋白质的二元糖缀合物。

3.4玉米花粉多糖的生理作用
玉米花粉多糖(PPM)系从玉米花粉中提取的水溶性多糖，研究表明:PPM可提高小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数;其对大鼠肺泡巨噬细胞具有激活作用;PPM可以抑制肿瘤，对高血脂也有一定疗效。

4油松花粉多糖分离纯化
4.1热水提取油松花粉多糖
取一定量经破壁脱脂、酒精浸提处理的油松花粉，按料液比
(g/mL)1:10加水，60℃下提取。

离心，合并上清液，减压浓缩，加入4倍量的95%乙醇过夜沉淀，离心取沉淀，用无水乙醇、丙酮洗涤，得油松花粉粗多糖。

4.2水提多糖的分离纯化
将油松花粉粗多糖溶于水，用10%三氯乙酸（TCA）除蛋白，剧烈振荡，离心收集上清液，减压浓缩，重复操作直至不再产生白色沉淀。

然后取多糖浓缩液流水透析48 h，减压浓缩，加入4倍量的95%乙醇过夜沉淀，离心取沉淀，用无水乙醇、丙酮洗涤，得油松花粉精制多糖。

先用DEAE—纤维素52柱进行初步分离，分离组分再用Sephaeryl S-200。

柱进一步细分即得精制油松花粉多糖
4.3油松花粉多糖的生理作用
油松花粉营养丰富、全面，含多种维生素、蛋白质、氨基酸，不饱和脂肪酸，单糖，多糖，其中多糖含量丰富，含量达1.2 %~2.5 %。

目前国内外药理学研究证明松花粉能增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖等作用。

5豌豆多糖的抗氧化与抑菌活性研究
5.1豌豆水溶性多糖的提取
称取干燥豌豆豆渣20. 0 g，加入200 ml六偏磷酸钠水溶液，在80℃水浴加热回流4. 5h，过滤，将豆渣放回蒸馏烧瓶中，重复上述步骤2次(每次加200 ml六偏磷酸钠水溶液作为提取液)，合并3次的滤液，将所得溶液用旋转蒸发仪蒸发浓缩至体积约100 ml离心(4 000 r/min， 10 min)弃去残渣，上清液为多糖水溶液。

将上清液移入100 ml烧杯，加入三氯甲烷:正戊醇=5: 1（体积比）溶液，剧烈振荡，摇20 min离心，分去水层和溶液层交界处的变性蛋自质，得脱蛋自多糖溶液，重复2次。

向脱蛋白多糖溶液中加入4倍体积的浓度95%乙醇沉淀，静置24 h，离心(4 000
r/min， 10 min)，取上清液，固态物用浓度95%乙醇、无水乙醇、丙酮依次进行洗涤，于50 0C恒温干燥24 h即为豌豆多糖。

3豌豆多糖的生理作用
(1)豌豆多糖在体外对·OH, DPPH·和()丁·都有一定的清除作用。

在豌豆多糖浓度为1.0 mg/ml时，对·OH,DPPH·,0-.的清除率分别为53. 34%
,30. 35% ,39. 63%，可见清除·OH的能力强于清除DPPH"的能力。

和V c 对比，清除效果弱于Vc,但对自山基还具有明显的清除能力。

因此，豌豆多糖能够清除自由基，阻断自由基反应链，具有一定的抗氧化和防衰老作用，可作为清除人体系统内自由基的抗氧化剂。

(2)豌豆多糖具有良好的体外抑菌活性，对藤黄八叠球菌、普通变形球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌具有一定的抑菌活性，并表现出一定的剂量依赖关系，其中对八叠球菌、变形球菌和金黄色葡萄球菌具有明显的抑制作用，对枯草芽抱杆菌的抑制作用不明显。