6.黄国宁-辅助生殖技术评审

辅助生殖技术评审和校验
（实验室部分）
黄国宁
重庆市妇幼保健院遗传与生殖研究所
《卫生部关于修订人类辅助生殖技术和人类精子库相关技术规范、标准及伦理原则的通知》，卫教科发[2003]176号
器官移植
人类辅助生殖技术
仅有的两个纳入卫计委专项管理的医疗技术
实验室准入和校验评审
一．场所
二．仪器/设备
三．人员
四．管理
五．质量标准
六．校验
七．数据参考
一、场所
1.位置
2.布局和面积
3.空气质量
1. 位置
位置要求
远离放射科和检验科，以避免挥发性以及放射性物质
处在通风良好的较高楼层
2. 布局和面积
主要场所面积：
名称面积（m2）标准超声室15 卫生部医疗场所III类取精室 5
精液处理室10
取卵室25 卫生部医疗场所II类体外受精室30 卫生部医疗场所I类
胚胎移植室15 卫生部医疗场所II类
3. 空气质量
•VOCS
•尘埃粒子
•压差
•风速
• VOCS ≤ 0.5（mg/m3）
——民用建筑工程室内环境污染控制规范（ GB50325-2010 ）
尘埃粒子
等级0.5um尘埃粒子数（m3）5um尘埃粒子数（m3）
100级350～3500 0
1000级3500～35000 300
10000级35000～350000 300～3000
100000级350000～3500000 300～30000
——医院洁净手术部建筑技术规范GB 50333—2002
等级
菌落数表面最大染菌密度
（个/m3）
手术区周边区
I 0.2个/30min·90皿(5个/m3) 0.4个/30min· 90皿(10个
/m3)
5
II 0.75个/30min·90皿(25个
/m3)
1.5个/30min· 90皿(10个
/m3)
5
III 2个/30min· 90皿(75个/m3) 4个/30min· 90皿(150个
/m3)
5
Ⅳ5个/30min·90皿(175个/m3) 5
——医院洁净手术部建筑技术规范GB 50333—2002 菌落数
等级空气洁净度级别(级) 新风量
温度相对湿度照度压差手术区周边区
I 100 1000 1000m³/h
22～
25℃40%～60%
≥350
lx
5~8Pa
II 1000 10000 ≧800m³/h
III 10000 100000 ≧800m³/h35%～60%
Ⅳ300000 ≧600m³/h
——医院洁净手术部建筑技术规范GB 50333—2002 洁净度、新风量、温湿度及压差
场所——评审要点
•面积适宜
•考虑当前及未来几年周期数的增长
•设计合理
•洗精室毗邻培养室及取精室；遵循最短路径原则•维持培养室正压
二、仪器/设备
•CFDA、FDA以及EMEA（欧盟药品评审局）认证•计量监督局校验
专用或标准设备•自建工作站
设备数量与周期数匹配
名称台/套建议超净工作台 3 4 解剖显微镜 2 生物显微镜 1 倒置显微镜（含热台） 1 2 显微操作系统 2 精液分析设备 1 二氧化碳培养箱≥3 4 二氧化碳浓度测定仪 1 恒温平台及试管架 1 冰箱 1 离心机 1 液氮罐
不同用途的显微镜
显微操作系统
•霍夫曼显微镜：可以得到类似3D的高对比度、无光晕图像，可以应用于培养在塑料培养皿中的透明样本。

•DIC显微镜：DIC显微镜使细胞的结构，特别是一些较大的细胞器，如核、线粒体等，立体感特别强，适合于显微操作。

仪器/设备——评审要点
•仪器/设备
•满足开展IVF的需要
•有认证资质
三、人员
1.资质
2.理论知识
3.操作技术
4.考核
5.人员编制
1.资质
•医学、生物学专业学士及以上学位
•卫计委批准辅助生殖医疗培训基地接受培训
•国外、境外技术人员：相关资质、所在地卫计委注册备案
2.理论知识
•细胞生物、学发育生物、学遗传学相关知识
•人类配子生成及受精机制
•人类胚胎发育及评估
•低温生物学相关知识
•医学及辅助生殖相关伦理原则
•精液分析•常规体外受精
鼠胚实验
•卵母细胞单精子胞浆内显微注射
鼠胚实验
•颗粒细胞拆除及受精判断鼠胚实验•胚胎质量评估
•配子/胚胎冷冻及复苏鼠胚实验
•胚胎移植
3.操作技术
4.考核
•理论考核
•技术考核
理论考核：
•精子是如何发生的？卵子是如何发生的？
•精子和卵母细胞在胚胎形成和早期发育中各发挥了什么作用？
•简述受精过程
•简述OCCC分期及卵母细胞成熟度分级。

•简述睾丸精子的处理方法。

•少、弱精子症的诊断标准是什么？
•体外受精与自然受精的区别有哪些?
•胚胎形态学评估的重要参数有哪些？
•判断评估复苏胚胎冷冻损伤的方法。

技术考核：
•设备调试与使用•精液的分析与处理•配子/胚胎冷冻复苏• ICSI操作
操作针的安装调试
精子制动
破膜/注射•熟练性•规范性
DIC显微镜调试
●用10×物镜，确定物镜调焦位置；
●起偏器（polarizer）摆入照明光路中；
●聚光镜转盘转到空白位置上；
●物镜后方或物镜转换器上插入DIC棱镜（U-DICT）；
●把检偏器（analyser）插入光路中；
●将目镜取下直接观察，调节U-DICT和PO直至黑色干涉条纹最黑并处于中央；
●将聚光镜中DIC棱镜（DP10）移进光路，并将目镜安装上；
●每次使用物镜的同时将聚光镜中的相对应DIC棱镜移进光路；
技术人员应熟悉常用设备的简单设置与调节
5. 人员编制：
•实验室专业技术人员不得少于3人
实验室负责人要求
•医学或生物学专业
•高级职称
•知识背景
细胞生物学、胚胎学、遗传学等相关理论和细胞培养等
负责人考核
•实验室管理
实验室技术人员质量管理、设备质量管理等
•质量控制
如妊娠率低、受精率低、异常受精率高等的实验室原因分析
人员——评审要点
•资质
•考核
•专业理论
•技术操作：显微操作针安装、精子制动、冷冻/解冻•人员编制
•实验室负责人也需相应考核
四、管理
1.规章制度
2.实验室操作手册
3.仪器/设备管理
4.试剂耗材管理
1. 规章制度
•生殖医学伦理委员会工作制度
•工作人员分工责任制度
•工作人员工作制度
•实验室负责人管理责任制
•实验室质控管理员责任制
•接触配子、胚胎的实验材料质控制度•……
生殖医学伦理制度
•有利于患者原则
实验室操作最有利于患者，如D3废弃胚胎培养至D5，若发育至可移植囊胚，则行囊胚冷冻，充分利用患者卵子
•知情同意原则
更改授精方式、补救ICSI操作、解冻胚胎数目等需患者知情
•保护后代原则
不得开展卵胞浆移植、核移植等技术
•社会公益原则
不得实施非医学指征的性别选择
•保密原则
•严防商业化原则
禁止商业化买卖卵子和精子
常见问题
•伦理委员会工作制度简单，可操作性不强
•冷冻胚胎销毁处理虽然经过病人的同意，但采用的是电话告知的方式，无销毁记录和签字
接触配子、胚胎实验材质质控制度
•小鼠胚胎生物检测（MEA ） 72小时培养后，2细胞胚胎囊胚率 75%～80%
•人精子存活试验（HSSA ）（参考）
潜在生物毒性的判断：在三次有效试验中,
若试验组2份样品的SMI≥0.7，且相对SMI≥0.9，被认为不存在潜在的生物毒性；
若试验组2份样品的SMI＜0.7或相对SMI＜0.9，则被认为存在潜在的生物毒性。

2. 实验室技术操作手册
•选卵
•精液接收及处理
•IVF/ICSI授精
•卵母细胞/胚胎冷冻解冻•胚胎移植
•……•培养液准备
•显微操作仪使用•培养箱使用及监测•程序化冷冻仪操作•激光破膜仪的使用•……
培养液的准备
维持培养液渗透压：微滴与盖油同时进行
•实验室内温度、湿度以及IVF工作站的风机会导致培养液的挥发，影响其PH值和渗透压
常见问题
•操作手册关键参数以及操作流程表述不清，如体外受精操作规范中未提及重要参数“加精时间”以什么为参考，什么时间加精等
3. 仪器/设备管理
•实验室内热台、热板等定期检测温度
•培养箱定期检测二氧化碳浓度、氧气浓度以及温湿度等•电子天平以及各种测量仪器的定期校准
4. 试剂耗材管理
•试剂耗材总量控制
•试剂接收质量控制
接受试剂时检测温度是否在储存范围内
•试剂耗材质控
在启用新批号的试剂耗材前，都要进行相应的质控实验，合格后方可使用
1
2
3
4
5
6
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8
9
123456
789101112温度
月份
试剂（到货）温度
温度试剂到货温度
管理——评审要点
•各种规章制度管理文件、表格•伦理
•分工明确、责任到人
•操作手册
•技术的规范性
•仪器/设备的检测、校验
•试剂/耗材
•质控实验
五、质量标准
1.IVF/ICSI受精率
2. IVF/ICSI卵裂率
3.IVF/ICSI 3PN率
4.临床妊娠率。