最新微生物检验-第五章-G球菌PPT课件

肺 致病物质：荚膜、溶血素、神经氨酸酶 炎
链
球
所致疾病：大叶性肺炎、支气管炎、中耳炎、乳突炎、 鼻窦炎、脑膜炎和菌血症。
菌
猩红热 (scarlet fever) 由产生致热外毒素的化脓性链球菌所致。细菌
经咽喉粘膜侵入机体，增殖并产生毒素引起高热、全 身红疹等症状，病后获得较强的免疫力。
无乳链球菌引起新生儿菌血症和脑膜炎 米勒链球菌在手术和创伤时引起内源性感染 草绿色链球菌可引起心脏瓣膜异常患者的亚急性 细菌性心内膜炎
• 观察菌落性状：溶血现象及菌落大小。 • 革兰染色为革兰阳性球菌，链状或短链状
排列，触酶试验阴性，6.5%NaCl不生长者 可确定为链球菌属细菌。
β-溶血链球菌鉴定
(1)Lancefield群特异性抗原鉴定：B群为无乳 链球菌，F群为米勒链球菌。 (2)PYR试验：化脓性链球菌阳性 (3)杆菌肽敏感试验：化脓性链球菌阳性。 (4)VP 试 验 ： 挑 取 平 板 上 孵 育 过 夜 菌 落 置 于 2ml VP肉汤中，孵育6h后加入VP试剂，摇匀 30秒，出现桃红色者为阳性。 （5）CAMP试验
三、微生物学特性
1.形态染色
链球菌是直径小于2μm的球形或卵圆形革兰 阳性球菌，呈链状排列，链的长短和细菌的种 类及生长环境有关。
肺炎链球菌呈矛尖状，宽端相对尖端向 外，成双排列，无芽胞、无动力，但能 形成荚膜和粘液层。
2．培养特性
• 兼性厌氧菌 • 营养要求高 • 血平板α、β、γ三种特征性溶血现象 • 肺炎链球菌
• 表皮葡百度文库球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄 球菌含微弱耐热核酸酶。
4．磷酸酶试验
• 大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球 菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌和猪 葡萄球菌为阳性。
• 将待测菌种点种在加有硝基酚磷酸盐的 pH5.6~6.8 MH琼脂上，孵育18~24h， 菌落周围出现黄色为阳性。
耐甲氧西林葡萄球菌
血液标本则用肉汤增菌培养基
1.菌落与菌体形态
金黄色葡萄球菌 直径6~8mn，金黄色或橙色，菌落周围出现或不出现透明溶血环
表皮葡萄球菌 直径为5~6mm，某些产粘液菌株能粘附在琼脂平板表面，无色或白 色
溶血葡萄球菌 直径5~9mm，不透明，无色素或奶油色、黄色
里昂葡萄球菌 直径4~7mm，边缘整齐稍扁，奶色、黄色和沃氏葡萄球菌相似
（二）标本采集
• 咽拭子、痰液、脓汁和血液等标本采集后在2h内 运送到实验室，立即进行检查和接种。
• 对B群溶血链球菌的检查，用无菌棉签采集第35 周~37周妊娠妇女的阴道分泌物，置于含多粘菌 素(10μg/ml)和萘啶酸(15μg/ml)选择性培养肉汤中 孵育18~24h，再作分离培养。
（三）标本直接检查
3、腐生葡萄球菌：女性尿路感染的重要病原菌。
四、微生物检验
（一）标本采集
• 根据感染的部位，采集不同的标本。 • 该属细菌广泛分布在人体皮肤和黏膜，采取时避免病
灶周围正常菌群污染。
（二）检验程序
（三）标本直接检查
• 无菌体液如脑脊液和穿刺液可直接涂片、革兰染色 后直接显微镜检查，查见细菌具有重要临床价值。
• 其他体液标本如同时伴有炎性细胞时则直接显微镜 检查结果也具有参考价值。
• 涂片检查发现有形态相似的革兰阳性球菌，则可初 步报告“查见类似葡萄球菌属革兰阳性球菌”，并 进一步进行分离和鉴定予以证实。
（四）分离培养与鉴定
脓液、分泌物等接种于血琼脂平板
有污染的标本如粪便等应接种在选择平板上，如甘露醇 高盐平板、哥伦比亚多粘菌素奈啶酸平板
腐生葡萄球菌 直径5~8mm，白色或柠檬色
注意：菌落外观疑为葡萄球菌者应进行革兰染色证实，甘露醇高盐平板 上金黄色葡萄球菌菌落为黄色。
2．凝固酶试验
玻片法-测定结合型凝固酶 试管法-测定分泌型凝固酶
金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌呈 现阳性反应
3．耐热核酸酶试验
• 大多数金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、 中间葡萄球菌、猪葡萄球菌能产生耐热 核酸酶。
微生物检验-第五章-G球菌
金黄色葡萄球菌所致疾病
感染类型
所致疾病
侵袭性 局部感染：疖、痈、毛囊炎、 伤口化脓、内脏器官感染
全身感染：败血症、脓毒血症 毒素性 假膜性肠炎、食物中毒
凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS）所致疾病
1、CoNS是人体皮肤黏膜正常菌群之一，是医院感 染的主要病原菌。
2、表皮葡萄球菌：人工瓣膜性心内膜炎、静脉导管 感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人 工关节感染等。
定义： 凡对甲氧西林、苯唑西林、头孢
西丁耐药，或PBP2a阳性、mecA基因 阳性的葡萄球菌定义为耐甲氧西林葡 萄球菌（MRS）。
*耐甲氧西林葡萄球菌（MRSA、MRSE）的含义：
1. 对所有β-内酰胺类(青霉素类，头孢菌素类，碳 青霉烯类)抗生素耐药。
2. 对绝大多数的大环内酯类、氨基糖苷类、氟喹 诺酮类、四环素类、磺胺类也耐药。
3. 万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺敏感。
第二节 链球菌属
（Streptococcus）
一、分类
溶血现象
甲型（α）溶血性链球菌 乙型（β）溶血性链球菌
传统分类
丙型（γ）链球菌
Lancefield抗原血清分型
血清群与溶血特性没有相关性
种系分类法
遗传学和血清学分型不能统一
α溶血性链球菌 β溶血性链球菌
– 荚膜多糖使菌落呈粘液状 – 产生自溶酶，培养48h后出现“脐
窝状”菌落。
3．生化特性和抗原构造
• 发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳酸为代谢终末 产物，触酶阴性
荚膜 蛋白质
肽聚糖 细胞膜 细胞质
M抗原
多糖 分20个群
4.抵抗力
大多数细菌对干燥和消毒剂敏感；较少引 起细菌耐药性。
近年对青霉素耐药甚至多重耐药的肺炎链 球菌的出现并在全球播散，引起高度关注。
• 直接显微镜检查 – 标本涂片、革兰染色、显微镜检查见链状排 列革兰阳性球菌有助于无正常菌群污染标本 的诊断 – 荚膜肿胀试验用于检查肺炎链球菌
• 直接检测抗原 – 咽拭标本的A群链球菌和女性生殖道标本的B 群链球菌可用抗原检测
荚膜肿胀试验
（四）分离培养与鉴定
• 用羊血琼脂平板培养初代分离需用5%CO2 环境，35~37℃孵育24h。
肺炎链球菌
草绿色链球菌 化脓、马、似马链球菌
A、C、G群 米勒链球菌
B群：无乳链球菌
不溶血D群链球菌：牛链球菌
二、临床意义
毒素：链球菌溶素O和S、红疹毒素
化 脓
致病物质 M蛋白 脂磷壁酸
性
链
酶：链激酶、链道酶、透明质酸酶
球 菌 所致疾病
化脓性感染 中毒性疾病：猩红热
超敏反应性疾病：急性肾小球肾炎、风湿热