延胡索中生物碱类成分的质量控制
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2. 2 供试品溶液的制备 精密称取延胡索药材粉 末（ 过 3 号筛） 约 1. 0 g，置 50 mL 具塞锥形瓶中，精 密加入浓氨试液-甲醇（ 1 ∶ 20） 混合液 20 mL，称定， 置水浴锅中加热回流 1 h，取出，放冷，加浓氨试液甲醇（ 1∶ 20） 混合液补足减失的质量，摇匀，滤过，取 续滤液，即得。 2. 3 对照品溶液的制备 精密称取原阿片碱、盐酸 黄连碱、海罂粟碱、四氢非洲防己胺、盐酸巴马汀、盐 酸小檗碱、脱氢紫堇碱、延胡索乙素、延胡索甲素、四 氢黄连碱、脱 氢 海 罂 粟 碱 对 照 品 适 量，置 棕 色 量 瓶 中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得质量浓度分 别 为 0. 238，0. 510，0. 238，0. 580，0. 293，0. 101， 1. 865，0. 273，0. 248，0. 212，0. 204 g·L － 1 的混合对 照品储备液。分别精密吸取该储备液 20，50，100， 150，200，250 μL 置 1 mL 量瓶中，加甲醇稀释并定 容至刻度，摇匀，得系列对照品溶液。 2. 4 线性关系考察 精密吸取 2. 3 项下系列混合 对照品溶液适量，按 2. 1 项下色谱条件测定，以峰面 积为纵坐标，进样量为横坐标，用最小二乘法进行线 性回归，得各成分的回归方程及线性范围，见表 1。 2. 5 定量限考察 将 2. 3 项下混合对照品溶液逐 级稀释，按 2. 1 项下色谱条件测定，计算信噪比（ S / N） ，将 S / N = 10 的对照品溶液中各成分的量确定为 定量限，结果见表 1。 2. 6 精密度试验 取同一份延胡索（ 14 号） 供试品
Vol． 22，No． 6 Mar． ，2016
延胡索具有活血、行气、止痛作用，用于治疗胸 胁、脘腹疼痛，胸痹心痛，经闭痛经，产后瘀阻，跌扑 肿痛［1］。其道地产区为浙江，与白术、芍药、贝母等 并称为“浙八味”。但是，受工业发展和其他经济作 物冲击，浙江磐安等主产区的种植面积逐渐萎缩，现 在国内基本形成浙江磐安和陕西城固为中心的两大 生产区。随着延胡索种植区域的变化和扩大，以及 其产量的不断增加，市场对延胡索药材的质量控制 提出了更高要求。
（ 1. Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China； 2. State Key Laboratory Breeding Base of Dao-di Herbs， National Engineering Laboratory for Quality Control Technology of Chinese Herbal Medicines，Institute of Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China； 3. Hunan University of
Chinese Medicine，Changsha 410208，China）
［Abstract］ Objective： An efficient method using ＲP-HPLC was developed for simultaneous determination of eleven major active alkaloids in Corydalis Ｒhizoma． Method： Chromatographic separation was achieved on a Kromasil Eternity C18 column （ 4. 6 mm × 250 mm，5 μm ） with a gradient mobile phase of acetonitrile-0. 1 mol·L － 1 ammonium acetate solution （ added 0. 5 mL of glacial acetic acid per 1 L） at a flow rate of 1. 0 mL · min － 1 ，detection wavelength was set at 280 nm and column temperature was at 25 ℃ ． Ｒesult： Eleven major alkaloids showed a good linearity with r ＞ 0. 999 and good precision （ ＲSD of 0. 1% -2. 0% ） ， stability （ ＲSD of 0. 2% -2. 1% ） ，repeatability （ ＲSD of 1. 7% -4. 1% ） ； average recovery was 98. 2% -100. 8% with ＲSD of 1. 6% -3. 5% ． Conclusion： This established method is sensitive， convenient and reliable for determining eleven major components in Corydalis Ｒhizoma．
［Key words］ Corydalis Ｒhizoma； alkaloids； protopine； tetrahydrocolumbamine； dehydrocorydaline； tetrahydrocoptisine； glaucine
［收稿日期］ 20151223（ 005） ［基金项目］ 国家中医药行业科研专项（ 201407003） ； 北京市自然科学基金项目（ 7132152） ［第一作者］ 杨敏，在读硕士，从事药物分析学研究，Tel： 13691537484，E-mail： yangmin7836@ 163. com ［通讯作者］ * 陈安家，博士，教授，从事药物分析学研究，Tel： 15835108120，E-mail： chenanjia888@ 163. com；
延胡索中主要活性成分为生物碱类，按结构类 型可以分为叔胺和季胺型生物碱 2 类，至今已从中 分离鉴定了 46 种生物碱类化合物［2-3］。2015 年版 《中国药典 》中 仅 规 定 了 延 胡 索 乙 素 含 量 不 得 低 于 0. 05% 。有报道采用 ＲP-HPLC，HPLC-MS 等技术对 延胡索中 多 个 生 物 碱 类 成 分 进 行 同 步 测 定［4-7］，但 这些研究有的只关注了延胡索中的季胺型生物碱而 忽略了其中的叔胺型生物碱成分［3］； 有的虽然同时 关注了延胡索中的这两大类成分，但流动相梯度变 化过细，实验重复性较差。本实验采用 ＲP-HPLC 同 步测定延胡索中 11 个主要生物碱类（ 7 个叔胺类和 4 个季胺类） 成分的含量，为延胡索药材质量控制水 平的提升提供方法依据。 1 材料
Simultaneous Determination of Eleven Major Alkaloids in Corydalis Ｒhizoma by ＲP-HPLC
YANG Min1，2 ，LI Chun2 ，FENG Wei-hong2 ，ZHANG Yong-xin2 ， LIN Li-mei3 ，CHEN An-jia1* ，YANG Li-xin2*
LC-20A 型高效液相色谱仪（ LC-20AT 型溶液传 输单元，SIL-20A 型自动进样器，SPD-M20A 型二极 管阵列检测器，Labsolutions 色谱工作站，日本岛津 公司） ，XS105 型 1 /10 万电子天平（ 瑞士梅特勒-托 利多公司） 。原阿片碱、盐酸黄连碱、四氢非洲防己 胺、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、脱氢紫堇碱、延胡索乙 素、延胡索甲素、四氢黄连碱、脱氢海罂粟碱对照品 （ 成都瑞 芬 思 生 物 科 技 有 限 公 司，批 号 分 别 为 Y050-131227，Y-024-131109，S-118-130815，H-015130803，0713-9906，T-033-131010，y-005-131216，Y158-130706，s-113-130926，T-040-131010） ，海罂粟碱 对照品（ 自制，经 HPLC 面积归一化法测定，纯度 ＞ 98% ） 。甲醇、乙腈为色谱纯，水为屈臣氏纯净水， 其他试剂均为分析纯。14 批延胡索药材购自不同 药材市场或产地，经中国中医科学院中药资源中心 金艳助理研究员鉴定为延 胡 索 Corydalis yanhusuo 的干燥块茎。 2 方法与结果 2. 1 色 谱 条 件 Kromasil Eternity C18 色 谱 柱 （ 4. 6 mm × 250 mm，5 μm） ，流动相乙腈（ A） -0. 1 mol·L －1 乙酸铵溶液（ 每 1 L 溶液中加冰乙酸 0. 5 mL） （ B） 梯
［关键词］ 延胡索； 生物碱； 原阿片碱； 四氢非洲防己胺； 脱氢紫堇碱； 四氢黄连碱； 海罂粟碱 ［中图分类号］ Ｒ284. 1； Ｒ284. 2 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903（ 2016） 06-0022-04
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2016060022
* 杨立新，副研究员，从事中药分析研究，Tel： 010-64021008，E-mail： ayblcx@ 126. com
·22·
第 22 卷第 6 期 2016 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
（ 1. 山西医科大学，太原 030001； 2. 中国中医科学院 中药研究所，中药质量控制技术国家 工程实验室，道地药材国家重点实验室培育基地，北京 100700； 3. 湖南中医药大学，长沙 410208）
［摘要］ 目的： 建立 ＲP-HPLC 同步测定延胡索中 11 种生物碱成分的方法，为该药材的质量控制提供参考。方法： Kromasil Eternity C18 色谱柱（ 4. 6 mm × 250 mm，5 μm） ，流动相乙腈（ A） -0. 1 mol·L －1 乙酸铵溶液（ 每 1 L 溶液中加冰乙酸 0. 5 mL） （ B） 梯度洗脱（ 0 ～ 50 min，20% ～ 55% A； 50 ～ 55 min，55% ～ 65% A； 55 ～ 60 min，65% A） ，流速 1. 0 mL·min －1 ，柱温 25 ℃ ， 检测波长 280 nm，进样量 10 μL。结果： 11 种待测成分的线性关系良好，相关系数均 ＞ 0. 999； 精密度试验 ＲSD 0. 1% ～ 2. 0% ， 稳定性试验 ＲSD 0. 2% ～ 2. 1% ，重复性试验 ＲSD 1. 7% ～ 4. 1% ，平均加样回收率 98. 2% ～ 100. 8% （ ＲSD 1. 6% ～ 3. 5% ） ，均 符合中药质量分析要求。结论： 建立的 ＲP-HPLC 灵敏、简便、可靠，可用于延胡索药材中多种生物碱成分的同步测定。
wk.baidu.com
度洗脱（ 0 ～ 50 min，20% ～ 55% A； 50 ～ 55 min，55% ～ 65% A； 55 ～ 60 min，65% A） ，流速 1. 0 mL·min －1 ，柱温 25 ℃ ，检测波长 280 nm，进样量 10 μL。见图 1。
A． 对照品； B． 供试品； 1. 原阿片碱； 2. 盐酸黄连碱； 3. 海罂粟碱； 4. 四氢非洲防己胺； 5. 盐酸巴马汀； 6. 盐酸小檗碱； 7. 脱氢紫堇碱； 8. 延胡索乙素； 9. 延胡索甲素； 10. 四氢黄连碱； 11. 脱氢海罂粟碱 图 1 延胡索 HPLC Fig． 1 HPLC chromatograms of Corydalis Ｒhizoma
第 22 卷第 6 期 2016 年 3 月
·化学与分析·
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 22，No． 6 Mar． ，2016
延胡索中生物碱类成分的质量控制
杨敏1，2 ，李春2 ，冯伟红2 ，张永欣2 ，林丽美3 ，陈安家1* ，杨立新2*
Vol． 22，No． 6 Mar． ，2016
延胡索具有活血、行气、止痛作用，用于治疗胸 胁、脘腹疼痛，胸痹心痛，经闭痛经，产后瘀阻，跌扑 肿痛［1］。其道地产区为浙江，与白术、芍药、贝母等 并称为“浙八味”。但是，受工业发展和其他经济作 物冲击，浙江磐安等主产区的种植面积逐渐萎缩，现 在国内基本形成浙江磐安和陕西城固为中心的两大 生产区。随着延胡索种植区域的变化和扩大，以及 其产量的不断增加，市场对延胡索药材的质量控制 提出了更高要求。
（ 1. Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China； 2. State Key Laboratory Breeding Base of Dao-di Herbs， National Engineering Laboratory for Quality Control Technology of Chinese Herbal Medicines，Institute of Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China； 3. Hunan University of
Chinese Medicine，Changsha 410208，China）
［Abstract］ Objective： An efficient method using ＲP-HPLC was developed for simultaneous determination of eleven major active alkaloids in Corydalis Ｒhizoma． Method： Chromatographic separation was achieved on a Kromasil Eternity C18 column （ 4. 6 mm × 250 mm，5 μm ） with a gradient mobile phase of acetonitrile-0. 1 mol·L － 1 ammonium acetate solution （ added 0. 5 mL of glacial acetic acid per 1 L） at a flow rate of 1. 0 mL · min － 1 ，detection wavelength was set at 280 nm and column temperature was at 25 ℃ ． Ｒesult： Eleven major alkaloids showed a good linearity with r ＞ 0. 999 and good precision （ ＲSD of 0. 1% -2. 0% ） ， stability （ ＲSD of 0. 2% -2. 1% ） ，repeatability （ ＲSD of 1. 7% -4. 1% ） ； average recovery was 98. 2% -100. 8% with ＲSD of 1. 6% -3. 5% ． Conclusion： This established method is sensitive， convenient and reliable for determining eleven major components in Corydalis Ｒhizoma．
［Key words］ Corydalis Ｒhizoma； alkaloids； protopine； tetrahydrocolumbamine； dehydrocorydaline； tetrahydrocoptisine； glaucine
［收稿日期］ 20151223（ 005） ［基金项目］ 国家中医药行业科研专项（ 201407003） ； 北京市自然科学基金项目（ 7132152） ［第一作者］ 杨敏，在读硕士，从事药物分析学研究，Tel： 13691537484，E-mail： yangmin7836@ 163. com ［通讯作者］ * 陈安家，博士，教授，从事药物分析学研究，Tel： 15835108120，E-mail： chenanjia888@ 163. com；
延胡索中主要活性成分为生物碱类，按结构类 型可以分为叔胺和季胺型生物碱 2 类，至今已从中 分离鉴定了 46 种生物碱类化合物［2-3］。2015 年版 《中国药典 》中 仅 规 定 了 延 胡 索 乙 素 含 量 不 得 低 于 0. 05% 。有报道采用 ＲP-HPLC，HPLC-MS 等技术对 延胡索中 多 个 生 物 碱 类 成 分 进 行 同 步 测 定［4-7］，但 这些研究有的只关注了延胡索中的季胺型生物碱而 忽略了其中的叔胺型生物碱成分［3］； 有的虽然同时 关注了延胡索中的这两大类成分，但流动相梯度变 化过细，实验重复性较差。本实验采用 ＲP-HPLC 同 步测定延胡索中 11 个主要生物碱类（ 7 个叔胺类和 4 个季胺类） 成分的含量，为延胡索药材质量控制水 平的提升提供方法依据。 1 材料
Simultaneous Determination of Eleven Major Alkaloids in Corydalis Ｒhizoma by ＲP-HPLC
YANG Min1，2 ，LI Chun2 ，FENG Wei-hong2 ，ZHANG Yong-xin2 ， LIN Li-mei3 ，CHEN An-jia1* ，YANG Li-xin2*
LC-20A 型高效液相色谱仪（ LC-20AT 型溶液传 输单元，SIL-20A 型自动进样器，SPD-M20A 型二极 管阵列检测器，Labsolutions 色谱工作站，日本岛津 公司） ，XS105 型 1 /10 万电子天平（ 瑞士梅特勒-托 利多公司） 。原阿片碱、盐酸黄连碱、四氢非洲防己 胺、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、脱氢紫堇碱、延胡索乙 素、延胡索甲素、四氢黄连碱、脱氢海罂粟碱对照品 （ 成都瑞 芬 思 生 物 科 技 有 限 公 司，批 号 分 别 为 Y050-131227，Y-024-131109，S-118-130815，H-015130803，0713-9906，T-033-131010，y-005-131216，Y158-130706，s-113-130926，T-040-131010） ，海罂粟碱 对照品（ 自制，经 HPLC 面积归一化法测定，纯度 ＞ 98% ） 。甲醇、乙腈为色谱纯，水为屈臣氏纯净水， 其他试剂均为分析纯。14 批延胡索药材购自不同 药材市场或产地，经中国中医科学院中药资源中心 金艳助理研究员鉴定为延 胡 索 Corydalis yanhusuo 的干燥块茎。 2 方法与结果 2. 1 色 谱 条 件 Kromasil Eternity C18 色 谱 柱 （ 4. 6 mm × 250 mm，5 μm） ，流动相乙腈（ A） -0. 1 mol·L －1 乙酸铵溶液（ 每 1 L 溶液中加冰乙酸 0. 5 mL） （ B） 梯
［关键词］ 延胡索； 生物碱； 原阿片碱； 四氢非洲防己胺； 脱氢紫堇碱； 四氢黄连碱； 海罂粟碱 ［中图分类号］ Ｒ284. 1； Ｒ284. 2 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903（ 2016） 06-0022-04
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2016060022
* 杨立新，副研究员，从事中药分析研究，Tel： 010-64021008，E-mail： ayblcx@ 126. com
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第 22 卷第 6 期 2016 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
（ 1. 山西医科大学，太原 030001； 2. 中国中医科学院 中药研究所，中药质量控制技术国家 工程实验室，道地药材国家重点实验室培育基地，北京 100700； 3. 湖南中医药大学，长沙 410208）
［摘要］ 目的： 建立 ＲP-HPLC 同步测定延胡索中 11 种生物碱成分的方法，为该药材的质量控制提供参考。方法： Kromasil Eternity C18 色谱柱（ 4. 6 mm × 250 mm，5 μm） ，流动相乙腈（ A） -0. 1 mol·L －1 乙酸铵溶液（ 每 1 L 溶液中加冰乙酸 0. 5 mL） （ B） 梯度洗脱（ 0 ～ 50 min，20% ～ 55% A； 50 ～ 55 min，55% ～ 65% A； 55 ～ 60 min，65% A） ，流速 1. 0 mL·min －1 ，柱温 25 ℃ ， 检测波长 280 nm，进样量 10 μL。结果： 11 种待测成分的线性关系良好，相关系数均 ＞ 0. 999； 精密度试验 ＲSD 0. 1% ～ 2. 0% ， 稳定性试验 ＲSD 0. 2% ～ 2. 1% ，重复性试验 ＲSD 1. 7% ～ 4. 1% ，平均加样回收率 98. 2% ～ 100. 8% （ ＲSD 1. 6% ～ 3. 5% ） ，均 符合中药质量分析要求。结论： 建立的 ＲP-HPLC 灵敏、简便、可靠，可用于延胡索药材中多种生物碱成分的同步测定。
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度洗脱（ 0 ～ 50 min，20% ～ 55% A； 50 ～ 55 min，55% ～ 65% A； 55 ～ 60 min，65% A） ，流速 1. 0 mL·min －1 ，柱温 25 ℃ ，检测波长 280 nm，进样量 10 μL。见图 1。
A． 对照品； B． 供试品； 1. 原阿片碱； 2. 盐酸黄连碱； 3. 海罂粟碱； 4. 四氢非洲防己胺； 5. 盐酸巴马汀； 6. 盐酸小檗碱； 7. 脱氢紫堇碱； 8. 延胡索乙素； 9. 延胡索甲素； 10. 四氢黄连碱； 11. 脱氢海罂粟碱 图 1 延胡索 HPLC Fig． 1 HPLC chromatograms of Corydalis Ｒhizoma
第 22 卷第 6 期 2016 年 3 月
·化学与分析·
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 22，No． 6 Mar． ，2016
延胡索中生物碱类成分的质量控制
杨敏1，2 ，李春2 ，冯伟红2 ，张永欣2 ，林丽美3 ，陈安家1* ，杨立新2*