消化系统疾病动物模型

2013-7-10
任立群
19
慢性胃炎模型
结
果
生理性指标
胃黏膜pH值升高，胃黏膜血流量及胃黏膜电位差下降。 组织病理学检查 胃黏膜变薄，胃固有腺体减少，粘膜肌层增厚。 药物疗效观察 阳性对照药可用维酶素，0.5mg/kg体重，或三九胃泰， 2~4g/kg体重，灌胃给予。
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实验结束后，取胃，甲醛固定3d后，自 胃体前、后壁及小弯部取材，常规石蜡切 片，HE染色及PAS染色。同时测定下列指标：
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任立群
34
检测指标
1 2 3 4
胃腺管长度 胃黏膜PAS染色阳性层厚度测量 壁细胞计数
慢性胃炎模型
pH值测定
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任立群
35
检测指标
1 2 3 4
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急性胃溃疡动物模型
常用的方法
① ② ③ ④ 应激法 幽门结扎法 药物法 醋酸法
乙醇 组胺 促胃液素 肾上腺类固醇 水杨酸盐 血清素 利血平 保泰松
……
在抗溃疡药物药效学试验中，应激法、幽门结 扎法和醋酸法制备的胃溃疡模型为必做实验，利血 平法和乙醇法可任选其一。
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任立群
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慢性胃炎模型
实验动物
体重200~220g Wistar大鼠。
操作方法 饮以0.02%氨水，同时每隔7d灌胃给予1%氨 水1次，10ml/kg体重，连续90d，或每2d定时 给予0.04%氨水1ml/100g体重1次，连续2周。
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任立群
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慢性胃炎模型
检测指标
二、同种或自身免疫法慢性胃炎模型
操作方法
用同种或自身的胃液（按4~5ml/kg体重取胃液浓缩 50倍），或取胃粘膜的生理盐水匀浆与弗氏佐剂以1:1 的比例制成乳剂，皮下注射进行免疫。隔15~30d再注射 1次，可诱发胃粘膜炎症细胞浸润和萎缩性病变。
结
果
同“胆汁或牛磺胆酸灌胃法慢性胃炎模型”。
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（2）-（6）可单独或几种合用（2ml左右）灌胃；
急性胃炎动物模型
结
果
4h后处死动物，剖检可见胃内发生急性 弥漫性炎症改变。
病
变
胃黏膜表面有浅表糜烂、出血，粘膜层 内见中性粒细胞浸润。
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急性胃炎动物模型
二、胆汁反流性胃炎模型
造模原理 碱性肠液倒流入胃，刺激胃黏膜可引起炎 症，即胆汁反流性胃炎。常见于原发性或继 发性幽门功能紊乱或胃切除术后。本法取上 部小肠的碱性肠液注入已结扎幽门的同种大 鼠胃内，使之对胃黏膜产生持续刺激，形成 胃炎。
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任立群
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慢性胃炎模型
操作方法

饮用水:以0.2%去氧胆酸钠作为饮用水，连续 90d。 主动免疫:第1周和第5周，皮下注射佐剂抗原 （同上）0.3ml。 热糊灌胃:每隔1d灌胃给予55℃热糊10ml/kg体 重，连续90d。


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任立群
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慢性胃炎模型
检测指标

胃腺管长度 胃黏膜PAS染色阳性层厚度测量 壁细胞计数
慢性胃炎模型
pH值测定
乌拉坦腹腔注射麻醉下开腹，在腺 胃部开一个小口，将pH计玻璃电极 插入胃内测量胃体部及幽门部胃黏 膜表面pH值。
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任立群
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慢性胃炎模型
结
果
胃体部胃黏膜腺体总长度、腺管腺部长度、 表面上皮厚度均明显减少；
胃黏膜PAS染色阳性层显著变薄；
慢性胃炎模型
结
果
胃腺管全长（从黏膜表面到腺体底部的距离）、 腺管圆柱部（从黏膜表面到刀豆蛋白A异染阳性部位 的上缘）及颈黏液细胞（又称副细胞、刀豆蛋白异 染阳性部位的长度）均明显增长，固有腺变小， 这些改变以胃底部为显著，其程度与所用胆汁 的量呈量效关系。
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任立群
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慢性胃炎模型
2013-7-10 任立群
慢性胃炎模型
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慢性胃炎模型
实验动物
体重180~220g Wistar大鼠。
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任立群
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慢性胃炎模型
造模4种因素
1 2
3 4
A因素
0.5%去氧胆酸钠加热至55℃，每日 8时灌胃 60%酒精每周二、五8时空腹灌胃2ml
B因素
症状
C因素
0.1%氨水作为饮料自由饮用
束缚
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应激性胃溃疡模型
实验动物
体重160~180g Wistar大鼠，雌雄不限。 多用雌性。
器 材
大鼠固定钢板或束缚笼；恒温水浴装臵。
胃酸、胃蛋白酶测定
组织病理学检查 炎症分级 0级：无炎症 1级：在粘膜表层或底部有少量散在的白细胞
2级：在粘膜各部分均有较多的炎细胞
3级：粘膜内有聚集成堆的白细胞
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慢性胃炎模型
结
果
粘膜病变以胃窦部及胃体部明显，表现
为粘膜变薄，粘膜肌层增厚，炎细胞浸润及
胃泌酸功能下降。
胃黏膜壁细胞数明显减少；
胃黏膜表面pH值明显升高。
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任立群
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慢性胃炎模型
注意事项

大鼠以成年雄性大鼠为佳，幼龄大鼠胃黏膜 修复能力强，造模后其胃黏膜萎缩的程度较 成年鼠轻。 本法胃黏膜萎缩的程度较综合法轻，可加大 氨水浓度和延长造模时间以加重病变。 氨水具有挥发性，应隔日配制以保证其浓度。 表面上皮细胞及其下的腺上皮能分泌中性糖 蛋白，PAS反应阳性，颈粘液细胞亦呈阳性 反应。
慢性胃炎模型
注意事项

每日灌胃2次，时间长，要求灌胃操作技术熟 练，避免不必要的损失。 注意饲养、卫生环境。

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任立群
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综合法二
造模机制
慢性胃炎模型
应用去氧胆酸钠、热糊灌胃和免疫损伤的 方法造成胃黏膜损伤，以致胃黏膜营养代谢障 碍，最后形成慢性萎缩性胃炎。 实验动物
体重180~220g 雄性Wistar大鼠。
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急性胃炎动物模型
实验动物
体重180~220g左右雄性Wistar大鼠。
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任立群
7
急性胃炎动物模型
操作方法
1. 制备上部小肠液；
2. 大鼠禁食不禁水24h，灌胃给予受试药3h后，开腹结 扎幽门，向胃内注入小肠液，2 ml/只（正常对照组注 入2 ml生理盐水）。缝合腹壁，腹腔注射阿托品5 mg/kg体重，以抑制胃液分泌，利于胃黏膜损伤模型 的形成； 3. 4h后腹腔注射戊巴比妥钠处死大鼠，开腹，结扎贲门， 取出胃，沿胃大弯剪开。用滤纸吸干表面水分，立即 称量胃重，以胃湿重/体重之比（胃系数）表示胃水肿 程度。 4. 肉眼观察并计数整个胃黏膜出血点数，作为损伤指数。
任立群 38


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第 三 节 急性胃溃疡动物模型
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任立群
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溃疡病的病因

致溃疡因素:胃酸、胃蛋白酶、非甾体抗炎药 不合理应用、幽门螺杆菌感染等。
防御因素：粘液-碳酸氢盐屏障、粘膜屏障、 粘膜血流量、胃上皮细胞的更新、表皮生长因 子和内生性前列腺素等。


溃疡的形成主要由于防御因素和致溃疡因素的 平衡失调所致。

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慢性胃炎模型
造模方法




综合法一 胆汁（去氧胆酸钠）+热水+主动免疫 综合法二 去氧胆酸钠+热糊+主动免疫 综合法三 去氧胆酸钠+酒精+氨水+吲哚美锌 氨水单因素法
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慢性胃炎模型
综合法一
造模机制
采用胆汁或其主要成分去氧胆酸钠、热水、免疫损伤等 复合刺激因素对胃黏膜进行较长时间的刺激，造成胃黏膜慢 性损伤，胃黏膜营养代谢障碍，以致胃黏膜萎缩变薄，腺体 减少，炎症细胞浸润和结缔组织增生而形成慢性萎缩性胃炎。
D因素
1%羧甲基纤维素钠配制的0.5mg/kg 吲哚美辛混悬液每日8：30灌胃2ml
慢性胃炎模型
操作方法

对大鼠施加上述四种因素。


12周后，处死动物。
过碘酸-希夫（wk.baidu.comAS）染色 注意事项

氨水要新鲜配制。
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氨水单因素法
造模机制
慢性胃炎模型
氨水是一种胃黏膜屏障破坏剂，大鼠 长时间饮用低浓度氨水，对胃黏膜造成慢 性损伤，从而破坏胃黏膜屏障及胃黏膜防 御功能，使胃黏膜营养代谢障碍，导致胃 粘膜萎缩。
任立群
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慢性萎缩性胃炎模型
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任立群
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三、大鼠慢性萎缩性胃炎模型

病因:酗酒、用药不当、饮食习惯不良、幽 门螺杆菌感染、自身免疫。
造模评价：组织病理学是评价造模成功的 最主要指标，主要观察和测量胃黏膜厚度、 粘膜肌层厚度、腺体数量、壁细胞数量、 固有层炎细胞浸润程度和肠化生发生率等。
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任立群
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各因素之作用 去氧胆酸钠 模拟胃反流情况，胆酸可破坏胃黏膜细胞 的脂蛋白层，引起粘膜炎症。 高浓度酒精 直接破坏胃黏膜屏障引起炎症。 低浓度氨水 慢性刺激胃黏膜，从而破坏胃黏膜屏障及 胃黏膜防御功能。 吲哚美辛 抑制胃黏膜前列腺素合成酶，使胃黏膜内 前列腺素合成减少，减弱细胞保护作用。
乙醇 组胺 促胃液素 肾上腺类固醇 水杨酸盐 血清素 利血平 保泰松
……
阳性对照药：
H2受体拮抗药——西咪替丁，雷尼替丁，法莫替丁等 加强胃黏膜防御功能——甘珀酸，果胶铋，硫糖铝
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研究抗胃溃疡药物
胃黏膜形态观察 胃分泌试验 胃黏膜血流量测量 胃粘液测定 抗炎镇痛试验 抑制幽门螺杆菌试验等
急性胃溃疡动物模型
常用的方法
① ② ③ ④ 应激法 幽门结扎法 药物法 醋酸法
乙醇 组胺 促胃液素 肾上腺类固醇 水杨酸盐 血清素 利血平 保泰松
……
治疗性给药——醋酸法复制的模型 预防性给药——其他模型
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急性胃溃疡动物模型
常用的方法
① ② ③ ④ 应激法 幽门结扎法 药物法 醋酸法
第 八 章 消化系统疾病动物模型
The animal models of digestives
system diseases
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任立群
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第 一 节 急性胃炎动物模型
2013-7-10
任立群
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急性胃炎动物模型
一、酸制剂诱发急性胃炎模型
实验动物
体重300g左右雄性Wistar大鼠。
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实验动物
体重200~250g雄性Wistar大鼠。
操作方法
用人胆汁与甘油（v/v,1:1）的混合液灌胃，每周1 次，每次4ml，连续灌胃10周后处死大鼠，切除全胃，用 10%甲醛液固定，常规石蜡包埋切片，HE染色和刀豆蛋 白A异染，进行组织病理学检查，重点观察幽门腺和胃底 腺的变化。
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任立群
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一、应激性胃溃疡模型
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任立群
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应激性胃溃疡模型
造模机制
应激刺激 交感神经兴奋性↑ 副交感神经-垂体-肾 上腺系统兴奋性↑ 胃运动亢进 胃酸、胃蛋白酶和 胃泌素分泌↑
血管收缩 胃黏膜缺血、缺氧和 抵抗力↓
应激性溃疡
应激性胃溃疡模型
应激刺激有那些?
外伤 休克 感染 过冷、过热 心理创伤 饥饿 水浸
任立群
3
急性胃炎动物模型
操作方法
大鼠禁食24h，在清醒状态下，用下述试剂或物质灌胃：
（1）水杨酸制剂（如20 mmol/L阿司匹林或水杨
酸溶液）按100 mg/kg体重灌胃；
（2）10 mmol/L的醋酸； （3）不同浓度的盐酸（1，10，100 mmol/L）； （4）同种动物胆汁； （5）2 mmol/L的牛磺胆酸； （6）15%的乙醇；
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急性胃炎动物模型
结
果
模型组动物胃系数和损伤指数明显增 加，肉眼观察模型组胃黏膜充血、水肿， 皱襞减少，颜色暗红，并有大量散在出血 点。
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第 二 节 慢性胃炎动物模型
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慢性胃炎模型
一、胆汁或牛磺胆酸灌胃法慢性胃炎模型
实验动物
体重200~250g 雄性Wistar大鼠。
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慢性胃炎模型
操作方法

主动免疫:皮下注射佐剂抗原0.3ml，一个月后 重复注射一次。（同种大鼠胃黏膜生理盐水组织匀 浆与弗氏佐剂1：1乳液） 胆汁灌胃:在进行第一次免疫的同时，采用无化 脓性炎症病人的引流胆汁，按12.5ml/kg体重， 每日一次，连续70d。 热水灌胃:在胆汁灌胃的同日（间隔5h），灌胃 给予50℃热水12.5ml/kg体重，每日1次，连续 70d。
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慢性胃炎模型
注意事项

同“综合法一”；
因去氧胆酸钠成本高，可以猪胆汁代替；
阳性对照药可选维酶素，0.25~0.5g/kg体重。
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慢性胃炎模型
综合法三
造模机制 采用去氧胆酸钠、酒精、氨水和吲哚 美辛等因素对胃黏膜进行较长时间的刺激，
造成胃黏膜慢性损伤，形成慢性萎缩性胃炎。