高中生物 实验五叶绿体中色素的提取和分离
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实验五
叶绿体中色素的提取、理化性质 的鉴定和含量测定
一、实验原理
1. 叶绿体中主要色素是叶绿素和类胡萝卜素
2. 种类：叶a 、 叶b
结构： 双羧酸酯
Βιβλιοθήκη Baidu
含与N碱、反M应g的生极成性叶头
物理性质：不溶于水，易溶叶绿于绿素有醇盐机非、溶极叶剂性醇尾
化学性质：皂化反应
和甲醇。
置换反应
叶光功绿 合能素 色：a素吸）的收光光学能性、质电子传递镁、可等光被置能銅换转、。化氢（少量
石油醚提取液
色素的石油醚提取液置暗处或用黑纸包好备用。
光破坏作用 2 叶绿素的荧光 2 皂化反应 3
A663 吸收值测定
30% KOH甲醇溶液
去镁叶绿素 1ml
HCL滴加 醋酸铜结晶
分光光度法测定叶绿素和类胡萝 卜素的含量
P 53
三、作业
1. 皂化反应现象及原因 2. 叶绿素含量测定 3. 为何不能用无水乙醇和丙酮提取叶绿素？
荧光现象和磷光现象
荧光现象：叶绿素溶液在透射光下呈绿色，而 在反射光下呈红色的现象。
Chl + hν
基态 光子能量
chl*激发态
叶绿素、类胡萝 卜素的含量测定
二、实验步骤
叶片10g
研磨
SiO2和CaCO3、10+20ml丙酮
丙酮提取液
NaCL水溶液，分层
20ml石油醚萃取、蒸馏水洗
要求：实验作业当堂交
★
Mg偏向带正电荷，N 偏向带负电荷，亲水 “头部”
亲脂性“尾巴”
光合色素的光学性质 ----吸收光谱（absorption spectrum）
光合色素对不同波长光吸收后形成的光谱
叶绿素a、b：红光和蓝紫光，吸收绿光最少 类胡萝卜素： 吸蓝紫光，不吸收红、橙、黄光 藻胆素： 藻红素——绿光 藻蓝素——橙红光
可见光光谱
对光合作用有效光的波长是400~700 nm
荧光(fluorescence） : CHL从第一单线态回到基 态所发射的光。
磷光(phosphorescence）:CHL从第一三单线态回 到基态所发射的光。
叶绿素的荧光和磷光现象说明 叶绿素能被光所激发， 而叶绿素的激发是
将光能转变为化学能的第一步。
叶绿体中色素的提取、理化性质 的鉴定和含量测定
一、实验原理
1. 叶绿体中主要色素是叶绿素和类胡萝卜素
2. 种类：叶a 、 叶b
结构： 双羧酸酯
Βιβλιοθήκη Baidu
含与N碱、反M应g的生极成性叶头
物理性质：不溶于水，易溶叶绿于绿素有醇盐机非、溶极叶剂性醇尾
化学性质：皂化反应
和甲醇。
置换反应
叶光功绿 合能素 色：a素吸）的收光光学能性、质电子传递镁、可等光被置能銅换转、。化氢（少量
石油醚提取液
色素的石油醚提取液置暗处或用黑纸包好备用。
光破坏作用 2 叶绿素的荧光 2 皂化反应 3
A663 吸收值测定
30% KOH甲醇溶液
去镁叶绿素 1ml
HCL滴加 醋酸铜结晶
分光光度法测定叶绿素和类胡萝 卜素的含量
P 53
三、作业
1. 皂化反应现象及原因 2. 叶绿素含量测定 3. 为何不能用无水乙醇和丙酮提取叶绿素？
荧光现象和磷光现象
荧光现象：叶绿素溶液在透射光下呈绿色，而 在反射光下呈红色的现象。
Chl + hν
基态 光子能量
chl*激发态
叶绿素、类胡萝 卜素的含量测定
二、实验步骤
叶片10g
研磨
SiO2和CaCO3、10+20ml丙酮
丙酮提取液
NaCL水溶液，分层
20ml石油醚萃取、蒸馏水洗
要求：实验作业当堂交
★
Mg偏向带正电荷，N 偏向带负电荷，亲水 “头部”
亲脂性“尾巴”
光合色素的光学性质 ----吸收光谱（absorption spectrum）
光合色素对不同波长光吸收后形成的光谱
叶绿素a、b：红光和蓝紫光，吸收绿光最少 类胡萝卜素： 吸蓝紫光，不吸收红、橙、黄光 藻胆素： 藻红素——绿光 藻蓝素——橙红光
可见光光谱
对光合作用有效光的波长是400~700 nm
荧光(fluorescence） : CHL从第一单线态回到基 态所发射的光。
磷光(phosphorescence）:CHL从第一三单线态回 到基态所发射的光。
叶绿素的荧光和磷光现象说明 叶绿素能被光所激发， 而叶绿素的激发是
将光能转变为化学能的第一步。