双波长法测淀粉含量

附录4
直链淀粉和支链淀粉的测定（双波长法）
一、目的
淀粉一般都是直链淀粉和支链淀粉的混合物。

直链淀粉和支链淀粉含量和比例因植物种类而不同，决定着谷物种子的出粉率和食物品质，并影响着谷物的贮藏加工。

通过本实验学习掌握双波长测定谷物中直链淀粉和支链淀粉的含量。

二、原理
根据双波长比色原理，如果溶液中某溶质在两个波长下均有吸收，则两个波长的吸收差值与溶质浓度成正比。

直链淀粉与碘作用产生纯蓝色，支链淀粉与碘作用产生紫红色。

如果用两种淀粉的标准溶液与碘反应，然后在同一个坐标系里进行扫描或做吸收曲线，即可达到实验目的。

三、仪器、试剂和材料
1、仪器
（1）电子分析天平
（2）分光光度计1台
（3）ph计
（4）容量瓶100mlx2，50mlx16
（5）吸管0.5mlx1，2mlx1，5mlx1
2、试剂
（1）乙醚
（2）无水乙醇
（3）0.5mol/LKOH溶液
（4）0.1mol/LHCL溶液
（5）碘试剂：称取碘化钾2.0g，溶于少量蒸馏水，在加碘0.2g，待溶解后用蒸馏水稀释定容至100ml。

（6）直链淀粉标准溶液：称取直链淀粉纯品0.1000g，放在100ml容量瓶中，加入0.5mol/LKOH10ml，在热水中待溶解后，取出加蒸馏水定容至100ml，即为1mg/ml直链淀粉标准溶液。

(7)支链淀粉标准溶液：用0.1000 g支链淀粉按（6）法制备成1mg支链淀粉标准溶液。

3、材料
小麦粉
四、操作步骤
1、选择支链、直链淀粉测定的波长参比波长。

直链淀粉：取1mg/ml直链淀粉标准溶液1ml，放入50ml容量瓶中，加蒸馏水30ml，以0.1mol/LHCL溶液调至PH3.5左右，加入碘试剂0.5ml，并以蒸馏水定容。

静置20min，以蒸馏水为空白，用光束分光光度计进行可见光全波段扫描或用普通比色法绘出直链淀粉吸收曲线。

支链淀粉：取1mg/ml支链淀粉标准溶液1ml，放入50ml容量瓶中，加蒸馏水30ml，以0.1mol/LHCL溶液调至PH3.5左右，加入碘试剂0.5ml，并以蒸馏水定容。

静置20min，以蒸馏水为空白，用光束分光光度计进行可见光全波段扫描或用普通比色法绘出支链淀粉吸收曲线。

2、制作双波长直链淀粉标准曲线：吸取1mg/ml直链淀粉标准溶液0.
3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3ml分别放入6只不同的50ml容量瓶中，加蒸馏水30ml，以0.1mol/LHCL溶液调至PH3.5左右，加入碘试剂0.5ml，并以蒸馏水定容。

静置20min，以蒸馏水为空白，比色，吸光差值为纵坐标，直链淀粉含量（mg）为横坐标制备双波长直链淀粉标准曲线。

3、制作双波长支链淀粉标准曲线：吸取1mg/ml支链淀粉标准溶液2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5ml分别放入6只不同的50ml容量瓶中，加蒸馏水30ml，以0.1mol/LHCL溶液调至PH3.5左右，加入碘试剂0.5ml，并以蒸馏水定容。

静置20min，以蒸馏水为空白，比色，吸光差值为纵坐标，支链淀粉含量（mg）为横坐标制备双波长支链淀粉标准曲线。

4、样品中直链淀粉、支链淀粉及总淀粉的测定：样品粉碎过60目筛，用乙醚脱脂，称取脱脂样品0.1g左右（精确到1ml），置于50ml容量瓶中。

加0.5mol/LKOH溶液10ml，在沸水浴中加热10min，取出，以蒸馏水
定容至50ml，静置。

吸取样品液2.5ml两份（即样品液和空白液），均加蒸馏水30ml，以0.1mol/LHCL溶液调至PH3.5左右，样品中加入碘试剂0.5ml，空白液不加碘试剂，然后定容至50ml。

静置20min，以样品空白液为对照比色。

五、结果处理
直链淀粉（%）=（X1*50*100）/（2.5*m*1000）
支链淀粉（%）=（X2*50*100）/（2.5*m*1000）
式中，
X1----查双波长直链淀粉标准曲线得样品中直链淀粉含量（mg）
X2----查双波长支链淀粉标准曲线得样品中支链淀粉含量（mg）
m-----样品质量（g）
总淀粉（%）=直链淀粉（%）+支链淀粉（%）。