生化分析仪的原理及常用检测方法

1.连续监测法
• 即零级反应速率法,亦称斜率法 在较长反应时间区段内(90-180秒)，每隔一 定时间(5~30秒)读取一次吸光度值，至 少读 取4点，得到3个以上△A，最后算出 反应速 率△A/min。
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1.连续监测法特点
• 与固定时间法相比，属于即时观测，无需 停止酶促反应、不需添加其他呈色试剂， 且可将多点的测定结果绘图连线，快速、 直观查看酶促反应进程，很容易找到呈直 线的线性期，检查到是否偏离零级反应。
生化分析仪的原理及常用检测 方法
韦志鹃 2019-1-11
分类
• 按结构原理分 连续流动式 分立式——常用 离心式 干片式——急诊常用
小型 中型 大型 超大型（模块式）
• 按测定速度分
• 按自动化程度分 半自动 全自动
基本原理
• 临床生化分析仪最常使用的是——分光光度 法 • 分光光度法——是通过测定被测物质在特定 波长处或一定波长范围内光的吸收度，对 该物质进行定性和定量分析的方法。
Lambert-Beer（朗伯-比尔）定律
• 郎伯-比尔定律表明：当液层厚度固定时， 溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。 即：A/C=const • 故：只要测出某种溶液的吸光度，将它与 已知浓度的标准溶液吸光度进行比较，就 可以算出该溶液的浓度。
生化测定方法
终点法： 一点终点法 二点终点法 速率法：
一点终点法
• 一点终点法——在时间-吸光度曲线上吸光 度不再改变时，选择一个时间点测定吸光 度值。
• 通常在反应终点附近连续读两个吸光度， 求出两点的平均值，并根据两点的差值判 断反应是否达到平衡。 • 一点终点法通常是单试剂项目采用的方法
一点终点法反应曲线
二点终点法
• 第二试剂加入以前，选择某一点读取吸光 度Am，经过一定时间后反应达终点后测 第 二个吸光度值An,利用两吸光度之差计 算结 果。
光吸收曲线
Lamber-Beer定律：分光光度法基本 定律
描述物质对某一波长光吸收的强弱与吸光物 质的浓度及其液层厚度的关系
Lamber定律：A∝l Beer定律：A ∝C
入射光强度I0 透射光强度I 物体截面为S 厚度为l
Lambert-Beer（朗伯-比尔）定律
• 当一束平行单色光通过均匀的非散射样品 时，样品对光的吸光度与样品的浓度及厚 度成正比
• 第一点吸光度值由样本本身或第一试剂与 样品的非特异性反应有关，相当于样品空 白，可有效的消除样品自身的吸光度，如 溶血，黄疸，脂血等的干扰。 • 两点终点法，它是双试剂项目常选用方法
两点终点
两点终点法
• 计算公式：
C=(An-K0*Am)*K K0---体积校正因子 K0=(Sv+R1)/(Sv+R1+R2)
固定时间法
• 指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点， 这两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光 度，利用这两点吸光度差值计算结果。
如：苦味酸法测肌酐
固定时间法
连续监测法
• 根据反应速度与待测物的浓度成正比，通 过测定一段时间内吸光度的变化速率 （ △A/min ）来计算待测物的浓度。
• 酶活性测定常用Байду номын сангаас
酶促反应曲线
连续监测法
零级反应期---酶促反应速度达到并保持恒定 速率进行反应，单位时间内的变化速率恒 定不变。
在零级反应期单位时间内的吸光度变化(反 应速率△A/min)与酶活力呈正比。
连续监测法
• 测定时间的选择： 监测时间应根据所用仪器不影响检测速度和 结果的准确性选在时间反应进程曲线的线 性期。通常： 延迟时间：30-60秒 监测时间：>120秒
• • A = kcb A---吸光度 k---吸光系数 c---溶液浓度 b---液层厚度
吸光系数
• 定义：吸光物质在单位浓度及单位厚度时 测得的吸光度。 • K值的大小取决于吸光物质的性质、入射 光波长、溶液温度和溶剂性质等，与溶液 浓度大小和液层厚度无关。但K值大小因 溶液浓度所采用的单位的不同而异。
免疫比浊法
通过物质对光的散射或透射来测定物质含量的 方 法： 散射比浊：特定蛋白分析仪 透射比浊：自动生化分析仪 通常作两点终点法分析，多采用多点校准。
应用：用Ab测定Ag（主要为微量蛋白：IG、 C、 APOA1/B、ASO、RF、CRP等），要求Ab 过量， 此时Ag-Ab复合物的生成量随Ag的增加 而递增， 光散/透射射强度与抗原量成正比。