肺结核诊断原则及标准
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介由环状结构，在等温条件下进行扩增的技术
2000年：论文发表 （Nucleic Acids Research, Vol.28, No.12, 栄研化学、Notomi（納富）et al）
TB-LAMP法的特点
5分钟简易核酸提取
RNA也能实现一步扩增
等温（67℃）下进行DNA扩增
40分钟核酸扩增
目视直接判定结果
临床诊断病例
1） 三次痰涂片阴性，胸部影像学检查显示与活动性肺结核相符的病变和伴 有咳嗽、咳痰、血痰或咯血等肺结核可疑症状 2） 三次痰涂片阴性，胸部影像学检查显示与活动性肺结核相符的病变和5个 单位结核菌素(PPD)试验强阳性 3） 三次痰涂片阴性，胸部影像学检查显示与活动性肺结核相符的病变和抗 结核抗体检查阳性 4） 三次痰涂片阴性，胸部影像学检查显示与活动性肺结核相符的病变及肺 外组织病理检查证实为结核病变者 5） 三次痰涂片阴性的疑似肺结核病例经诊断性治疗或随访观察可排除其他 肺部疾病者
不能分辨结核菌和非结核性抗酸菌。
2・培养检查
最基本的检查方法需要一定的时间。 （固体培养基：8周、液体培养基：6周）
3・DNA检查（PCR\TB-LAMP）
快速优越、可以快速的检出结核菌并进行鉴定
ＬＡＭＰ法
Loop-mediated Isothermal Amplification
LAMP
环状介导 等温 扩增
LAMP法是简便,快速, 精确的基因扩增法
15
LA-500 Realtime浊度检测
LF-160 荧光目视判断
TB-LAMP法的特点
5分钟简易核酸提取
RNA也能实现一步扩增
等温（67℃）下进行DNA扩增
40分钟核酸扩增
目视直接判定结果
LAMP法是简便,快速, 精确的基因扩增法
16
LA-500 Realtime浊度检测
应用2：TB-LAMP和TB-PCR灵敏度比较
菌量 （CFU/mL）
1×105 1×104 1×103 1×102 1×101
判定
阳性 阳性 阳性 阳性 －
TB-LAMP 阳性判定时间
（Tt） 12’54” 12’48” 14’54” 21’42”
PCR-TB（TaqMan）
判定
阳性循环数 （Ct）
LF-160 荧光目视判断
应用1：涂片、培养、mPCR、LAMP比较
TB - mPCR
TB - LAMP
P. Kumar, et al..Journal of Infection（2014）69,607-615.
应用1：涂片、培养、mPCR、LAMP比较
P. Kumar, et al..Journal of Infection（2014）69,607-615.
肺结核诊断原则及标准
河南省胸科医院 刘新
• 儿童结核病诊断标准
• 肺结核诊断标准WS288-2008 • 结核病分类标准WS196-2001
病例介绍
• 男,11岁 • 主因“轻咳、咳痰2月，间断发热50天”入院当地医院行PPD（-），考
虑脓胸；予万古霉素、美平等抗感染，胸腔闭式引流，无好转转院辅 助检查血常规：WBC14.0×109/L，N：70.1%，L：18.5%；PPD：2+；胸 水：WBC460×106/L，单核41%，多核59%；糖2.1mmol/l，蛋白40g/L； 痰抗酸染色（入院第2天）：1-9条/视野 • 诊断：原发性肺结核
（2）胸部X线检查:有各型肺结核的征象 （3）活动性结核病接触史 （4）结核菌素试验阳性 （5）痰液、胃液或支气管肺泡灌洗液结核杆菌涂片或培养阳性; （6）抗结核治疗有效 （7）除外肺部其他疾病,如各种原因的肺炎、肺肿瘤、肺囊肿、肺间质 病等 （8）肺组织病理检查符合肺结核特征 具有第1和第2项,以及第3、4、6、7中的任何2项,属于临床诊断病例。具 有第1和第2项,以及第5或8项者,属于确诊病例
（二）诊断原则
– 肺结核的诊断是以病原学检查为主，结合流行病学、 临床表现、胸部影像学、必要的辅助检查及鉴别诊断 等，进行综合分析做出诊断
– 儿童肺结核的诊断，除痰液病原学检查外，还要重视 胃液病原学检查
– 以病原学、病理学作为确诊依据
结核菌病原学的检查
1・涂片检查（抗酸性染色）
在短时间内可以得到结果的快速检查，虽然非常实用，但是检体中细菌 数如果不多的话检查不出来（10４/mL以上）
（一）肺结核诊断依据
1、流行病学史
– 有肺结核患者接触史有助于结核病的诊断，尤 其对儿童结核病的诊断
1、症状
– 咳嗽、咳痰≥2周，或痰中带血或咯血为肺结核 可疑症状
– 儿童肺结核除肺结核可疑症状外，多有超过2周 的发热，还可表现发育迟缓
2、体征
– 患者除呼吸系统体征外，还可出现消瘦、精神 萎靡、贫血貌，儿童患者可出现生长发育迟缓
结核性胸膜炎 气胸，胸膜瘘 • 治疗：HRZE+拉氧头孢+替考拉宁→换为利奈唑胺+舒普深+甲硝唑+氟康 唑+ 左氧氟沙星
一、肺结核诊断标准
• WS288-2008
– 确诊病例 – 临床诊断病例 – 疑似病例
• 确诊病例
1） 痰涂片检查阳性即涂阳肺结核 2） 痰涂片阴性但结核分枝杆菌分离培养阳 性即仅培阳肺结核 3） 肺部病变标本病理学诊断为结核病变者
ຫໍສະໝຸດ Baidu
• 疑似病例
1） 5岁以下儿童：有肺结核可疑症状及与涂阳肺结核 密切接触史，或有肺结核可疑症状及5单位结核菌素试 验强阳性 2） 胸部影像学检查显示与活动性肺结核相符的病变
• 儿童肺结核的临床诊断标准和治疗方案（2006年）
• 中华医学会儿科学分会呼吸学组
（1）临床表现:发热、咳嗽持续2周以上,或喘息等
4、实验室检查 –细菌学检查：包括涂片检查、分枝杆菌分离培养和 鉴定 –分子生物学检查:结核耐药基因检测及分枝杆菌菌 种鉴定,LAMP –结核病病理学检查 –免疫学检查
结核菌素，T-SPOT.TB检查，血清学检查
–胸部影像学检查
可以用于诊断儿童结核病的临床样本
u 重视病原学检查 • 咽拭子粘液 •痰 • 胃液 •便
阳性
27.9
阳性
35.2
阳性
40.4
－
－
・TB-PCR通过增加循环数检测出涂抹阳性检测限度（1×104/mL）的1/100浓度。TB-LAMP可通 过延长阳性判定时间可检测出1/1000以下浓度，比TB-PCR检出灵敏度高。
吉多仁子等： 第3回关西LAMP研究会
2000年：论文发表 （Nucleic Acids Research, Vol.28, No.12, 栄研化学、Notomi（納富）et al）
TB-LAMP法的特点
5分钟简易核酸提取
RNA也能实现一步扩增
等温（67℃）下进行DNA扩增
40分钟核酸扩增
目视直接判定结果
临床诊断病例
1） 三次痰涂片阴性，胸部影像学检查显示与活动性肺结核相符的病变和伴 有咳嗽、咳痰、血痰或咯血等肺结核可疑症状 2） 三次痰涂片阴性，胸部影像学检查显示与活动性肺结核相符的病变和5个 单位结核菌素(PPD)试验强阳性 3） 三次痰涂片阴性，胸部影像学检查显示与活动性肺结核相符的病变和抗 结核抗体检查阳性 4） 三次痰涂片阴性，胸部影像学检查显示与活动性肺结核相符的病变及肺 外组织病理检查证实为结核病变者 5） 三次痰涂片阴性的疑似肺结核病例经诊断性治疗或随访观察可排除其他 肺部疾病者
不能分辨结核菌和非结核性抗酸菌。
2・培养检查
最基本的检查方法需要一定的时间。 （固体培养基：8周、液体培养基：6周）
3・DNA检查（PCR\TB-LAMP）
快速优越、可以快速的检出结核菌并进行鉴定
ＬＡＭＰ法
Loop-mediated Isothermal Amplification
LAMP
环状介导 等温 扩增
LAMP法是简便,快速, 精确的基因扩增法
15
LA-500 Realtime浊度检测
LF-160 荧光目视判断
TB-LAMP法的特点
5分钟简易核酸提取
RNA也能实现一步扩增
等温（67℃）下进行DNA扩增
40分钟核酸扩增
目视直接判定结果
LAMP法是简便,快速, 精确的基因扩增法
16
LA-500 Realtime浊度检测
应用2：TB-LAMP和TB-PCR灵敏度比较
菌量 （CFU/mL）
1×105 1×104 1×103 1×102 1×101
判定
阳性 阳性 阳性 阳性 －
TB-LAMP 阳性判定时间
（Tt） 12’54” 12’48” 14’54” 21’42”
PCR-TB（TaqMan）
判定
阳性循环数 （Ct）
LF-160 荧光目视判断
应用1：涂片、培养、mPCR、LAMP比较
TB - mPCR
TB - LAMP
P. Kumar, et al..Journal of Infection（2014）69,607-615.
应用1：涂片、培养、mPCR、LAMP比较
P. Kumar, et al..Journal of Infection（2014）69,607-615.
肺结核诊断原则及标准
河南省胸科医院 刘新
• 儿童结核病诊断标准
• 肺结核诊断标准WS288-2008 • 结核病分类标准WS196-2001
病例介绍
• 男,11岁 • 主因“轻咳、咳痰2月，间断发热50天”入院当地医院行PPD（-），考
虑脓胸；予万古霉素、美平等抗感染，胸腔闭式引流，无好转转院辅 助检查血常规：WBC14.0×109/L，N：70.1%，L：18.5%；PPD：2+；胸 水：WBC460×106/L，单核41%，多核59%；糖2.1mmol/l，蛋白40g/L； 痰抗酸染色（入院第2天）：1-9条/视野 • 诊断：原发性肺结核
（2）胸部X线检查:有各型肺结核的征象 （3）活动性结核病接触史 （4）结核菌素试验阳性 （5）痰液、胃液或支气管肺泡灌洗液结核杆菌涂片或培养阳性; （6）抗结核治疗有效 （7）除外肺部其他疾病,如各种原因的肺炎、肺肿瘤、肺囊肿、肺间质 病等 （8）肺组织病理检查符合肺结核特征 具有第1和第2项,以及第3、4、6、7中的任何2项,属于临床诊断病例。具 有第1和第2项,以及第5或8项者,属于确诊病例
（二）诊断原则
– 肺结核的诊断是以病原学检查为主，结合流行病学、 临床表现、胸部影像学、必要的辅助检查及鉴别诊断 等，进行综合分析做出诊断
– 儿童肺结核的诊断，除痰液病原学检查外，还要重视 胃液病原学检查
– 以病原学、病理学作为确诊依据
结核菌病原学的检查
1・涂片检查（抗酸性染色）
在短时间内可以得到结果的快速检查，虽然非常实用，但是检体中细菌 数如果不多的话检查不出来（10４/mL以上）
（一）肺结核诊断依据
1、流行病学史
– 有肺结核患者接触史有助于结核病的诊断，尤 其对儿童结核病的诊断
1、症状
– 咳嗽、咳痰≥2周，或痰中带血或咯血为肺结核 可疑症状
– 儿童肺结核除肺结核可疑症状外，多有超过2周 的发热，还可表现发育迟缓
2、体征
– 患者除呼吸系统体征外，还可出现消瘦、精神 萎靡、贫血貌，儿童患者可出现生长发育迟缓
结核性胸膜炎 气胸，胸膜瘘 • 治疗：HRZE+拉氧头孢+替考拉宁→换为利奈唑胺+舒普深+甲硝唑+氟康 唑+ 左氧氟沙星
一、肺结核诊断标准
• WS288-2008
– 确诊病例 – 临床诊断病例 – 疑似病例
• 确诊病例
1） 痰涂片检查阳性即涂阳肺结核 2） 痰涂片阴性但结核分枝杆菌分离培养阳 性即仅培阳肺结核 3） 肺部病变标本病理学诊断为结核病变者
ຫໍສະໝຸດ Baidu
• 疑似病例
1） 5岁以下儿童：有肺结核可疑症状及与涂阳肺结核 密切接触史，或有肺结核可疑症状及5单位结核菌素试 验强阳性 2） 胸部影像学检查显示与活动性肺结核相符的病变
• 儿童肺结核的临床诊断标准和治疗方案（2006年）
• 中华医学会儿科学分会呼吸学组
（1）临床表现:发热、咳嗽持续2周以上,或喘息等
4、实验室检查 –细菌学检查：包括涂片检查、分枝杆菌分离培养和 鉴定 –分子生物学检查:结核耐药基因检测及分枝杆菌菌 种鉴定,LAMP –结核病病理学检查 –免疫学检查
结核菌素，T-SPOT.TB检查，血清学检查
–胸部影像学检查
可以用于诊断儿童结核病的临床样本
u 重视病原学检查 • 咽拭子粘液 •痰 • 胃液 •便
阳性
27.9
阳性
35.2
阳性
40.4
－
－
・TB-PCR通过增加循环数检测出涂抹阳性检测限度（1×104/mL）的1/100浓度。TB-LAMP可通 过延长阳性判定时间可检测出1/1000以下浓度，比TB-PCR检出灵敏度高。
吉多仁子等： 第3回关西LAMP研究会