白细胞抗原检测
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人类白细胞抗原(HLA)
• HLA抗原分布相当广泛， 见于所有的有核细胞上， 但在淋巴细胞上的密度最 高 • 血小板上的HLA抗原是血 小板膜表面的固有结构成 分，主要是HLA-I类的A、 B位点的抗原 • HLA-I类抗原是引起血小 板同种免疫和血小板输注 无效的主要抗原，约占 80%
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预致敏淋巴细胞试验
• 在应答细胞A与刺激细胞B的初次混合淋巴细胞 培养反应(MLC)中，经过9-12天培养，应答细胞 A增生为淋巴细胞后变成小淋巴细胞，即为预致 敏淋巴细胞（PL）
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混合淋巴细胞培养
• 两个无关个体的淋巴细胞，在体外适当的 环境 下混合培养后可以互相激发，使细胞活化并向 母细胞转化，产生分裂增生现象，即为混合淋 巴细胞培养方法（MLC）。 • 现MLC主要用于实体器官移植前的快速相容性 检测。分双向MLC和单向MLC
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血小板特异性抗原
• 在白种人中HPA-1b表现频率是26.5%，是引起白 种人血小板输注无效发生的主要血小板特异抗 原 • 在亚洲人中 HPA－2b抗原频率约为 26％，是引 起亚洲人血小板输注无效发生的主要血小板特 异抗原。
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血小板血型的临床应用
• 一、血小板输注无效 • 定义：血小板输注无效-指患者输注一定量的血 小板后其增加值明显低于预期值
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HLA抗原检测技术
• 人类白细胞抗原检测技术已广泛应用于器官移 植前的组织配型 • 检测方法：血清学方法、细胞学方法和基因分 型方法 • 与临床输血的关系—HLA抗原可引起免疫应答 →HLA抗体→发热性非溶血性输血反应和血小板 输注无效
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HLA血清学方法
• 血清学方法：是用一系列已知的抗HLA抗原的标 准血清来检测未知淋巴细胞表面的HLA抗原型别 。
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HLA基因分型方法
• PCR限制性片段长度多态性（PCR-RFLP） • 序列特异性引物PCR（PCR-SSP） • PCR序列特异性寡核苷酸探针分型技术（PCRSSO） • PCR单核苷酸序列分析（PCR-SBT） • 基因芯片 • 流式细胞术
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粒细胞抗原、抗体检测
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血小板血型抗原
• 血小板血型抗原主要有两大类： 血小板相关抗原 血小板特异性抗原。
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• 血小板相关抗原：血小板表面存在的与其他细 胞或组织共有的抗原 • 血小板特异性抗原（HPA）：通常将血小板表 面由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血 小板特有的遗传多态性，并且不存在于其他细 胞和组织上的抗原。
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血小板相关抗原
• 1、红细胞血型抗原：血小板上的ABH抗原物质 ，包括机体所产生的以及由血浆中黏附在血小 板表面的两类抗原构成。 • 2、HLA系统血型抗原：血小板表面主要存在 HLA-Ⅰ类抗原，如HLA-A、HLA-B、HLA-C位点等
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血小板特异性抗原
• 血小板特异性抗原(HPA)是由血小板特有的抗原决 定簇组成，表现出血小板独特的遗传多态性，不存 在于其它细胞和组织中 ，目前已发现的血小板特 异性抗原已有8个系统16个抗原 • 国际命名原则是：① 在系统前冠以HPA，即人类血 小板抗原的英文缩写。②各抗原系统以公布日期的 顺序编号。③对偶抗原按人群中频率由高至 低用 字母命名 (例如HPA-1a,HPA-2b)
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质量标准
1.血清特异性程度（FP《3%，FN《14%） 2.血清的强度，采用强度指数SI表示，SI》70%
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HLA细胞学方法
• ①纯合细胞分型方法 • ②预致敏淋巴细胞试验 • ③混合淋巴细胞培养
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纯合细胞分型方法
• 该方法的原理为带有A/A纯合抗原的细胞（HTC ）作为刺激细胞，带有未知抗原X/X的检测细胞 作为应答细胞，在两种细胞组成的单向混合淋 巴细胞培养反应（MLC）中，如果发生刺激反 应，表明受检细胞能够识别A抗原当成外来抗原 ，所以受检细胞不具有A抗原，反之受检细胞可 能是A抗原的 杂合子或纯合子
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观察血小板效果的指标
校正的血小板上升数 （Corrected Count Increment, CCI）
微量淋巴细胞毒试验记分
死细胞（%） 0～10 11～20 记分 1 2 意义 阴性 可疑阴性反应
21～40 41～80
0～＞80
4 6
8
可疑阳性反应 阳性反应
强阳性反应
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抗血清的来源和标准
• ①通过妊娠、输血和同种器官移植等免疫作用 产生HLA同种抗体 • ②使用纯化的HLA抗原免疫动物，可产生HLA异 种抗体 • ③使用杂交瘤技术，可获得单克隆抗体 • ④少数存在的天然抗体
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• 血小板输注无效是由于患者反复输注血小板而 产生了血小板同种抗体，导致再次输入血小板 时，发生免疫反应。 • 主要是由血小板HLA抗原（HLA-A，-B，-C）以 及少数HPA抗原引起的，
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• HLA抗体在所有病人中达到50%-90%，同时，也 有17%-25%的HPA抗体出现，缩短输注血小板的 寿命。 • 在黄种人中，HPA-2b是引起血小板输注无效的 主要原因之一。治疗方法：输注"配合"的浓缩 血小板。
• 血清学方法 • ①粒细胞凝集试验（GAT） • ②粒细胞免疫莹光试验（GIFT） • ③单克隆抗体特异性粒细胞抗原捕获试验（ MAIGA） • ④ELISA方法 • ⑤流式细胞术
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基因分型技术
• 主要方法为PCR-RFLP PCR-SSP PCR-SSO等 • 1、PCR序列特异性引物 • 2、PCR限制性片段长度多态性
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微量淋巴毒实验 • 原理：淋巴细胞膜表面具有HLA抗原，而分型血 清中含有抗特定HLA抗原的细胞毒抗体，该抗体 与淋巴细胞膜上的相应的HLA抗原结合后在补体 的参与下损伤细胞膜，经染料染色后，通过观 察细胞是否被染色来判断待测细胞是否损伤或 死亡，进而判断抗原、抗体反应的强度。
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人类白细胞抗原(HLA)
• HLA抗原分布相当广泛， 见于所有的有核细胞上， 但在淋巴细胞上的密度最 高 • 血小板上的HLA抗原是血 小板膜表面的固有结构成 分，主要是HLA-I类的A、 B位点的抗原 • HLA-I类抗原是引起血小 板同种免疫和血小板输注 无效的主要抗原，约占 80%
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预致敏淋巴细胞试验
• 在应答细胞A与刺激细胞B的初次混合淋巴细胞 培养反应(MLC)中，经过9-12天培养，应答细胞 A增生为淋巴细胞后变成小淋巴细胞，即为预致 敏淋巴细胞（PL）
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混合淋巴细胞培养
• 两个无关个体的淋巴细胞，在体外适当的 环境 下混合培养后可以互相激发，使细胞活化并向 母细胞转化，产生分裂增生现象，即为混合淋 巴细胞培养方法（MLC）。 • 现MLC主要用于实体器官移植前的快速相容性 检测。分双向MLC和单向MLC
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血小板特异性抗原
• 在白种人中HPA-1b表现频率是26.5%，是引起白 种人血小板输注无效发生的主要血小板特异抗 原 • 在亚洲人中 HPA－2b抗原频率约为 26％，是引 起亚洲人血小板输注无效发生的主要血小板特 异抗原。
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血小板血型的临床应用
• 一、血小板输注无效 • 定义：血小板输注无效-指患者输注一定量的血 小板后其增加值明显低于预期值
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HLA抗原检测技术
• 人类白细胞抗原检测技术已广泛应用于器官移 植前的组织配型 • 检测方法：血清学方法、细胞学方法和基因分 型方法 • 与临床输血的关系—HLA抗原可引起免疫应答 →HLA抗体→发热性非溶血性输血反应和血小板 输注无效
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HLA血清学方法
• 血清学方法：是用一系列已知的抗HLA抗原的标 准血清来检测未知淋巴细胞表面的HLA抗原型别 。
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HLA基因分型方法
• PCR限制性片段长度多态性（PCR-RFLP） • 序列特异性引物PCR（PCR-SSP） • PCR序列特异性寡核苷酸探针分型技术（PCRSSO） • PCR单核苷酸序列分析（PCR-SBT） • 基因芯片 • 流式细胞术
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粒细胞抗原、抗体检测
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血小板血型抗原
• 血小板血型抗原主要有两大类： 血小板相关抗原 血小板特异性抗原。
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• 血小板相关抗原：血小板表面存在的与其他细 胞或组织共有的抗原 • 血小板特异性抗原（HPA）：通常将血小板表 面由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血 小板特有的遗传多态性，并且不存在于其他细 胞和组织上的抗原。
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血小板相关抗原
• 1、红细胞血型抗原：血小板上的ABH抗原物质 ，包括机体所产生的以及由血浆中黏附在血小 板表面的两类抗原构成。 • 2、HLA系统血型抗原：血小板表面主要存在 HLA-Ⅰ类抗原，如HLA-A、HLA-B、HLA-C位点等
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血小板特异性抗原
• 血小板特异性抗原(HPA)是由血小板特有的抗原决 定簇组成，表现出血小板独特的遗传多态性，不存 在于其它细胞和组织中 ，目前已发现的血小板特 异性抗原已有8个系统16个抗原 • 国际命名原则是：① 在系统前冠以HPA，即人类血 小板抗原的英文缩写。②各抗原系统以公布日期的 顺序编号。③对偶抗原按人群中频率由高至 低用 字母命名 (例如HPA-1a,HPA-2b)
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质量标准
1.血清特异性程度（FP《3%，FN《14%） 2.血清的强度，采用强度指数SI表示，SI》70%
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HLA细胞学方法
• ①纯合细胞分型方法 • ②预致敏淋巴细胞试验 • ③混合淋巴细胞培养
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纯合细胞分型方法
• 该方法的原理为带有A/A纯合抗原的细胞（HTC ）作为刺激细胞，带有未知抗原X/X的检测细胞 作为应答细胞，在两种细胞组成的单向混合淋 巴细胞培养反应（MLC）中，如果发生刺激反 应，表明受检细胞能够识别A抗原当成外来抗原 ，所以受检细胞不具有A抗原，反之受检细胞可 能是A抗原的 杂合子或纯合子
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观察血小板效果的指标
校正的血小板上升数 （Corrected Count Increment, CCI）
微量淋巴细胞毒试验记分
死细胞（%） 0～10 11～20 记分 1 2 意义 阴性 可疑阴性反应
21～40 41～80
0～＞80
4 6
8
可疑阳性反应 阳性反应
强阳性反应
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抗血清的来源和标准
• ①通过妊娠、输血和同种器官移植等免疫作用 产生HLA同种抗体 • ②使用纯化的HLA抗原免疫动物，可产生HLA异 种抗体 • ③使用杂交瘤技术，可获得单克隆抗体 • ④少数存在的天然抗体
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• 血小板输注无效是由于患者反复输注血小板而 产生了血小板同种抗体，导致再次输入血小板 时，发生免疫反应。 • 主要是由血小板HLA抗原（HLA-A，-B，-C）以 及少数HPA抗原引起的，
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• HLA抗体在所有病人中达到50%-90%，同时，也 有17%-25%的HPA抗体出现，缩短输注血小板的 寿命。 • 在黄种人中，HPA-2b是引起血小板输注无效的 主要原因之一。治疗方法：输注"配合"的浓缩 血小板。
• 血清学方法 • ①粒细胞凝集试验（GAT） • ②粒细胞免疫莹光试验（GIFT） • ③单克隆抗体特异性粒细胞抗原捕获试验（ MAIGA） • ④ELISA方法 • ⑤流式细胞术
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基因分型技术
• 主要方法为PCR-RFLP PCR-SSP PCR-SSO等 • 1、PCR序列特异性引物 • 2、PCR限制性片段长度多态性
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微量淋巴毒实验 • 原理：淋巴细胞膜表面具有HLA抗原，而分型血 清中含有抗特定HLA抗原的细胞毒抗体，该抗体 与淋巴细胞膜上的相应的HLA抗原结合后在补体 的参与下损伤细胞膜，经染料染色后，通过观 察细胞是否被染色来判断待测细胞是否损伤或 死亡，进而判断抗原、抗体反应的强度。
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