有机磷酸酯类中毒及解救

有机磷酸酯类中毒及解救

【实验目的】

观察有机磷酸酯类中毒的症状和血液胆碱酯酶活力的抑制情况，通过比较阿托品、解磷定的解救作用，掌握两药的作用原理。

【实验原理】

简单复习有机磷中毒机制、症状及解救原则。

一、有机磷酸酯类中毒：胆碱酯酶（CHE）活力受到抑制，失去水解乙酰胆碱（ACh）的能力，ACh在体内蓄积，引起一系列中毒症状：轻度：M样症状（兴奋平滑肌、腺体分泌增多、瞳孔缩小等）；中度：M和N样（骨骼肌兴奋可致肌震颤）症状；重度：M、N和中枢神经系统（可由躁动不安等中枢兴奋转为昏迷等中枢抑制至死亡）症状。

二、解救原则：

1. 清除毒物，避免继续吸收。

2. 特殊治疗：1）M受体阻断剂阿托品：与ACh竞争M 受体，解除有机磷酸酯类中毒M 样症状。要及早、足量、反复注射，达到阿托品化。对轻度中毒有效。对中、重度中毒，合用胆碱酯酶复活药。

2）胆碱酯酶复活药解磷定：能使被有机磷酸酯类抑制的ACHE活力恢复，对M及N样症状有效。要及早应用，防止酶的老化。需与阿托品合用，可提高解救效果（因为胆碱酯酶复活药不能对抗中毒时已经聚积在突触间隙的大量ACh激动M受体的作用）。

3．对症治疗：吸氧、人工呼吸，抗休克等。

三、本次实验通过比较阿托品、解磷定对中毒症状的解救及对血液胆碱酯酶活力的影响，进一步掌握两药的作用机制。

【实验对象】

家兔，2.5～3.0kg。

【实验药品与器材】

0.1%硫酸阿托品（atropine sulfate）、5％敌百虫（metrifonate）、1％肝素（heparin）、2.5％碘解磷定（pyraloxime methoiodide，PAM）、恒温水浴、721分光光度计、试管架、试管、吸管（0.2、1、2、5mL)、滤纸、漏斗、注射器（2、5、10mL）、测瞳孔尺、刀片，采血杯、动脉夹，棉球。

【实验步骤】

1．观察正常状态：家兔2只，称重，观察并记录活动情况、呼吸（频率、有无呼吸困难，呼吸道有无分泌物等）、瞳孔大小、唾液分泌、大小便、肌张力及有无肌震颤等。

2．取血（中毒前或正常对照）：耳缘静脉取血约0.5ml,分别取0.1ml放入空白管（O）、标准管（S）和给药前管（1#），供测正常胆碱酯酶活性用。

取血方法：用酒精棉球擦拭兔耳缘静脉，当其充血明显时，用刀片横断耳缘静脉，使血液（0.5～1.0mL）自然流入采血杯（杯内预先滴入2滴肝素，自然干燥后备用）中，或用2mL注射器逆血流方向于耳缘静脉采血滴入采血杯中，轻轻振荡采血杯，防止凝血。

3．给药： 5％敌百虫（metrlfonate），1.5ml/kg（75mg/kg）,耳缘静脉注射。

按“1”所述指标观察并记录中毒症状。

4.取血（中毒时）：待中毒症状明显时(肌震颤明显时)，依“2”法再次采血约0.2ml,取0.1ml放入中毒管（2#），供测中毒时胆碱酯酶活性用。

5．解救：取血后，甲兔立即静脉注射0.1% 阿托品1ml／kg(1mg/kg)，乙兔立即静脉注射2.5％碘解磷定4ml/kg(100mg/kg), 按“1”所述指标观察并记录中毒症状有何变化，

特别注意甲兔和乙兔的区别。

6．取血（解救后）：在症状改善明显时，再次采血，放0.1ml于解救管（3#:阿托品解救； 4#：碘解磷定解救）供测解救后胆碱酯酶活性用。

7．实验结束后，甲、乙两兔分别补注解磷定和阿托品。

【注意事项】

1．取血注射器及试管预先肝素化。

2．敌百虫注射时，一定要固定好家兔。如敌百虫溅到皮肤上，用清水洗，忌用肥皂清洗。

3．中毒解救要及时，以防止酶老化。可提前准备好解救药。

4．测定胆碱酯酶活性时，各试剂加样顺序切勿颠倒。

5．示教瞳孔、呼吸、唾液分泌的观察及敌百虫注射时如何固定家兔。

【实验结果】

根据本实验的观察项目，列表记录甲乙两兔中毒前后和用不同药物解救后症状及血液胆碱酯酶活性变化。

（注意： OD值反映血中剩余ACh的量，OD值越低，剩余ACh越少，表明胆碱酯酶活力越高。）

【讨论】

应重点概括中毒前、中毒时和解救后具体的实验现象的变化及胆碱酯酶活性的变化，并联系具体的理论内容，点明阿托品和碘解磷定两药作用及机制的区别。

还可根据各组具体实验过程及结果提及实验过程中影响实验结果的因素。

【思考题】

根据本次实验结果，分析有机磷酸酯类的中毒机制，比较阿托品、解磷定的解救效果并掌握两药的作用原理。

附：胆碱酯酶测定的步骤

按下表操作，每加一种试剂后均需充分摇均，保温时间需严格控制。

步骤

加入量

空白管标准管测定管（1、2、3、4）

pH7.2磷酸盐缓冲液（mL）0.9 0.9 0.9 全血（mL）0.1 0.1 0.1

37℃水浴预热3min

0.007mol/L ACh（mL）/ / 1.0

37℃水浴预热20min

碱性羟胺溶液（mL） 4.0 4.0 4.0

0.007mol/L（mL）/ 1.0 /

室温静置2min

4mol/L 盐酸溶液（mL ） 2.0 2.0 2.0 10％三氯化铁（mL ） 2.0 2.0 2.0 0.007mol/L （mL ）

1.0

/

/

滤纸过滤，于15min 内用光电比色（波长525nm ）

测OD 值

注：测定管1、2、3、4分别为给药前、中毒时、阿托品解救后及解磷定解救后血样。

【计算公式】

注：通常以1mL 血液在规定条件下能分解1µmol 乙酰胆碱定为1个胆酰酯酶活性单位。计算式中的“70”是由于每管中加有7µmol 乙酰胆碱、0.1mol 血液，7×1.0/0.1＝70

胆碱酯酶活性（U/mL ）＝

标准管光密度－测定管光密度

×10

标准管光密度