阳离子交换柱后衍生法测定草甘膦

条件
分析柱：草甘膦分析柱，阳离子交换柱，4 mm x 150 mm x 8um
保护柱：草甘膦保护柱，阳离子交换柱，3 mm x 20 mm x 8um
柱温：55 °C
淋洗液：(A)磷酸二氢钾（5 mM，磷酸调 pH 2.0）；(B)氢氧化钾（5 mM）
流速：0.4 mL/min
柱后试剂1：氧化试剂，36 °C，流速为0.4 mL/min
将 OPA 稀释剂倒入预先用甲醇清洗过的干净试剂瓶中。鼓泡 10min 以除去其中的氧 气。余下的步骤应在尽可能短的时间内完成，因为此试剂对氧气和光敏感：称取大约 100 mg OPA 于一小烧杯中，加入 10 mL 甲醇溶解，而后加入 OPA 稀释剂。用 1～2 mL 甲醇清洗烧 杯，把清洗液倒入稀释剂中。加入 2 g 硫醇试剂于试剂瓶中。0.45um 有机系滤膜过滤，超声 脱气，备用。
图1 1.草甘膦 50.0ug/L 2.AMPA 40ug/L
设备
L600 高效液相色谱仪，包括：梯度泵 1 套、柱后衍生仪 1 台、衍生注射泵 2 台、荧光检测 器 1 台、数据采集控制器 1 台、自动进样器 1 台、阳离子色谱柱及预柱各 1 根、色谱工作站 1 套。
试剂
5 mM 磷酸二氢钾，磷酸调 pH 2.0 ；5 mM 氢氧化钾 ；5%次氯酸钠溶液；硼酸钠缓
冲稀释剂 ；OPA（二巯基乙醇），色谱级；甲醇，色谱级；硫醇试剂 。
试剂和标准的准备
氧化试剂 (试剂1): 将一瓶次氯酸盐稀释剂倒入预先用甲醇清洗过的干净试剂瓶中。加入100uL 5% 次氯酸
盐溶液(家用漂白剂)，旋转，混匀，0.45um水系滤膜过滤，超声脱气。加入的剂量可能需要 根据检测器的响应进行调整：色谱系统平衡后，草甘膦混合测试溶液进样10uL，如图 2所示。 如果AMPA和草甘膦的面积比例差别很大，则在氧化剂里面再加入5%次氯酸盐溶液，每次 加入20uL，直至二者所占面积比例相当。 OPA试剂(试剂2):
阳离子交换柱后衍生法测定草甘膦
前言
草甘膦又叫镇草宁，是广谱除草剂，对哺乳动物有低毒性。除草剂的广泛使用使得草甘 膦成为地下水甚至饮用水的可能污染物。
简介
分析草甘膦的方法现在主要有气相色谱或液相色谱法，通常都使用衍生法，其中液相色 谱法用的更多。现主要介绍比较复杂的阳离子交换柱后衍生荧光检测器测定草甘膦的方法。 本应用注解描述了分析草甘膦及其主要代谢物氨甲基磷酸（AMPA）的便利方法。
柱后试剂 2：OPA，室温，流速为 0.4mL/min
荧光激发波长为 330 nm，发射波长为 460 nm
剃度表：
Time(min)
A (%)
B (%)
0
100
0
15
100
0
15.01
0
100
19
0
100
1Leabharlann Baidu.01
100
0
27
100
0
图2 1.草甘膦 2.5mg/L 2.AMPA 2.5mg/L
警告：此方法仅供检测参考，不得以任何商业形式出售！
制作标准曲线
草甘膦标准溶液的浓度分别为0.05、0.5、2、6、 10 mg/L五个点，标准曲线如图3
图3 曲线方程：Y=3.1942e-0.06X 相关系数：0.9996
样品测试
图 4 是一种除草剂中草甘膦的分离谱图。用去离子水稀释该除草剂 2500 倍，而后直接 进样 50uL，这种除草剂中草甘膦的含量在 0.8%。把该除草剂施加到乳草植物上，约 6 小时 后，7.0g 乳草植物样品用 200 mL 磷酸钾淋洗液匀浆。样品以 5000 rpm 离心 15 min，上清 液过 0.45um 膜，然后进样 50uL，分离谱图如图 5 所示。
图4 1. 草甘膦 3.0mg/L
图5 1.草甘膦 0.79mg/L 2.AMPA 0.08mg/L
方法的检测限
试剂水中草甘膦 50uL 进样，方法的检测限为 2.0ug/L，比美国 EPA 方法和国标方法规 定的 200uL 进样的检测限 6ug/L 和 25ug/L 都低。
结论
此方法线性好、检测限低，方便可靠，适用于草甘膦的水质检测。
本方法参考了美国EPA方法、GBT 5750.9-2006方法、天美、岛津、美瑞泰克等公司提 供的参考方法及本实验室全体工作人员的集体智慧编制而成。
色谱方法
柱后衍生与荧光检测器结合使得本方法具有很高的灵敏度和选择性。样品直接进样到柱 子后，草甘膦和 AMPA 用磷酸二氢钾缓冲液分离。分离后，分析物通过柱后衍生反应系统， 生成的反应产物用荧光检测。由于每个厂家的仪器的灵敏度各不相同，所以每种方法的进样 量也不相同，一般为 10-200ul.此方法建议进样定量 50uL，如图 1 所示，效果很好。