北极海泥来源抗菌活性真菌的筛选及菌株H5的初步研究
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亿 亏 岛 生 物 互程 ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ Ｉ ． ３ ０ Ｎ ｏ ． ５
Ｃｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ＆ Ｂｉ ｏ ｅ ｎ ｇｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ
田
北极 海 泥 来 源 抗 菌 活性 真 菌 的筛 选 及 菌 株 Ｈ５的 初 步 研 究
倪 孟祥 。 胡 颖
茵 株 Ｈ５的发 酵液 进 行 体 外 抗 茵 活 性 研 究 ； 将调 至不 同 Ｐ Ｈ 值 的 Ｈ５发 酵 液 用 不 同极 性 的 有 机 溶 剂 萃取 ， 研 究 该 活 性 物
质 的 酸碱 性 和极 性 ； 将 调 至不 同 ｐ Ｈ 值 的发 酵 液按 不 同 时 间 温 度 梯 度 进 行 加 热 处 理 ， 研 究该 活性物质 的稳定性 ； 同时用
（ 中国 药科 大学 生命 科 学与技 术 学院 ， 江苏 南京 ２ １ ０ ０ ０ ９ ）
摘
要： 从 北极 海 泥 中 筛选 抗 茵 活性 海 洋 真 菌 ， 鉴 定 了活 性 菌 株 并 对 活 性 最 高 的 菌株 Ｈ５的 代 谢 产 物 进 行 了初 步研
究 。通 过 形 态 学 观 察 、 基 因间隔区（ Ｉ Ｔ ｓ ） 序 列 分 析 对 活性 最 高 的 茵株 Ｈ５进 行 系 统 发 育 分 析 和 菌 种 鉴 定 ； 通 过 纸 片 法 对
大 孔树 脂 对 活性 物质 进 行 提 取 分 离 。结 果 表 明 ， 从 北 极 海 泥 中共 分 离得 到 １ ７株 真 菌 ， 其 中真 菌 Ｈ５ 、 Ｈ６的代 谢 产 物 具 有 较 好 的 抗 茵 活性 ； 茵种 鉴 定表 明 菌株 Ｈ５归属 于 烟 曲 霉属 （ Ａｓ ｐ ｅ ｒ ｇ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｆ ｕ ｍｉ ｇ ａ ｔ ｕ ｓ ） ， 该 菌 株 发 酵液 对 苹 兰 氏 阳性 茵 、 革兰
氏 阴性 茵、 真 茵及耐 药茵均有 不同程度的抑制活性 ， 活性产 物为极性较 大、 热稳 定性 较好 、 耐酸 不耐碱 的物质 ； 薄层 层析
显 示 活性 成 分在 ２ ５ ４ ｎ ． ｍ 紫外光下无吸收 。 关键词 ： 海 洋真 菌 ； 抗 茵代谢物 ； 筛选 ； 性质 ； 菌 种 鉴 定
１ 实验
１ ． １ 材料
沙 氏培养 基 ： 蛋 白胨 ｉ ０ ｇ ， 葡 萄糖 ４ ｇ ， 琼脂 ｌ ５ ～
２ ０ ｇ ， 蒸馏水 １ ０ ０ ０ Байду номын сангаасｍＬ。
改 良的马丁 培养 基 ： 葡萄糖 ２ Ｏ ｇ ， 蛋 白胨 ５ ｇ ， 酵母
粉 ２ ｇ ， Ｋ ２ ＨＰ Ｏ４ １ ｇ ， Ｍｇ Ｓ Ｏ４・７ Ｈ２ Ｏ ０ ． ５ ｇ ， 海 盐
２ Ｏ世 纪 ９ Ｏ年 代 才 进 入 较 快 速 的 发 展 阶 段 ］ 。 目前 ，
Ｄ ＮＡ Ｍａ ｒ ｋ ｅ ｒ 、 Ｔａ ｑ Ｍａ ｓ ｔ ｅ ｒ Ｍｉ ｘ ， 康为； 引物 由上海 生工 合成 ； 其 它试 剂均 为 国产分 析纯 。
１ ． ２ 培 养基
人 们 已经从海 洋真 菌 的发 酵 产 物 中 发 现 了 １ ０ ０ ０多种 新 的次 生代谢 产物 ， 这 些 代 谢 产 物 呈 现 出 良好 的抗 肿
１ ． ２ ． １ 分离 培养 基 马铃 薯葡 萄糖 琼脂 培养 基 ： 马 铃 薯 去皮 ， ２ ０ ０ ｇ切
瘤、 抗菌 、 抗病毒等生物活性 ， 成为当前海 洋药物研究 的热点 引。
作者从北极海泥 中分离真菌， 采用其发酵液进行 抗 菌 活性筛选 ， 并 鉴定其 种 类 、 研 究 其 活性代 谢产 物 的
１ ． １ ． １ 样 品来 源
北极 海泥来 自北极 黄 河站 附近 海域 潮 间带 。
１ ． １ ． ２ 指 示菌
２ ０ ｇ ， 琼脂 １ ５ ＂ － － ２ ０ ｇ ， 蒸馏水 ｉ ０ ０ ０ ｍ Ｌ 。 葡萄糖酵母膏蛋 白胨琼脂培养基 ： 葡萄糖 ｌ ｏ ｇ ， 蛋 白胨 ２ ｇ ， 酵母膏 ０ ． ５ ｇ ， 海盐 ２ ０ ｇ ， 琼脂 １ ５ ＂ － ２ ０ ｇ ， 蒸馏
中图分类号 ： Ｔ Ｑ ９ ２ ７ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ —５ ４ ２ ５ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ５ —０ ０ ６ １ 一Ｏ ４
从 海洋 微生 物寻 找新 药 已成 为开 发药 物 资源 的重 要策 略 之一［ １ ］ 。国 内外 对海 洋 细 菌 和 放 线 菌 的 活性 天然 产物 的研究 起 步较 早 ， 发 现 的新 化 合 物 数 量 也较
性质， 以期发 现具 有显著 抗 菌活 性 的菌株 ， 为 建设 海洋
成小块 ， 加水煮沸 ３ ０ ｍ ｉ ｎ ， ４ ～６ 层纱布过滤 ， 加２ ０ ｇ
葡萄糖 、 ２ ０ ｇ海 盐 、 １ ５ ￣２ ０ ｇ琼脂 ， 蒸 馏水 １ ０ ０ ０ ｍＬ 。
察 氏培养 基 ： Ｎａ ＮＯ ２ ｇ ， Ｋ ２ ＨＰ Ｏ ｉ ｇ ， Ｍｇ Ｓ Ｏ ・
７ Ｈ２ Ｏ ０ ． ５ ｇ ， ＫＣ １ ０ ． ５ ｇ ， Ｆ ｅ Ｓ Ｏ４・ ７ Ｈ２ Ｏ ０ ． ０ １ ｇ ， 蔗糖 ３ ０ ｇ ， 海盐 ２ ０ ｇ ， 琼脂 １ ５ ４２ ０ ｇ ， 蒸 馏水 １ ０ ０ ０ ｍＬ 。
真菌种 质 资源库 、 开发新 的微生 物药 物 奠定基 础 。
水 １ ０ ０ ０ ｍＬ。
ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｓ ｕ ｂ ｔ ｉ ｌ ｉ ｓ ） 、 白色 念珠 菌 （ Ｃ ａ ｎ ｄ ｉ ｄ ａ ａ ｌ ｂ ｉ ｃ ａ ｎ ｓ ） ， 均由
中国药科 大学 微生 物学 实验 室提 供 。
１ ． １ ． ３ 主要试 剂
多， 相 比之下 对 海 洋 真 菌 的 系 统 研 究 起 步 较 迟 ， 直 到
Ｃｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ＆ Ｂｉ ｏ ｅ ｎ ｇｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ
田
北极 海 泥 来 源 抗 菌 活性 真 菌 的筛 选 及 菌 株 Ｈ５的 初 步 研 究
倪 孟祥 。 胡 颖
茵 株 Ｈ５的发 酵液 进 行 体 外 抗 茵 活 性 研 究 ； 将调 至不 同 Ｐ Ｈ 值 的 Ｈ５发 酵 液 用 不 同极 性 的 有 机 溶 剂 萃取 ， 研 究 该 活 性 物
质 的 酸碱 性 和极 性 ； 将 调 至不 同 ｐ Ｈ 值 的发 酵 液按 不 同 时 间 温 度 梯 度 进 行 加 热 处 理 ， 研 究该 活性物质 的稳定性 ； 同时用
（ 中国 药科 大学 生命 科 学与技 术 学院 ， 江苏 南京 ２ １ ０ ０ ０ ９ ）
摘
要： 从 北极 海 泥 中 筛选 抗 茵 活性 海 洋 真 菌 ， 鉴 定 了活 性 菌 株 并 对 活 性 最 高 的 菌株 Ｈ５的 代 谢 产 物 进 行 了初 步研
究 。通 过 形 态 学 观 察 、 基 因间隔区（ Ｉ Ｔ ｓ ） 序 列 分 析 对 活性 最 高 的 茵株 Ｈ５进 行 系 统 发 育 分 析 和 菌 种 鉴 定 ； 通 过 纸 片 法 对
大 孔树 脂 对 活性 物质 进 行 提 取 分 离 。结 果 表 明 ， 从 北 极 海 泥 中共 分 离得 到 １ ７株 真 菌 ， 其 中真 菌 Ｈ５ 、 Ｈ６的代 谢 产 物 具 有 较 好 的 抗 茵 活性 ； 茵种 鉴 定表 明 菌株 Ｈ５归属 于 烟 曲 霉属 （ Ａｓ ｐ ｅ ｒ ｇ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｆ ｕ ｍｉ ｇ ａ ｔ ｕ ｓ ） ， 该 菌 株 发 酵液 对 苹 兰 氏 阳性 茵 、 革兰
氏 阴性 茵、 真 茵及耐 药茵均有 不同程度的抑制活性 ， 活性产 物为极性较 大、 热稳 定性 较好 、 耐酸 不耐碱 的物质 ； 薄层 层析
显 示 活性 成 分在 ２ ５ ４ ｎ ． ｍ 紫外光下无吸收 。 关键词 ： 海 洋真 菌 ； 抗 茵代谢物 ； 筛选 ； 性质 ； 菌 种 鉴 定
１ 实验
１ ． １ 材料
沙 氏培养 基 ： 蛋 白胨 ｉ ０ ｇ ， 葡 萄糖 ４ ｇ ， 琼脂 ｌ ５ ～
２ ０ ｇ ， 蒸馏水 １ ０ ０ ０ Байду номын сангаасｍＬ。
改 良的马丁 培养 基 ： 葡萄糖 ２ Ｏ ｇ ， 蛋 白胨 ５ ｇ ， 酵母
粉 ２ ｇ ， Ｋ ２ ＨＰ Ｏ４ １ ｇ ， Ｍｇ Ｓ Ｏ４・７ Ｈ２ Ｏ ０ ． ５ ｇ ， 海 盐
２ Ｏ世 纪 ９ Ｏ年 代 才 进 入 较 快 速 的 发 展 阶 段 ］ 。 目前 ，
Ｄ ＮＡ Ｍａ ｒ ｋ ｅ ｒ 、 Ｔａ ｑ Ｍａ ｓ ｔ ｅ ｒ Ｍｉ ｘ ， 康为； 引物 由上海 生工 合成 ； 其 它试 剂均 为 国产分 析纯 。
１ ． ２ 培 养基
人 们 已经从海 洋真 菌 的发 酵 产 物 中 发 现 了 １ ０ ０ ０多种 新 的次 生代谢 产物 ， 这 些 代 谢 产 物 呈 现 出 良好 的抗 肿
１ ． ２ ． １ 分离 培养 基 马铃 薯葡 萄糖 琼脂 培养 基 ： 马 铃 薯 去皮 ， ２ ０ ０ ｇ切
瘤、 抗菌 、 抗病毒等生物活性 ， 成为当前海 洋药物研究 的热点 引。
作者从北极海泥 中分离真菌， 采用其发酵液进行 抗 菌 活性筛选 ， 并 鉴定其 种 类 、 研 究 其 活性代 谢产 物 的
１ ． １ ． １ 样 品来 源
北极 海泥来 自北极 黄 河站 附近 海域 潮 间带 。
１ ． １ ． ２ 指 示菌
２ ０ ｇ ， 琼脂 １ ５ ＂ － － ２ ０ ｇ ， 蒸馏水 ｉ ０ ０ ０ ｍ Ｌ 。 葡萄糖酵母膏蛋 白胨琼脂培养基 ： 葡萄糖 ｌ ｏ ｇ ， 蛋 白胨 ２ ｇ ， 酵母膏 ０ ． ５ ｇ ， 海盐 ２ ０ ｇ ， 琼脂 １ ５ ＂ － ２ ０ ｇ ， 蒸馏
中图分类号 ： Ｔ Ｑ ９ ２ ７ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ —５ ４ ２ ５ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ５ —０ ０ ６ １ 一Ｏ ４
从 海洋 微生 物寻 找新 药 已成 为开 发药 物 资源 的重 要策 略 之一［ １ ］ 。国 内外 对海 洋 细 菌 和 放 线 菌 的 活性 天然 产物 的研究 起 步较 早 ， 发 现 的新 化 合 物 数 量 也较
性质， 以期发 现具 有显著 抗 菌活 性 的菌株 ， 为 建设 海洋
成小块 ， 加水煮沸 ３ ０ ｍ ｉ ｎ ， ４ ～６ 层纱布过滤 ， 加２ ０ ｇ
葡萄糖 、 ２ ０ ｇ海 盐 、 １ ５ ￣２ ０ ｇ琼脂 ， 蒸 馏水 １ ０ ０ ０ ｍＬ 。
察 氏培养 基 ： Ｎａ ＮＯ ２ ｇ ， Ｋ ２ ＨＰ Ｏ ｉ ｇ ， Ｍｇ Ｓ Ｏ ・
７ Ｈ２ Ｏ ０ ． ５ ｇ ， ＫＣ １ ０ ． ５ ｇ ， Ｆ ｅ Ｓ Ｏ４・ ７ Ｈ２ Ｏ ０ ． ０ １ ｇ ， 蔗糖 ３ ０ ｇ ， 海盐 ２ ０ ｇ ， 琼脂 １ ５ ４２ ０ ｇ ， 蒸 馏水 １ ０ ０ ０ ｍＬ 。
真菌种 质 资源库 、 开发新 的微生 物药 物 奠定基 础 。
水 １ ０ ０ ０ ｍＬ。
ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｓ ｕ ｂ ｔ ｉ ｌ ｉ ｓ ） 、 白色 念珠 菌 （ Ｃ ａ ｎ ｄ ｉ ｄ ａ ａ ｌ ｂ ｉ ｃ ａ ｎ ｓ ） ， 均由
中国药科 大学 微生 物学 实验 室提 供 。
１ ． １ ． ３ 主要试 剂
多， 相 比之下 对 海 洋 真 菌 的 系 统 研 究 起 步 较 迟 ， 直 到