腹主动脉瘤模型制备

1.知识背景：
腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)是一类死亡率极高的主动脉疾病,其确切发病机制尚未明确。

为探索AAA的发生机制和治疗方法,必须建立AAA的动物模型。

2.研究目的：
建立更为简便、稳定的AAA动物模型，为AAA疾病病机及治疗方法的研究提供与临床病例更为贴切的动物模型。

3.解剖学基础——腹主动脉及其分支：（参考人腹主动脉及其分支局部解剖）3.1脏支
不成对（奇数）脏支包括腹腔干、肠系膜上动脉和肠系膜下动脉。

成对脏支包括肾上腺中动脉、肾动脉和睾丸（卵巢）动脉。

（一）肾上腺中动脉middlesuprarenal artery平第1腰椎高度发自腹主动脉侧壁，在胰后方行向外上至肾上腺。

（二）肾动脉renal artery在平第2腰椎高度发自腹主动脉，横行向外，在肾静脉后方经肾门入肾，在进入肾窦前分为前、后两干。

右肾动脉从下腔静脉、胰头和12指肠降部的后方横过；左肾动脉则经胰体、脾静脉和肠系膜下静脉的后方。

肾动脉在入肾前发出肾上腺下动脉。

有时一侧可有两条或两条以上的肾动脉，不经肾门直接空入肾的上极或下极，叫做肾副动脉。

（三）睾丸（卵巢）动脉testicular(ovarian) artery在第二腰椎高度起自腹主动脉前壁，细而长，沿腰大肌前面行向外下，依次跨过输尿管和髂外动、静脉的前方，睾丸动脉至腹股沟管腹环处和输精管伴行入腹股沟管，参加精索的构成，并迂曲下行至睾丸后缘上端处，分支至睾丸和附睾。

在精索内睾丸动脉前方有蔓状静脉丛，后方为输精管。

行程中还发出细支至输尿管和提睾肌。

卵巢动脉在小骨盆上缘进入卵巢悬韧带内，继续下行于子宫阔韧带内，分支至卵巢、输卵管和输尿管。

3.2壁支
（一）膈下动脉inferior phrenic artery在主动脉裂孔稍下起于腹主动脉，右侧者在下腔静脉后方，左侧者位于食管末段的后方，至中心腱处分为前、后支，分布于膈。

膈下动脉还发出肾上腺上动脉
（二）腰动脉lumbar arteries共4对，分别在平第1-4腰椎体高度起自腹主动脉后壁，向外侧横过腰椎体的前面和侧面，经腰大肌与腰方肌背面，进入腹外侧肌群内。

沿途分支供给腰背部、腹部的肌肉和皮肤，以及椎管、脊髓下段和被膜等。

4.实验器材：
剪毛剪（弯剪刀），手术刀，手术剪，止血钳，辅料镊，组织镊，眼科剪，眼科镊，显微手术镊，动脉夹，电凝器，玻璃分针，3-0号手术缝合线，2.5%碘酒棉球，75%酒精棉球，干棉球，无菌纱布块，无菌棉签，10%水合氯醛，生理盐水，弯盘，无菌手术洞巾，透明胶带，PE-10导管，（2-4倍眼镜式放大镜）等等。

5.实验准备：
实验前将手术器械和玻璃分针用棉布包裹好，干棉球以牛皮纸袋包装，纱布块用铝制饭盒盛放。

以上物品均在121℃,高压灭菌30min，然后移至烤箱中，60℃烘烤至干燥。

实验动物在手术前24小时应放置在无垫料的铁丝笼中禁食但不禁水饲养，手术前4小时禁水。

6.实验动物的麻醉：
麻醉药选用10%水合氯醛，剂量为0.3ml/100g体重，给药途径为腹腔内注射，待大鼠给予刺激后无体动，眼睑反射消失等体征出现（手术麻醉期）即可进行手术。

7.实验动物的固定：
将大鼠仰卧位放置于手术台上，四肢用狭窄的透明胶带捆绑并固定于玻璃手术台上。

8.备皮：
用弯剪刀将大鼠剑突以下腹部被毛去除，尽量去除干净。

9.手术术式：
腹部常规碘酒棉球消毒，然后以75%酒精棉球脱碘。

用手术刀在腹部正中切口，长约3cm，切开皮肤后，沿腹白线切开肌层（若有出血，用电凝器止血），暴露内脏，用生理盐水湿润的纱布块填塞的方法，将肠管推向右侧腹腔，在腹主动脉前方切开后腹膜，用两根棉签分别向两侧推开腹主动脉前壁及侧壁脂肪组
织，显露腹主动脉。

此时要由助手协助佩戴眼镜式放大镜，并调节焦距，使视野清晰。

以显微镊和玻璃分针分离腹主动脉与下腔静脉，游离出肾动脉水平以下腹主动脉1cm（以游标卡尺测量此段腹主动脉直径并记录），用6-0号丝线活结结扎由此段腹主动脉发出的1-2对腰动脉及肠系膜下动脉，以动脉夹在肾动脉下阻断腹主动脉。

分离左侧髂总动脉约1cm，并将远端用3-0号丝线结扎，近端插入PE-10导管，使其尖端达到肾下腹主动脉，距离动脉夹阻断处0.3-0.5cm，在近腹主动脉分叉处以0号丝线活结结扎腹主动脉，固定PE导管，以微量注射泵加压灌注猪胰弹力蛋白酶（浓度25U/ml，速度4ml/h，时间30min）。

灌注结束后，回吸胰弹力蛋白酶，松开腹主动脉远端近分叉处结扎线的活结，拔除PE导管，结扎左侧髂总动脉，取下腹主动脉近端动脉夹，松开腰动脉及肠系膜下动脉处结扎线的活结，恢复腹主动脉及其分支的血流。

逐层关腹缝合。

皮层缝合后再次以75%酒精棉球消毒创口，并经腹腔注射青霉素20万单位。

10.模型评价：
术后两周，进行模型成功与否的评估。

每组随机抽取一只大鼠，首先进行肉眼观察，观察腹主动脉的扩张情况，并以游标卡尺测量腹主动脉直径的最大值，计算扩张率，扩张率一般在150%-200%。

然后截取灌注段腹主动脉进行病理切片观察，病理改变为腹主动脉明显粘连，局部变硬，且明显扩张呈瘤样改变。

腹主动脉中膜弹力组织严重受损，外膜炎性细胞浸润明显。

出现上述表现和形态学变化的大鼠为AAA模型复制成功大鼠。

11.关键技术及应注意的问题：
11.1肌层的切开，应沿腹白线切开，否则止血难度会增大。

11.2用纱布填塞的方法将肠管推向右侧腹腔时，要事先将纱布用生理盐水润湿，否则大鼠术后肠管非常易发生粘连，甚至梗阻。

11.3用棉签分离腹主动脉前壁及侧壁脂肪组织时，用力要轻，并且注意分布在脂肪组织中的细小血管分支，遇到细小分支应用电凝器熔断，不要轻易拉断这些小分支，以免造成不必要的麻烦。

11.4腹主动脉灌注段的封闭，尽量使不同的大鼠腹主动脉封闭长度相同（1cm），这样才能保证灌注程度是相同的。

11.5腰动脉和肠系膜下动脉血流的阻断，阻断这两条小动脉时，尽量不要熔断
或结扎死，应以活结结扎，术后再重新打开恢复血流，以免造成大鼠双下肢瘫痪等手术后遗症。

11.6根据文献报道加之我们的实践，该模型的成功率与实验动物体内的雌激素水平关系较为密切，雌激素对腹主动脉瘤的成因具有一定的对抗作用。

因此，雄性大鼠较雌性大鼠更易复制AAA模型；卵巢摘除后的雌性大鼠AAA成模率会大大提高。