灭菌方法和生物指示剂(2)PPT讲稿
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
灭菌方法和生物指示剂(2)课件
灭菌法和生物指示剂
灭菌法 系指用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物
杀灭或除去，从而使物品残存活微生物的概率下 降至预期的无菌保证水平的方法。
生物指示剂 系一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设备
的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的 监控等。用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细 菌的孢子。
NCIMB 8157、ATCC 7953 )
生物指示剂的选择
辐射灭菌法
应用γ射线、β射线杀灭细菌的方法，又称电离 辐射，前者由钴-60或铯-137发出，穿透力强；后者 由电子加速器产生，带电荷，穿透力弱，灭菌效果 差。
➢生孢梭菌孢子(Spores of Clostridium sporogenes，
NCTC 8594、NCIMB 8053、ATCC 7955 ） D值为0.4～0.8min
生物指示剂的选择
干热灭菌法
指物品于干热灭菌柜、隧道灭菌器等设 备中，利用干热空气达到杀灭微生物或消除 热原物质的方法。
• 保证灭菌后的产品其 SAL≤10-6 • 干热过度杀灭后产品的 SAL应≤10-12
液体状态更具杀孢子能力的优点，经生成 游离的-OH，用于进攻细胞成分，包括脂 类、蛋白质和DNA，达到完全灭菌的要求 的一种技术。
应用：
隔离器的验证 新设备或灌装线的调整和认证 大型或组装设备的评估 未知气体分布动力学研究 含有多个装载配置的设备认证 设备中最难灭菌位置的日常检测
生物指示剂：嗜热脂肪芽胞杆菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus，NCTC 10007、
NCTC 8594 NCIMB 8053 ATCC 7955
NCIMB 8058 ATCC 9372
短小芽孢杆菌 Bacillus pumilus
NCTC 10327 NCIMB 10692 ATCC 27142
枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis
百度文库
NCTC 10073 ATCC 9372
生物指示剂的形式
一定数量的孢子附着在惰性载体上， 如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等
孢子悬浮液密封于安瓿中
无菌保证水平
无菌保证水平 一批物品的无菌特性只能相对地通过物品 中活微生物的概率低至某个可接受水平来 表述，即SAL（sterility assurance l我ev国e及l）欧。美药典都把SAL不得大于百万分之一
否经过灭菌处理，物品包内中心部位的化学指示剂才可作 为物品是否达到灭菌的参考标志。
• 生物指示剂验证：将已知其耐热性的生物指示剂直接接种
在产品溶液或相似溶液中进行验证, 是评判灭菌工艺杀灭 效果最直观有效的方法, 也是灭菌工艺验证必不可少的试 验。
常用的灭菌方法
➢湿热灭菌法 ➢干热灭菌法 ➢气体灭菌法 ➢辐射灭菌法 ➢过滤除菌法
作为最终灭菌产品无菌保证的要求，即 SAL≤10－6
灭菌工艺验证
• 验证一个灭菌工艺系统能否使产品灭菌后达到无菌要求,
通常认为灭菌后微生物残存概率小于1×10-6。
• 物理性验证：通过得到的热分布与热穿透数据, 来估测一
个灭菌程序对微生物的致死性。
• 化学指示剂验证：物品包外用化学指示剂用于验证物品是
不同灭菌方式不同的菌种种类的选择
灭菌方法 湿热灭菌法
干热灭菌法 辐射灭菌法 气体灭菌法
过滤除菌法
生物指示剂
嗜热脂肪芽孢杆菌 Bacillus stearothermophilus
生孢梭菌孢子 Clostridium sporogenes
枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis
保藏号
NCTC 10007 NCIMB 8157 ATCC 7953
• 须保证物品灭菌后的SAL≤10-6 • 对热稳定的物品，可采用过度杀灭法，
其SAL应≤10-12
适用范围
药品、容器、培养基、无菌衣、胶塞以 及其它遇高温和潮湿不发生变化或损坏的 物品
常用的生物指示剂
➢嗜热脂肪芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus
stearothermophilus，NCTC 10 007、NCIMB 8157、 ATCC 7953 ) D值为1.5～3.0min
体药料及医疗器械类固体器具等不能采 用高温灭菌的物品的灭菌
• 含氯的物品及能吸附环氧乙烷的物品则
不宜使用
常用生物指示剂
枯草芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus subtilis，
NCTC 10073、NCIMB 8058、ATCC 9372 ) D值大于2.5min
气态过氧化氢法
• 是利用过氧化氢在低浓度的气体状态下比
嗜热脂肪芽孢杆菌 Bacillus stearothermophilus
NCTC 10007 NCIMB 8157 ATCC 7953 12980
缺陷假单胞菌
ATCC 19146
Pseudomonas diminuta
黏质沙雷菌
ATCC 14756
D值
备注
1.5-3.0min
0.4-0.8min
>1.5min 3kGy >2.5min
去热原验证时加大肠杆 菌内毒素(Escherichia coli endoxin)
短小芽孢杆菌孢子可用 于监控灭菌过程，但不 能用于灭菌辐射剂量的 建立
环氧乙烷灭菌
气态过氧化氢灭菌
用于滤膜孔径为0.22μm 的滤器
用于滤膜孔径为0.45μm
湿热灭菌法
指将物品置于灭菌柜内利用高压饱和 蒸汽、过热水喷淋等手段使微生物菌体 中的蛋白质、核酸发生变性而杀灭微生 物的方法。
适用范围
耐高温但不宜用湿热灭菌法灭菌的物 品的灭菌，如玻璃器具、金属制容器、 纤维制品、固体试药、液状石蜡等
常用的生物指示剂
枯草芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus subtilis，
NCIMB 8058、ATCC 9372 ) D值大于1.5min
生物指示剂的选择
气体灭菌法
指用化学消毒剂形成的气体杀灭微 生物的方法。在充有灭菌气体的高压腔 室内进行。
常用气体：环氧乙烷、气态过氧化氢、甲醛等
环氧乙烷法
灭菌原理：强氧化，其分子作用于菌体后， 能与菌体蛋白、核酸和酶中的—COOH、— NH2、—SH、—OH等基团起反应，而使菌 体死亡。
具有杀菌谱广，灭菌能力强的 特点，对微生物的繁殖体、芽 孢有较强的杀灭效果。
适用范围
• 塑料包装的原料粉末、散剂、颗粒等固
灭菌法和生物指示剂
灭菌法 系指用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物
杀灭或除去，从而使物品残存活微生物的概率下 降至预期的无菌保证水平的方法。
生物指示剂 系一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设备
的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的 监控等。用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细 菌的孢子。
NCIMB 8157、ATCC 7953 )
生物指示剂的选择
辐射灭菌法
应用γ射线、β射线杀灭细菌的方法，又称电离 辐射，前者由钴-60或铯-137发出，穿透力强；后者 由电子加速器产生，带电荷，穿透力弱，灭菌效果 差。
➢生孢梭菌孢子(Spores of Clostridium sporogenes，
NCTC 8594、NCIMB 8053、ATCC 7955 ） D值为0.4～0.8min
生物指示剂的选择
干热灭菌法
指物品于干热灭菌柜、隧道灭菌器等设 备中，利用干热空气达到杀灭微生物或消除 热原物质的方法。
• 保证灭菌后的产品其 SAL≤10-6 • 干热过度杀灭后产品的 SAL应≤10-12
液体状态更具杀孢子能力的优点，经生成 游离的-OH，用于进攻细胞成分，包括脂 类、蛋白质和DNA，达到完全灭菌的要求 的一种技术。
应用：
隔离器的验证 新设备或灌装线的调整和认证 大型或组装设备的评估 未知气体分布动力学研究 含有多个装载配置的设备认证 设备中最难灭菌位置的日常检测
生物指示剂：嗜热脂肪芽胞杆菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus，NCTC 10007、
NCTC 8594 NCIMB 8053 ATCC 7955
NCIMB 8058 ATCC 9372
短小芽孢杆菌 Bacillus pumilus
NCTC 10327 NCIMB 10692 ATCC 27142
枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis
百度文库
NCTC 10073 ATCC 9372
生物指示剂的形式
一定数量的孢子附着在惰性载体上， 如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等
孢子悬浮液密封于安瓿中
无菌保证水平
无菌保证水平 一批物品的无菌特性只能相对地通过物品 中活微生物的概率低至某个可接受水平来 表述，即SAL（sterility assurance l我ev国e及l）欧。美药典都把SAL不得大于百万分之一
否经过灭菌处理，物品包内中心部位的化学指示剂才可作 为物品是否达到灭菌的参考标志。
• 生物指示剂验证：将已知其耐热性的生物指示剂直接接种
在产品溶液或相似溶液中进行验证, 是评判灭菌工艺杀灭 效果最直观有效的方法, 也是灭菌工艺验证必不可少的试 验。
常用的灭菌方法
➢湿热灭菌法 ➢干热灭菌法 ➢气体灭菌法 ➢辐射灭菌法 ➢过滤除菌法
作为最终灭菌产品无菌保证的要求，即 SAL≤10－6
灭菌工艺验证
• 验证一个灭菌工艺系统能否使产品灭菌后达到无菌要求,
通常认为灭菌后微生物残存概率小于1×10-6。
• 物理性验证：通过得到的热分布与热穿透数据, 来估测一
个灭菌程序对微生物的致死性。
• 化学指示剂验证：物品包外用化学指示剂用于验证物品是
不同灭菌方式不同的菌种种类的选择
灭菌方法 湿热灭菌法
干热灭菌法 辐射灭菌法 气体灭菌法
过滤除菌法
生物指示剂
嗜热脂肪芽孢杆菌 Bacillus stearothermophilus
生孢梭菌孢子 Clostridium sporogenes
枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis
保藏号
NCTC 10007 NCIMB 8157 ATCC 7953
• 须保证物品灭菌后的SAL≤10-6 • 对热稳定的物品，可采用过度杀灭法，
其SAL应≤10-12
适用范围
药品、容器、培养基、无菌衣、胶塞以 及其它遇高温和潮湿不发生变化或损坏的 物品
常用的生物指示剂
➢嗜热脂肪芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus
stearothermophilus，NCTC 10 007、NCIMB 8157、 ATCC 7953 ) D值为1.5～3.0min
体药料及医疗器械类固体器具等不能采 用高温灭菌的物品的灭菌
• 含氯的物品及能吸附环氧乙烷的物品则
不宜使用
常用生物指示剂
枯草芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus subtilis，
NCTC 10073、NCIMB 8058、ATCC 9372 ) D值大于2.5min
气态过氧化氢法
• 是利用过氧化氢在低浓度的气体状态下比
嗜热脂肪芽孢杆菌 Bacillus stearothermophilus
NCTC 10007 NCIMB 8157 ATCC 7953 12980
缺陷假单胞菌
ATCC 19146
Pseudomonas diminuta
黏质沙雷菌
ATCC 14756
D值
备注
1.5-3.0min
0.4-0.8min
>1.5min 3kGy >2.5min
去热原验证时加大肠杆 菌内毒素(Escherichia coli endoxin)
短小芽孢杆菌孢子可用 于监控灭菌过程，但不 能用于灭菌辐射剂量的 建立
环氧乙烷灭菌
气态过氧化氢灭菌
用于滤膜孔径为0.22μm 的滤器
用于滤膜孔径为0.45μm
湿热灭菌法
指将物品置于灭菌柜内利用高压饱和 蒸汽、过热水喷淋等手段使微生物菌体 中的蛋白质、核酸发生变性而杀灭微生 物的方法。
适用范围
耐高温但不宜用湿热灭菌法灭菌的物 品的灭菌，如玻璃器具、金属制容器、 纤维制品、固体试药、液状石蜡等
常用的生物指示剂
枯草芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus subtilis，
NCIMB 8058、ATCC 9372 ) D值大于1.5min
生物指示剂的选择
气体灭菌法
指用化学消毒剂形成的气体杀灭微 生物的方法。在充有灭菌气体的高压腔 室内进行。
常用气体：环氧乙烷、气态过氧化氢、甲醛等
环氧乙烷法
灭菌原理：强氧化，其分子作用于菌体后， 能与菌体蛋白、核酸和酶中的—COOH、— NH2、—SH、—OH等基团起反应，而使菌 体死亡。
具有杀菌谱广，灭菌能力强的 特点，对微生物的繁殖体、芽 孢有较强的杀灭效果。
适用范围
• 塑料包装的原料粉末、散剂、颗粒等固