高效液相色谱法测定乳制品中抗生素残留量

高效液相色谱法测定乳制品中抗生素残留量

牛奶中抗生素残留问题日益受到国际社会的重视。国际上一般规定，青霉素类药物残留的限量为0.4-1.0ppm,青霉素G在牛乳中的允许残留量为0.01IU/ml。我国过去对牛奶中抗生素残留卫生指标无明文规定，直到2001年10月，农业部发布实施了《无公害食品生鲜牛乳行业标准》，对新鲜牛乳的卫生指标明确了“抗生素不得检出”。现有关于牛奶中抗生素的检测方法为国际通用TTC法，即《中华人民共和国国家标准•食品卫生微生物学检验•鲜乳中抗生素残留量检验》(GB/T4789127-2003)。但对这一行业标准，我国目前并未能严格执行，致使我国牛奶及奶制品中抗生素残留问题一直未能得到解决，以至引起了人们对牛奶安全问题的担忧，并成为越来越受关注的热点。

本方法应用国产液相色谱仪。通过固相萃取（SPE），液-液萃取等提取方法，对鲜奶、奶粉样品进行快速有效的前处理，分离出多种抗生素残留；并采用高效液相色谱法分离各类抗生素，采用紫外吸光光度检测方法对各类抗生素进行定量分析；建立可靠的检测鲜奶、奶粉中抗生素残留含量的高校液相色谱分析方法。本方法采用了250mm*4.6mm（300A）的ODS-C18反相色谱柱，通过液相紫外检测器检测定量。对选取乳制品中常用的6种头孢素类、四环素类等抗生素(头孢拉定（CD）、头孢羟氨苄（CDX）、金霉素（CTC）、土霉素（OTC）、四环素（TC）、多西环素（DC）)进行了分析。通过标准加入法测定了其回收率，得到每种抗生素的测定范围与检测限。根据抗生素测定的检测限要求，确定了样品的进样量为5mL。测定了方法的工作曲线及其测定浓度范围为102-3、检测限达到0.05－0.1mg/L，样品回收率在86-120%，标准偏差约5%。

表1 为通过标准样品配制的6种抗生素标准品的溶液测定的工作曲线的线性回归结果。其中，每个数据点重复测定3-4次，取平均值。

抗生素

标准曲线方程回归系数

（R²）

线性范围

（mg/L）

LOD（mg／L，S

／N＝3）

土霉素（OTC）y = 402.72x - 34.427 0.99984 0.1-10 0.1 金霉素（CTC）y = 387.35x - 78.535 0.99901 0.1-10 0.1 四环素（TC）y = 428.18x - 19.909 0.99992 0.1-10 0.1 多西环素（DC）y = 42.953x - 1.4839 0.99983 0.1-10 0.1 头孢拉定（CD）y = 54.487x + 21.222 0.99704 0.1-10 0.05 头孢羟氨苄（CDX）y = 42.031x + 20.238 0.99299 0.1-10 0.05

参考文献

(1) Aiello, S. E. The Merck Veterinary Manual, 8th ed.; Merck & Co., Inc.: Whitehouse Station, NJ, 1998; p 1745.

(2) Schwarz, S.; Noble, W. C. Vet. Dermatol. 1999, 10, 163-176.

(3) Council Regulation (EEC) No. 2377/90 of 26 June 1990, OJ No L 224, 18.08.1990.

(4) Fletouris, D. J.; Psomas, J. E.; Mantis, A. J. J. Agric. Food Chem. 1992, 40, 617-621.

(5) Schwartz, M. J. Pharm. Sci. 1965, 54 (3), 472-473.

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