人工辅助激活卵母细胞同周期对照研究要点

组２ＰＮ受精率７９．５９％（３９／４９）明显高于对照组５７．１４％（２８／４９），差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；符
合纳入标准３（圆头精子症）患者ＡＯＡ组２ＰＮ受精率７５％（６／８）明显高于对照组０（０／５），差异有统 计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论使用钙离子载体Ａ２３１８７对卵母细胞进行人工辅助激活有助于提高 ＩＣＳＩ后正常受精率，但对于早期胚胎发育影响及子代安全性还有待于进一步研究。
ｐｅｒｉｏｄ ｉｎｔｏ
ｏｆ
ｔｗｏ
ｔｈｉｒｄ
ｄａｙｓ
ｉｎ
ＩＣＳＩ；（３）ｐａｔｉｅｎｔｓ
ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ
ｗｉｔｈ
ｏｏｅｙｔｅ
ｇｌｏｂｏｚｏｏｓｐｅｒｍｉａ．Ｔｈｅ
ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ
ｇｒｏｕｐｓ，ｃｏｎｔｒｏｌ
ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ（ＡＯＡ）ｇｒｏｕｐ．Ｉｎ
ｏｕｔｃｏｍｅ
胞完全按照常规ＩＣＳＩ操作进行处理，ＡＯＡ组卵母细胞在进行ＩＣＳＩ后使用钙离子载体Ａ２３ １８７进行激
活。对比两组正常受精率、卵裂率、妊娠及出生结局。结果ＡＯＡ组２ＰＮ受精率６５．９３％（６０／９１）明 显高于对照组４６．６７％（４１／８９），差异有统计学意义，Ｐ＜０．０５；符合纳入标准１（２ＰＮ≤３０％）患者ＡＯＡ
ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｅｇｇｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｏｕｔｉｎｅ ＩＣＳＩ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｔｈｅ
ＡＯＡ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｂｙ Ａ２３ １ ８７ ａｆｔｅｒ ＩＣＳＩ．Ｎｏｒｍａｌ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ，ｃｌｅａｖａｇｅ ｒａｔｅ，ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ａｎｄ ｂｉｒｔｈ ｏｆ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ２ＰＮ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ＡＯＡ ｇｒｏｕｐ ６５．９３％（６０／
ｃｒｉｔｅｒｉａ ｏｆ １ ｂｅ ｈｅｌｐｆｕｌ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ＩＣＳＩ．Ｂｕｔ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅａｒｌｙ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｎｅｅｄ ｔｏ ｂｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｉｅｄ．
ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
Ｃａｌｃｉｕｍ ｉｏｎｏｐｈｏｒｅ；
Ａｓｓｉｓｔｅｄ ｏｏｃｙｔｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ；
ＩＣＳＩ；
Ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｆａｉｌｕｒｅ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．０３７６－２４９１．２０１６．４３．０１０
作者单位：４５００５２郑州大学第三附属医院生殖医学中心（郝大勇、张晓、申春燕、杨悦、武文斌、刘艳丽、刘景、张 建瑞、王兴玲）；郑州大学第五附属医院微生物室（张锐） 通信作者：王兴玲，Ｅｍａｉｌ：ｗａｎｇｘｌ２０８＠１２６．ｃｏｍ
万方数据
在较早期的研究中发现，卵胞质内单精子显微 注射（ＩＣＳＩ）受精失败与精子缺陷导致卵母细胞激活 失败有关，这些精子大多数被确诊为圆头精子¨引， 使用钙离子载体人工激活卵母细胞治疗人圆头精子 症获得成功口圳。即使注射正常形态的精子，ＩＣＳＩ 也不能保证成功受精，有研究表明钙离子载体的治 疗同样可以改善受精率∞引。一些前瞻性研究＂１表 明，ＩＣＳＩ受精率＜５０％，使用钙离子载体人工激活卵 母细胞可能会改善预后。Ｏｚｉｌ等哺圳发现并推测，一 些不育患者表现出胚胎发育停滞，胚胎质量低下，甚 至复发性着床失败也可能从某种形式的人工卵母细 胞激活中获益。一项最新关于对钙离子载体是否可
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】
ｕｓｅ
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
ａｎｄ ｔｈｅ
ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｓｓｉｓｔｅｄ
ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｆｒｏｍ
Ｊａｎｕａｒｙ ２０１５
ｔｏ
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ
ｉｎ
ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ
ｃｅｎｔｅｒ
ｏｆ ｔｈｅ
Ｔｈｉｒｄ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｗｅｒｅ
ｅｎｒｏｌｌｅｄ．Ｔｈｅ ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ａｐｐｒｏｖｅｄ ｂｙ ｔｈｅ
ｅｔｈｉｃｓ ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｉｒｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｔｈｅ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ
ｓｕｂｊｅｃｔｓ
标准操作流程（ＳＯＰ）处理。ＡＯＡ组ＩＣＳＩ后卵母细
胞放置在含有１０ Ｉ山ｍｏｌ／Ｌ的Ａ２３１８７（ＳＩＧＭＡ）的Ｇ－１
ｐｌｕｓ（Ｖｉｔｒｏｌｉｆｅ）微滴中（３０¨１）１５ ｍｉｎ，然后转移至
３７
ｏＣ，６％ＣＯ：培养箱培养之前，至少要在Ｇ．１
ｐｌｕｓ
中洗涤３次。７ Ｊ。Ａ２３１８７使用液是用ＤＭＳＯ （ＳＩＧＭＡ）和Ａ２３１８７（Ｃ９２７５，ＳＩＧＭＡ）预先配比好 的。ＩＣＳＩ后胚胎培养按照中心的ＳＯＰ进行，根据每 例患者的情况及需求不同进行Ｄ３移植、冷冻或囊 胚期序贯培养。观察ＩＣＳＩ后正常受精、卵裂情况， 随访妊娠结局及出生结局。 ＭⅡ期为处在减数分裂Ⅱ期的卵母细胞。正常 受精率（２ＰＮ％）为正常受精卵数／ＩＣＳＩ卵数；Ｄ２ ４细胞卵裂率为第２天４细胞卵裂数／所有正常受 精卵数；Ｄ３ ８细胞卵裂率为第３天８细胞卵裂数／ 所有正常受精卵数；优质胚胎率为第３天优质胚胎 数／所有正常受精卵数。囊胚是２ＰＮ来源胚胎继续 发育至第５、６天，且具有囊胚腔，可利用囊胚标准参 考¨３｜。移植后６周Ｂ超下见孕囊为临床妊娠，移植 后８周Ｂ超下检查胎心搏动。 ３．统计学方法：采用ＳＰＳＳ １７．０软件处理数据。 正常受精率、卵裂率（Ｄ２ ４细胞和Ｄ３ ８细胞）和优 质胚胎率差异统计学意义采用ｘ２检验，检验水准
ｉｎ
９１）ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ
ｗｈｏ ｍｅｔ ｔｈｅ ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ
４６．６７％（４１／８９）（Ｐ＜０．０５）．Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｉｎ ２ＰＮ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ｃａｔｅｇｏｒｉｅｓ（２ＰＮ≤３０％），ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｔｈｅ ＡＯＡ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｈｉｇｈｅｒ（Ｐ＜０．０５）ｉｎ ｇｒｏｕｐ［７９．５９％（３９／４９）］ｃｏｍｐａｒｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ［５７．１４％（２８／４９）］．Ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｏ ｍｅｔ ｔｈｅ ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｏｆ ３ ｃａｔｅｇｏｒｉｅｓ（ｇｌｏｂｏｚｏｏｓｐｅｒｍｉａ），ｔｈｅ ２ＰＮ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ（Ｐ＜０．０５）ｉｎ ｔｈｅ ＡＯＡ ｇｒｏｕｐ［７５％（６／８）］ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｃａｌｃｉｕｍ ｉｏｎｏｐｈｏｒｅ Ａ２３ １ ８７ ａｓｓｉｓｔｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｃｏｕｌｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ［０％（０／５）］．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ
２ＰＮ≤３０％
ＡＯＡ组与对照组ＩＣＳＩ后受精、胚胎形态学评分 及妊娠情况对比见表２。８例患者进行了Ｄ３新鲜 胚胎移植，临床妊娠比例为４／８，其中全部移植ＡＯＡ 组胚胎３例，１例为每组各移植一枚胚胎。４例患者 已经成功分娩７名健康子代，子代出生情况见表３。
Ｃｈｕｎｙａｎ，ｙ０昭Ｙｕｅ，Ｗｕ Ｗｅｎｂｉｎ，Ｌｉｕ Ｙａｎｌｉ，Ｌｉｕ五昭，Ｚｈａｎｇ Ｊｉａｎｒｕｉ，Ｗａｎｇ Ｘｉｎｇｌｉｎｇ．‘Ｃｅｎｔｅｒ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ，Ｔｈｉｒｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｙ Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， ａｕｔｈｏｒ：Ｗａｎｇ
生堡医堂苤查！Ｑ！！生！！旦丝旦箜堑鲞筮塑塑盟！！！丛型』ｇ！ｉ塑：堕！！！坐！！！丝：垫！！：ｙ！！：堑：盟！：箜
・３４８９・
．临床研究
人工辅助激活卵母细胞同周期对照研究
郝大勇 张锐张晓
申春燕杨悦武文斌刘艳丽
刘景
张建瑞
王兴玲
【摘要】
目的观察使用钙离子载体Ａ２３１８７对同周期同胞卵子进行人工辅助激活，对比正常
Ｏｔ＝０．０５。
以改善胚胎发育的前瞻陛研究中显示一Ｊ，使用钙离
子载体激活的胚胎种植率明显高于对照组。既往所 有的研究中对照组并不是基于同周期卵母细胞，这 也恰恰给了我们一个启示，进行同周期卵母细胞对 照研究，观察钙离子载体辅助激活的效果。同周期 优势在于可以避免由于个体差异及不同周期女性内 分泌等因素对受精及胚胎结局的影响。
对象与方法
１．对象：２０１５年１至１２月在郑州大学第三附 属医院生殖医学中心行ＩＣＳＩ助孕周期，经过郑州大 学第三医院伦理委员会批准纳入研究的病例标准如 下：距离前次ＩＣＳＩ周期间隔时间不超过１年，且本 周期获得成熟卵数≥８枚，并符合以下至少１项标 准：前次ＩＣＳＩ周期正常受精率≤３０％；前次ＩＣＳＩ周 期第３天无优质胚胎；诊断为圆头精子症患者。被 纳入的病例要求患者知情，并完全同意。以上纳入 研究标准参考：严重男性因素（圆头精子症）患者和 ＩＣＳＩ正常受精率＜３０％，都是常规使用钙离子载体 的指征Ｍ，１０１；在ＩＣＳＩ周期中使用人工卵母细胞激活 对前次周期受精率０或１％一２９％患者可能在治疗 周期中产生有利的影响Ｍ１；前一周期没有可利用胚 胎移植或Ｄ５囊胚出现率低（≤１５％）＂Ｊ，但是必须 要考虑到中国患者的需求，所以多数还是以Ｄ３胚 胎为主要时间节点，优质胚胎定义为：８—１０细胞， 均一度一致，并且碎片不超过２０％；在既往的研究 中显示，钙离子载体已经成功地应用在圆头精子症 病例［３圳，或者是一些其他类型的严重精子畸形
ｍｕｓｔ ｍｅｔ ａｔ
ｌｅａｓｔ
ｏｎｅ
ｃｒｉｔｅｒｉａ：（１）ｔｈｅ
ｑｕａｌｉｔｙ
ｏｖｕｍ ｗｅｒｅ
ｎｏｒｍａｌ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ３０％ＩＣＳＩ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｖｉｏｕｓ ＩＣＳＩ ｃｙｃｌｅ；
ｉｎ
ａ
（２）ＮＯ
ｇｏｏｄ
ｅｍｂｒｙｏｓ
ｐｒｅｖｉｏｕｓ
结
果
ＩＣＳＩ治疗的１２周期患者符合纳入标准见表ｌ， 其中Ｇ／Ｉ为同一患者２次不同周期。
表１符合纳入标准的患者
患者序号
Ａ Ｂ ｃ Ｄ ＥBiblioteka 纳入标准２ＰＮ≤３０％
Ｄ３无优质胚胎 圆头精子≥９８％ Ｄ３无优质胚胎
２ＰＮ≤３０％ ２ＰＮ≤３０％
Ｄ３无优质胚胎
Ｆ∥Ｈ
Ｊ
Ｋ Ｌ
２ＰＮ≤３０％ ２ＰＮ≤３０％
Ｄ３无优质胚胎
受精率及胚胎结局。方法２０１５年１至１２月在郑州大学第三附属医院生殖医学中心行卵胞质内单 精子显微注射（ＩＣＳＩ）助孕周期，经过郑州大学第三附属医院伦理委员会批准，符合纳入研究周期病例 标准至少符合以下之一：前次ＩＣＳＩ周期２ＰＮ（即正常受精）率≤３０％；前次ＩＣＳＩ周期第３天无优质胚 胎；诊断为圆头精子症患者。将卵母细胞随机分为对照和人工辅助激活（ＡＯＡ）两组。对照组卵母细
Ｘｉｎｇｌｉｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｗａｎｇｘｌ２０８＠１２６．ｃｏｒｎ
Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５００５２，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ
Ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ｒａｔｅ ａｎｄ ｅｍｂｒｙｏ ｏｕｔｃｏｍｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｎｏｒｍａｌ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｌｃｉｕｍ ｉｏｎｏｐｈｏｒｅ Ａ２３ １ ８７ ｏｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｐｅｒｉｏｄ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｙｃｌｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｏｖｕｍ ｆｏｒ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｏ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｔｈｅ ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｓｐｅｒｍ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（ＩＣＳＩ）ｃｙｃｌｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ
【关键词】
钙离子载体；
卵母细胞激活；
卵胞质内单精子显微注射；
受精失败
Ａ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｏｏｃｙｔｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｐｅｒｉｏｄ Ｘｉａｏ，Ｓｈｅｎ
Ｈａｏ Ｄａｙｏｎｇ＋，Ｚｈａｎｇ Ｒｕｉ，Ｚｈａｎｇ
加ｒ
Ｒｅｐｒｏ＇ｄｕｃｔｉｖｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ