血清总胆汁酸循环酶法测定法

血清总胆汁酸循环酶法测定法

1. 实验原理

胆汁酸会被3α-羟甾醇脱氢（3α-HSD）以及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）。此外生成的3-酮类固醇在3α-羟甾醇脱氢（3α-HSD）及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）存在下，生成胆汁酸及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）在405nm 处的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。

2. 标本：

2.1 病人准备：标本以空腹血清为宜，餐后胆汁酸会升高，应注意采血时间。

2.2类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆。应使用新鲜标本。标本必须避光保存。

3. 标本存放4℃保存可稳定7天，-20℃保存可稳定3个月。

4. 标本运输常温条件下避光保存运输。

5. 标本拒收标准细菌污染的标本。

6. 实验材料

6.1 试剂威特曼总胆汁酸测定试剂盒（试剂1：试剂2：）6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻，试剂2必须避光保存。

6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.4 注意事项：不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂

6.2 校准品：使用威特曼公司提供的TBA校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪

8. 操作步骤:

8.1 项目基本参数：参见AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件

8.2仪器操作步骤：参见AU2700生化分析仪操作规程.SOP 文件

9. 检验结果的判断与分析

10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以南京波因特公司提供的TBA校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以μmol/L报告。

12. 参考值范围[2,3]：成年人：<10μmol/L

参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差

别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13. 临床意义

14. 操作性能

14.1 线性范围：1.06～90μmol/L。

14.2 精密度：

批内精密度n=20

x

(μ

mol/L)

s

(μ

mol/L)

CV

(%)

天间

精密度

n=20

x

(μ

mol/L)

s

(μ

mol/L)

CV

(%)

样品1 7.0 0.22 3.14 样品1 7.2 0.32

4.4

4 样品220.8 0.43 2.07 样品222.4 0.62

2.7

7 样品350.4 0.88 1.75 样品352.4 1.01

1.9

3 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂

盒(x)，同时对79个样品进行TBA检测，将检测结果作

方法学比较，其统计结果如下：y=0.999x+0.19μmol/L；

r=0.999。

14.4 灵敏度：本试剂的检测限为1.06μmol/L。

14.5 病人结果可报告范围：1.06～90μmol/L。

15. 超出范围结果处理本法的检测范围为1.06～90μmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+1稀释，重新测定，结果乘以2。

16. 病危报警值的处理

17. 方法局限性

17.1本法的检测范围为 1.06～90μmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1+1稀释，重新测定，结果乘以2。

17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤100mg/L，胆红素≤50mg/L，血红蛋白≤5g/L，乳糜度≤3000度时没有观察到干扰。

18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。

19. 参考文献

1. Jung K,Bohm M. Enzyme,23:201(1978)

2. Hafkenscheid J C M, Dijit C C M. Clin Chem,25(1):55(1979)

3. Tietz N W. Fundamentals of clinical chemistry, W. B. Saunders Co.,p674(1982)

4. Tsunoda T, Eto T, Furukawa M, Nakata T, Kusano T,Lin Y, Tashiro K, Watabe S, Tsuchiya R. Clear and colorless fluid observed during percutaneous transhepatic gallbladder drainage. Gastroenterol Jpn 1990; 25: 619-24.

5. Keller, h.: klinisch-chemische labordiagnostik fur die praxis, 2nd edition, georg thieme verlag, stuttgart, 1991: 24

6.

6. Scientific Tables Geigy, partial volume body fluids. Basel: Ciba-Geigy 1977; 8: 136-43.

7. Kruis W, Paumgartner G. Bile acid depletion syndrome. Dt Arztebl 1982; 79: 33-6

20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。