结核分枝杆菌实验室检测方法

高校教育精品PPT
8
实验室检测方法
病原学 免疫学 分子生物学
• 萋尼染色+荧光染色 • 罗氏培养+分枝杆菌快速培养
• 抗原抗体检测 • 细胞因子检测
• 荧光定量PCR • 芯片杂交
高校教育精品PPT
9
涂片镜检--抗酸染色
• 抗酸染色是目前为止最快的结核检出方法， 可用来检测病情进展，为感染控制提供参 考依据，可确证培养物为阳性
结核分枝杆菌实 验室检测方法
高校教育精品PPT
1
分枝杆菌属
• 一类细长略带弯曲，有时呈分枝状的杆菌，本属 细菌多具有抗酸性，又称抗酸杆菌（acid-fast bacillus），细菌体内含有分枝菌酸，细胞壁含有
大量脂类，这与分枝杆菌的染色性、抵抗力和致 病性等密切相关。
• 本属细菌已经被鉴定的有70多种，可分为三大类： 结核分枝杆菌、非典型分枝杆菌、麻风分枝杆菌；
• 1、传统的固态培养法 需要4～6周才能检测到结核菌的生长．而且阳
性率也只有30％-40％；特异性差．各种分枝杆菌均 可生长。要确定是否为结核菌．需结合分枝杆菌菌 种鉴定和药物敏感性试验。
高校教育精品PPT
13
2、分枝杆菌快速液体培养技术
• BD公司推出的BACTEC—MGIT 960全自动 分枝杆菌培养，鉴定／药敏系统，操作简 便，阳性标本检出时间平均为9d：鉴定、 药敏试验时间平均为4d：阳性标本检出率 比传统固体培养提高10％左右
• 不能区分结核和非结核分枝杆菌
• 不能区分活菌和死菌
• 敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000条 菌时可检出，而培养可检出>10-100条菌.
高校教育精品PPT
11
发光二极管荧光显微镜（LED）
• 荧光显微镜成本高、易损坏、耗电量大、 光源寿命短、显微镜价格昂贵且需要在暗 室内工作等，荧光染色法一直没有在结核 病痰涂片诊断中得到广泛的应用。
• 按生长速度可分为三类，即缓慢生长菌、迅速生 长菌和不能培养菌三种类型
高校教育精品PPT
2
结核分枝杆菌群
• 结核分枝杆菌，是人和动物结核病的病原体，包 括人结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）、牛分支杆菌（M.bovis）、非洲 分支杆菌（M.africanum）和田鼠分枝杆菌 （M.microti），前三种对人类治病，其中人型结 核分枝杆菌感染发病率最高。
• 偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌龟亚种、龟分枝杆菌 脓肿亚种属于迅速生长型，鸡蛋培养基上3-5天可 见菌落
高校教育精品PPT
4
麻风分枝杆菌
• 麻风分枝杆菌（M.leprae）是麻风病的病原 体，也是抗酸杆菌，但较结核分枝杆菌短 而粗，两端尖细，抗酸染色着色均匀，呈 束状或团状排列，结核分枝杆菌多散在， 偶有聚集。为典型的胞内寄生菌，有麻风 杆菌存在的细胞胞浆呈泡沫状，称麻风细 胞。
高校教育精品PPT
6
生物学形状
结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，有时可见 分枝状，无芽孢和鞭毛，因衰老或抗结核药物的 作用可出现多形态，如球状、串珠状或丝状， 大小为1～4X0.4μm。
细胞壁中含有大量脂质而不易着色，特别是有 大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面，一般 用抗酸染色。萋尼染色呈红色，背景为蓝色； 荧光染料金胺“O”染色，荧光显微镜下为橘黄色
• 只需将二极管替换普通光学显微镜的目镜 就相当于一台荧光显微镜，组装的“荧光 显微镜”结合金胺O染色在结核病痰涂片检 查中有一定的应用价值。
田斌等，发光二极管荧光显微镜在基层实验室诊断结核分枝杆菌的应用评价.
实用预防医学2012年10月第19卷第10期.
高校教育精品PPT
12
分枝杆菌培养技术
• 结核菌培养仍是目前诊断的金标准．尤其是药敏 试验结果在指导临床用药及耐药性检测等方面具 有重要作用, 是鉴定是否为活菌的可靠方法．
• 体外不能培养。
ຫໍສະໝຸດ Baidu
高校教育精品PPT
5
结核分枝杆菌
• 全球约有1/3的人口已经感染结核分枝杆菌，有 2000万活动性肺结核患者，每年新发病例900万 人，每秒钟有1人感染结核，每年有300万人死 于结核病。
• 随着抗结核药物的不断发展和卫生生活状况的 改善，结核的发病率和死亡率曾一度大幅下降
• 20世纪80年代后，由于艾滋病和结核分枝杆菌 耐药菌株的出现、免疫抑制剂的应用、吸毒、 贫困及人口流动等因素，全球范围内结核病的 疫情骤然恶化
• 萋尼染色法—红色—普通显微镜（高倍） • 荧光染色—黄或橘色—荧光显微镜（低倍）
联染法：敏感性高，特异性好，速度快！
高校教育精品PPT
10
抗酸染色局限性
• 抗酸染色对分枝杆菌非特异，其他如 Nocardia（奴卡）、Rhodococcus（红球 菌属）、Legionella micdadei（军团菌）、 cryptosporidium（隐孢子虫）、Isospora （等孢球虫）等有抗酸菌特点
高校教育精品PPT
14
固体培养和液体培养优缺点
• 固体培养：污染少，易于进行菌落形态观 察，但是培养时间长
• 液体培养：菌体与培养基充分接触，生长 迅速，但易受到污染
高校教育精品PPT
15
血清学试验
高校教育精品PPT
16
免疫学检测方法
• 1、结核菌素试验 • 凡感染过结核杆菌的机体，会产生相应的
高校教育精品PPT
7
培养特性
培养基
• 营养要求高，必须在含血清，卵黄，马铃薯，
甘油及无机盐类的特殊培养基上生长，常用的 有罗氏固体培养基
• 专性需氧，3%-5%CO2能促进其生长最适温 培养条 度为35-37℃，最适pH为6.5-6.8
件
• 菌落粗糙型，表面干燥成颗粒状，不透明，乳
菌落特 点
白色或淡黄色，菜花样
• 结核分枝杆菌属于缓慢生长分支杆菌
高校教育精品PPT
3
非典型分枝杆菌
• 偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌龟/脓肿、胞内分枝杆 菌、鸟分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆 菌、偶然分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、浅黄分枝杆 菌、土分枝杆菌、草分枝杆菌、不产色分枝杆菌、 海-溃疡分枝杆菌、金色分枝杆菌、苏尔加分枝杆 菌、蟾蜍分枝杆菌等
致敏淋巴细胞，具有对结核杆菌的识别能 力，当再次遇到通过皮肤注入的少量的结 核菌素时，致敏Ｔ 淋巴细胞受相同抗原再 次刺激会在48-72小时内，产生局部炎症反 应，出现红肿硬节即为阳性反应。