血液相容性评价实验

动态凝血时间测定

实验方法

1 参比材料的制取

体外动态凝血时间的测定以硅烷化玻璃作为阴性对照，玻璃作为阳性对照。将二甲基二氯硅烷（（CH3）2SiCl2）用石油醚稀释为10%的溶液后，均匀涂敷于洁净干燥的玻璃烧杯/玻片上，在烘箱中缓缓升温至200 ℃，保温3小时以上，即得阴性对照样品。硅烷化的玻璃不挂水。

2 ACD血液的配制

将枸橼酸（C6H8O7 • H2O）0.47g、葡萄糖0.3g、枸橼酸钠（Na3C6H8O7 • 2H2O）1.22g 溶于100 ml蒸馏水中，配成血液保存液ACD。采集新鲜血液，以血: ACD为4:1的比例配置成ACD血液。

3 操作步骤

1）所有试样（每组3个样）按事先设计的时间顺序编号。

2）用刻度吸管将0.2 ml ACD血液滴加在清洗后的试样表面，用微量加样器加入0.2 mol/L CaCl2溶液25 μl。用玻璃棒轻轻搅匀，立即开动秒表开始计时。

3）在5, 10, 20, 30, 40, 50, 60 min等指定时间，分别用100 ml蒸馏水缓缓流注于试样表面，将流液收集在烧杯中。

4）用721分光光度计在540 nm处测定每份流液的吸光度值。

5）将测得的数值绘制动态凝血时间曲线，即作OD ~ t曲线（各试材吸光度均取3管流液平均值）。取吸光度为0.100所对应的接触时间为材料的动态凝血时间。

溶血率测定

实验方法

1 新鲜稀释抗凝血的配制

采集新鲜血20 ml，用2%草酸钾溶液1 ml抗凝，然后用0.9%NaCl(生理盐水)以4:5的比例（血液：稀释液）进行稀释。

2 操作步骤

1）将待测试样经水洗干燥后，放入硅烷化玻璃容器中，加生理盐水10 ml。每一种样品三个平行样。

2）设阴性对照组（三个平行样），每个样品中加入生理盐水10 ml。

3）设阳性对照组（三个平行样），每个样品中加入蒸馏水10 ml。

4）将全部试管放入37±0.5℃的水浴中恒温30 min。

5）在各管中用刻度吸管加入新鲜稀释抗凝血0.2 ml，轻轻混匀，在水浴中继续保温60 min。

6）将各管的溶液置入干燥离心管中，2500 r/min离心分离5 min。

7）离心后的上清液，移入比色皿中，用分光光度计在545 nm波长处测定各自的吸光度。8）计算溶血率：(游离血红蛋白浓度/总血红蛋浓度) ×100%

各试管和对照管的吸光度均取三管平均值。

血小板消耗率测定

实验方法

1 抗凝血的配制

同上

2 草酸铵稀释液的配制

取草酸铵（（NH4）2C2O4 • H2O）1.0g，EDTA-Na2 0.012g，用蒸馏水稀释至100 ml。

3 操作步骤

1）将具有相同表面积的被测材料清洗干燥后，置于硅烷化玻璃容器中。

2）用刻度吸管往容器中加入抗凝血1 ml，立即开动秒表，记录时间，接触时间为10 min。3）用刻度吸管往硅烷化的清洁小试管中加入草酸铵稀释液0.38 ml。

4）用微量取样器迅速准确地吸取容器中的血液20 μl，吸取时避免产生气泡和多次吸取，取好后立即将血液轻轻吹入已盛稀释液的试管中，微量取样器取上清洗吸管3次，轻轻混匀置于试管架上。

5）将试管轻轻振荡，用清洁吸管吸取血液一滴，注入计数板上的计数池，推上盖玻片，

避免产生气泡或溢出，静置10~15 min。

6）在显微镜下先用低倍镜找到中央大格，数中央大格中的五个中格（80个小格）内的血小板数，应将全部大格数完。使用显微镜时要特别注意物镜不要触及载玻片。7）血小板计数：5中格内血小板数×109=血小板数/升。

8）计算血小板消耗率

思考题

1、三个体外血液相容性指标评价的意义有何不同？它们是否为完全独立的指标？

2、在测定动态凝血时间的试验中，如何根据OD~t曲线评价材料的抗凝血性能？

生物材料评价实验评分标准

(1)90-100：严格按照实验操作流程进行实验，得出正确结论，完成课后思考题。

实验报告正确无误记录实验流程，格式正确，且积极思考，对实验中的反常现象进行分析思考，讨论其原因。

(2)80-90：能按照实验操作流程进行实验，得出正确结论。实验报告正确记录实验流程，格式正确，对实验中的反常现象进行分析。

(3)70-80：能按照实验操作流程进行实验，得出正确结论。实验报告基本正确记录实验流程，格式基本正确。

(4)60-70：能按照实验操作流程进行实验，得出正确结论。实验报告基本正确记录实验流程，但不全面、不系统。格式基本正确。

(5)凡有以下情况之一者，以不及格论：

a)未达到实习规定的基本要求，实验报告缺乏主要实验内容，甚至错误，不完

整、不系统。

b)抄袭实习报告者和给人抄袭报告者；大量下载拷贝网上资料拼凑为报告者；

c)严重违反纪律，造成严重安全责任事故、其它严重事故或造成恶劣影响者。