实验九 凋亡细胞的诱导及形态学观察

(2) 取100 uL细胞悬液均匀涂布于载玻片上，晾干后甲醇 溶液覆盖涂片，固定1 min，晾干。

(3) 用姬姆萨染液覆盖涂片，染色5 min。 (4) 回收姬姆萨染液（直接倒入姬姆萨染液试剂瓶），剩
余染液用水轻轻洗去。

(5) 用光学显微镜观察细胞核形态。凋亡细胞的染色质浓 缩、并靠近核膜和核着边现象、核膜裂解、染色质分割成 块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。
三、实验仪器、材料和试剂

器具：光学显微镜、离心机、倒置显微镜、载玻片。 鱼血红细胞 试剂：磷酸缓冲液(pH 7.2)、姬姆萨染色液、维生素K3溶液
(300 u mol/L)
四、方法与步骤

1、获取鱼血红细胞0.5 ml，在500×g离心3 min，沉淀 用0.5 ml等渗NaCl溶液洗涤细胞2次。
五、作业

1、比较诱导处理后的细胞发生凋亡百分率。 2、如何解释维生素K3诱导细胞凋亡的原因?

3、试分析哪些因素影响离体细胞发生凋亡。
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2、将细胞悬浮于含有维生素K3溶液中1 h。
3、将细胞液滴在载玻片上，置于光学显微镜下观察。
观察比较经过诱导的和未诱导细胞形态、大小和细胞凋
亡小体的出现，照相并记录实验结果。


4、凋亡细胞的姬姆萨染色：
(1) 细胞悬液于500 r／min离心后，去除上清液后，将细 胞重悬于0.5 ml PBS中。
实验九 凋亡细胞的诱导及形态学观察
一、实验目的

了解细胞凋亡的形态学特征；
学习研究细胞凋亡的方法。
二、实验原理

凋亡细胞体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象， 细胞凋亡晚期可见凋亡小体。而坏死细胞的体积胀大，细
胞膜损坏或裂解成碎片，有时可见呈网状的染色质结构。

使用普通光学显微镜可以直接观察细胞的大小和凋亡小体， 也可用带荷的染料台盼蓝使死细胞着色、活细胞不着色， 或用染核的染料姬姆萨染色后再在光学湿微镜下进行观察。