结核病防治实验室痰检工作——第一讲 痰涂片镜检
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标本的性状
【粘液痰】 标本外观以白色、粘稠度较高的肺部和支 气管分泌物为主，制片时需仔细涂抹 此类标本的AFB检出率较唾液高
痰涂片操作程序
【粘液痰】
涂片染色后镜检时，镜下可见支气管内膜纤毛柱状上皮细胞 标本的性状 (细胞较长且形态不规则、细胞核和细胞质着色均较深，细 胞 一端可见着色较浅的纤毛)，伴有少量肺上皮脱落细胞(多 数 为圆形、细胞核较小且着色较细胞质深，核质比大于 1:3)、 脓性炎症细胞(卵圆形、细胞核占细胞比例较大且着色较 深，核质比低于 1:1)、口腔脱落细胞及口腔寄生菌
结核菌的形态和结构
电子显微镜下的结核分枝杆菌
细胞壁
细胞膜
结核分枝 杆菌 细胞质 核物质
结核菌的形态和结构
电子显微镜下的结核分枝杆菌
Gram-positive S. aureus Gram-negative E. coli Acid fast M. tuberculosis
结核菌的形态和结构
染色特性
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理
【脑脊液的采取】 无菌手术取得脑脊液以后，3000转离心30分钟，取沉淀 物涂片染色检查 结核性的脑脊液放在冰箱中4℃过夜以后，会在液面形成 一个倒漏斗状的薄膜，取此薄膜涂片染色镜检
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理
【尿标本的采取】 通常留取清晨第一次全尿或中后段夜尿,也可留取24小时 的尿液，放冰箱或阴凉处，静置，去上清，留沉淀部分 50—60ml送检，取此沉淀液，经3000转，离心30分钟， 取沉淀部分2ml直接涂片，染色检查
痰涂片操作程序
染色步骤
【脱色】 流水自玻片一端清 缓冲洗染色液，沥 去玻片上的水，滴 加脱色液，保持1 分钟
痰涂片操作程序
染色步骤
【复染】 滴加亚甲蓝复染 液，保持30秒钟 流水冲洗，沥去 玻片上的水 玻片干燥后镜检
痰涂片操作程序
染色步骤
将涂片排放在染色架上，注意间隔
痰涂片操作程序
染色步骤
滴加碱性复红
1
结核杆菌用革兰氏染色，着色较差但呈兰色， 列为G＋菌
2
结核杆菌用普通的染色方法不易着色，在染液 中加入石炭酸后才可着色
结核菌的形态和结构
染色特性
3
抗酸染色时，因结核杆菌菌体含有大量脂质，其脂 质的含量占分枝杆菌之首，占菌体干重的40%，因脂质的 含量大，所以不易着色，但经过加热或者提高石炭酸的 浓度、延长染色时间等处理以后才能着色
痰涂片操作程序
标本的性状
【血痰】 此类标本是因粘液痰或干酪痰标本中混有血液而形成 颜色为褐色或深褐色、鲜红色或伴有血丝 涂片染色后镜检除能够观察到粘液痰或干酪痰的细胞 特征外，含新鲜血液的标本中可见到被染色的血细胞 由于含血标本易干扰AFB镜检的结果，故在制片时应尽 量避免挑取含血标本
痰涂片操作程序
痰涂片操作程序
标本的性状
外层是 口 腔黏液
核心是肺 部坏死组 织
中间层是支 气管分泌物
合格的痰标本应是患者深呼吸后，由肺部深处咳 出的分泌物
痰涂片操作程序
标本的性状
【干酪痰】 标本外观以黄色(或奶酪色)、脓样、团块状的肺部 分泌物为主，粘度较粘液痰低，制片时较易涂抹 涂片染色后镜检，可发现大量脓性炎症细胞、肺上 皮脱落细胞 由于此类标本是由肺部深处咳出，对肺结核的诊断 最有价值，故抗酸杆菌(以下简称AFB)的检出率较高
痰涂片操作程序
染色步骤
加热
痰涂片操作程序
染色步骤
流水冲洗 洗
痰涂片操作程序
染色步骤
脱色
痰涂片操作程序
染色步骤
流水轻缓冲洗
痰涂片操作程序
染色步骤
复染
痰涂片操作程序
染色步骤
流水洗去复染液
痰涂片操作程序
染色步骤
在玻片架上自然干燥
痰涂片操作程序
染色过程
1 2 3 4 将涂片排放在染色架上 滴加碱性复红染色液加热 出现蒸汽后，保持5分钟 流水轻缓冲洗 7 滴加脱色液，保持1分钟 流水轻缓冲洗 滴加亚甲兰复染 液保持1分钟 流水轻缓冲洗
结核菌的形态和结构
染色特性
4
一旦着色，不易被盐酸酒精脱色，而其他细菌
均被脱色，把不被盐酸酒精脱色的细菌称为抗酸菌，这 种方法称为抗酸染色法
结核菌的形态和结构
萋尼氏染色镜下形态
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理
【胸腹水】 【脑脊液】 【尿标本】 【脓液、病灶组织】 【痰标本，肺部深咳的痰】
痰涂片操作程序
检查对象
疗效评价
治疗中或复诊随访病人按期每次送检两份痰 (当 日即时痰、当日或次日晨痰） 初治涂阳患者在疗程满2、5、6月时 复治涂阳患者在疗程满2、5、8月时
结核菌的形态和结构
光学显微镜下为细长 稍弯曲，两端钝圆的 杆菌 ，菌体长度多为 1.5~3.5um
结核分枝杆菌
宽度为0.3～0.6um，生 长发育期间形成分枝 经萋尔-尼尔逊染色后 在显微镜内蓝色背景 下呈红色杆状
痰检工作的目的和意义 痰检工作的
在结核病控制工作中痰结核菌涂片镜检对 于发现传染源、确定诊断和化疗方案、考核 疗效、评价防治效果具有重要意义
2
1
是国家结核病控制规划(NTP) 的重要
组成部分，在现代结核病控制工作中起着不 可缺少的重要作用
国家结核病规划（NTP）与 结核病细菌学实验室网络
1
结核病细菌学实验室通过日常、有效的细
痰涂片操作程序
直接涂片的步骤
【清洁无划痕的新玻片脱脂、干燥】 编号 无磨砂面的玻片，需用玻璃刻刀或用标签纸 有磨砂面的玻片，可用铅笔编号
痰涂片操作程序
直接涂片的步骤
【清洁无划痕的新玻片脱脂、干燥】 使用折断的竹签茬端，取痰标本中干酪样或脓样 0.05~0.1毫升，涂于玻片右2/3处，均匀涂抹 10x20毫米大小的椭圆形痰膜 痰膜朝上，待自然干燥(一般20分钟)
痰涂片操作程序
涂片面积
10×20mm
10mm
20mm
痰涂片操作程序 染色步骤
初染 (碱性复红)
染色过程
脱色 (盐酸酒精)
复染 (亚甲兰)
痰涂片操作程序
染色步骤
【初染】 将玻片放置染色架上，玻片间距保持10毫米以上距离 火焰固定 固定（5秒钟将玻片过火4次） 滴加石炭酸复红染液，盖满玻片 盖满玻片 火焰加热至出现蒸汽，勿使沸腾 脱离火焰，保持5分钟
痰涂片操作程序
标本的性状
【唾液】 目视观察标本整体外观，以透明或半透明水样、粘度 较低的口腔分泌物为主，标本中有时伴有气泡 涂片染色镜检时，镜下可见少量口腔上皮脱落细胞(形 态不规则、细胞核着色较细胞质深，核质比接近或大 于 1:2)和口腔内寄生菌，有时可见食物残渣 由于此类标本进行AFB检查时的检出率很低，用于对患 者确定诊断时是不合格的标本
常见标本的收集及处理
【胸腹水的采取】 于试管中加20%的枸橼 枸橼酸钠3—5滴，或10%的草酸钾 枸橼 5—6滴，可防止15—20ml 胸腹水凝固。无菌采取胸腹 水以后应立即送检。可采取离心集菌或漂浮集菌法检 查
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理
【纤维支气管镜刷检物】 可将毛刷直接进行抗酸染色,也可将刷检标本洗脱于装有 无菌生理盐水的试管中,再涂片检查
痰盒图例
痰涂片操作程序
痰盒图例
痰涂片操作程序
痰标本的采集
痰标本的采集 通用螺旋盖 痰瓶，或 可 痰容器应标明病人姓 密封塑料 名、编号（检查项 盒 目 和容器序号1、2、 蜡纸盒收 3 集 （1＝当日即时痰， 痰标本 2
如：张三，涂片 58—1，58—2 58--3
痰涂片操作程序
留取标本
留痰时应嘱咐病人尽量深咳，留取痰量3~5毫升 干酪痰、血痰、黏液痰为合格的标本唾液属不合 格痰标本
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理
脓液直接涂片染色镜检 病灶组织或干酪样组织需充分研碎后再涂片检查
痰涂片操作程序
痰标本的采集－容器
当前,贵州省疾病预防控制机构结核病实验室进行痰检 工作的耗材由项目统一提供： 螺旋盖痰瓶 可密封的塑料盒 可密封的蜡纸盒
痰涂片操作程序
痰标本的采集－容器
痰涂片操作程序
第三章
结核病管理及最新进展
第一节 结核病防治实验室痰检工作
第一讲
痰涂片镜检
本节内容导航
痰检工作的目的和意义 国家结核病规划（NTP） 与结核病细菌学实验室网络 检查对象 结核菌的形态和结构
电子显微镜下的结核分枝杆菌 染色特性 萋尼氏染色镜下形态
本节内容导航
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理 痰标本的采集－容器 痰标本的采集 留取标本 痰标本的运送 标本的性状 直接涂片的步骤 染色的步骤
检查对象
确定诊断
凡因结核病症状求诊及转诊的可疑肺结核患 者，均应进行痰直接涂片检查
结核病症状体征 持续咳嗽 咳痰超过 3周
咳血或伴 有血痰
发热或胸 痛超过2周
胸部X线异常
检查对象
确定诊断的涂片检查应采集3个合格的痰标本 就诊当时在门诊留一份“即时痰”标本，同时给 患者2个痰盒，嘱患者留取“夜间痰”和“晨 痰”，于次日交验
菌学（病原学）诊断，发现传染源、决定化疗方 案和评价治疗效果为实现NTP的重要目标服务
2
痰涂片镜检服务必需在健全的细菌学实验
室网络中才能实现
国家结核病规划（NTP）与 结核病细菌学实验室网络
3
结核病高负担国家NTP主要通过实施现代结 核病控制策略（DOTS）来实现
4
痰涂片镜检是结核病细菌学实验室服务中 最重要的内容之一。痰涂片镜检发现传染源是 DOTS策略的重要组成部分
痰瓶上标明病人姓名，初诊门 诊序号（或随访病人登记号） 痰标本留取后，痰盒切勿倒置 切勿倒置、 严防痰液外溢，应立即送检
留取标本
进行细菌学检查时，应在登记 本和检验报告单上注明标本性 注明标本性 状
痰涂片操作程序
痰标本的运送
难以获得合格标本时，也应进行细菌学检查，但 应注明标本性状，以供分析结果时参考 需送上一级实验室检查的痰标本应置4℃冰箱保存， 外送前认真核对检验单与痰瓶上标注，放专用的冰 盒内运送，或用纸袋、塑料袋封装扎牢后顺序放入 包装盒，盒外注明请勿倒置标志
5
6
痰涂片操作程序
染色过程
太厚 太大、不均匀 太大、不均匀、脱色不佳 涂片不佳、不均匀 太小 脱落 脱落 太薄 不均匀、脱落、脱色不佳
痰涂片操作程序
染色后外观
wenku.baidu.com
本节小结
本讲课内容主要从痰涂片镜检的角度讲述了结核
病防治实验室痰检工作中新的进展 本讲中的重点内容是痰涂片的操作程序，辅以开篇 的背景知识帮助理解
痰涂片操作程序
标本的性状
不同痰液涂片阳性率表 （仅供示例）
性质 干酪痰 血痰 粘液痰 唾液 例数 55 46 529 92 阳性数 36 16 56 7 阳性率 65.5% 34.8% 10.6% 7.6%
痰涂片操作程序
标本的性状
细胞核质比，白细胞，说明痰的质量较好
痰涂片操作程序
标本的性状
上皮细胞多，说明标本质量差
【粘液痰】 标本外观以白色、粘稠度较高的肺部和支 气管分泌物为主，制片时需仔细涂抹 此类标本的AFB检出率较唾液高
痰涂片操作程序
【粘液痰】
涂片染色后镜检时，镜下可见支气管内膜纤毛柱状上皮细胞 标本的性状 (细胞较长且形态不规则、细胞核和细胞质着色均较深，细 胞 一端可见着色较浅的纤毛)，伴有少量肺上皮脱落细胞(多 数 为圆形、细胞核较小且着色较细胞质深，核质比大于 1:3)、 脓性炎症细胞(卵圆形、细胞核占细胞比例较大且着色较 深，核质比低于 1:1)、口腔脱落细胞及口腔寄生菌
结核菌的形态和结构
电子显微镜下的结核分枝杆菌
细胞壁
细胞膜
结核分枝 杆菌 细胞质 核物质
结核菌的形态和结构
电子显微镜下的结核分枝杆菌
Gram-positive S. aureus Gram-negative E. coli Acid fast M. tuberculosis
结核菌的形态和结构
染色特性
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理
【脑脊液的采取】 无菌手术取得脑脊液以后，3000转离心30分钟，取沉淀 物涂片染色检查 结核性的脑脊液放在冰箱中4℃过夜以后，会在液面形成 一个倒漏斗状的薄膜，取此薄膜涂片染色镜检
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理
【尿标本的采取】 通常留取清晨第一次全尿或中后段夜尿,也可留取24小时 的尿液，放冰箱或阴凉处，静置，去上清，留沉淀部分 50—60ml送检，取此沉淀液，经3000转，离心30分钟， 取沉淀部分2ml直接涂片，染色检查
痰涂片操作程序
染色步骤
【脱色】 流水自玻片一端清 缓冲洗染色液，沥 去玻片上的水，滴 加脱色液，保持1 分钟
痰涂片操作程序
染色步骤
【复染】 滴加亚甲蓝复染 液，保持30秒钟 流水冲洗，沥去 玻片上的水 玻片干燥后镜检
痰涂片操作程序
染色步骤
将涂片排放在染色架上，注意间隔
痰涂片操作程序
染色步骤
滴加碱性复红
1
结核杆菌用革兰氏染色，着色较差但呈兰色， 列为G＋菌
2
结核杆菌用普通的染色方法不易着色，在染液 中加入石炭酸后才可着色
结核菌的形态和结构
染色特性
3
抗酸染色时，因结核杆菌菌体含有大量脂质，其脂 质的含量占分枝杆菌之首，占菌体干重的40%，因脂质的 含量大，所以不易着色，但经过加热或者提高石炭酸的 浓度、延长染色时间等处理以后才能着色
痰涂片操作程序
标本的性状
【血痰】 此类标本是因粘液痰或干酪痰标本中混有血液而形成 颜色为褐色或深褐色、鲜红色或伴有血丝 涂片染色后镜检除能够观察到粘液痰或干酪痰的细胞 特征外，含新鲜血液的标本中可见到被染色的血细胞 由于含血标本易干扰AFB镜检的结果，故在制片时应尽 量避免挑取含血标本
痰涂片操作程序
痰涂片操作程序
标本的性状
外层是 口 腔黏液
核心是肺 部坏死组 织
中间层是支 气管分泌物
合格的痰标本应是患者深呼吸后，由肺部深处咳 出的分泌物
痰涂片操作程序
标本的性状
【干酪痰】 标本外观以黄色(或奶酪色)、脓样、团块状的肺部 分泌物为主，粘度较粘液痰低，制片时较易涂抹 涂片染色后镜检，可发现大量脓性炎症细胞、肺上 皮脱落细胞 由于此类标本是由肺部深处咳出，对肺结核的诊断 最有价值，故抗酸杆菌(以下简称AFB)的检出率较高
痰涂片操作程序
染色步骤
加热
痰涂片操作程序
染色步骤
流水冲洗 洗
痰涂片操作程序
染色步骤
脱色
痰涂片操作程序
染色步骤
流水轻缓冲洗
痰涂片操作程序
染色步骤
复染
痰涂片操作程序
染色步骤
流水洗去复染液
痰涂片操作程序
染色步骤
在玻片架上自然干燥
痰涂片操作程序
染色过程
1 2 3 4 将涂片排放在染色架上 滴加碱性复红染色液加热 出现蒸汽后，保持5分钟 流水轻缓冲洗 7 滴加脱色液，保持1分钟 流水轻缓冲洗 滴加亚甲兰复染 液保持1分钟 流水轻缓冲洗
结核菌的形态和结构
染色特性
4
一旦着色，不易被盐酸酒精脱色，而其他细菌
均被脱色，把不被盐酸酒精脱色的细菌称为抗酸菌，这 种方法称为抗酸染色法
结核菌的形态和结构
萋尼氏染色镜下形态
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理
【胸腹水】 【脑脊液】 【尿标本】 【脓液、病灶组织】 【痰标本，肺部深咳的痰】
痰涂片操作程序
检查对象
疗效评价
治疗中或复诊随访病人按期每次送检两份痰 (当 日即时痰、当日或次日晨痰） 初治涂阳患者在疗程满2、5、6月时 复治涂阳患者在疗程满2、5、8月时
结核菌的形态和结构
光学显微镜下为细长 稍弯曲，两端钝圆的 杆菌 ，菌体长度多为 1.5~3.5um
结核分枝杆菌
宽度为0.3～0.6um，生 长发育期间形成分枝 经萋尔-尼尔逊染色后 在显微镜内蓝色背景 下呈红色杆状
痰检工作的目的和意义 痰检工作的
在结核病控制工作中痰结核菌涂片镜检对 于发现传染源、确定诊断和化疗方案、考核 疗效、评价防治效果具有重要意义
2
1
是国家结核病控制规划(NTP) 的重要
组成部分，在现代结核病控制工作中起着不 可缺少的重要作用
国家结核病规划（NTP）与 结核病细菌学实验室网络
1
结核病细菌学实验室通过日常、有效的细
痰涂片操作程序
直接涂片的步骤
【清洁无划痕的新玻片脱脂、干燥】 编号 无磨砂面的玻片，需用玻璃刻刀或用标签纸 有磨砂面的玻片，可用铅笔编号
痰涂片操作程序
直接涂片的步骤
【清洁无划痕的新玻片脱脂、干燥】 使用折断的竹签茬端，取痰标本中干酪样或脓样 0.05~0.1毫升，涂于玻片右2/3处，均匀涂抹 10x20毫米大小的椭圆形痰膜 痰膜朝上，待自然干燥(一般20分钟)
痰涂片操作程序
涂片面积
10×20mm
10mm
20mm
痰涂片操作程序 染色步骤
初染 (碱性复红)
染色过程
脱色 (盐酸酒精)
复染 (亚甲兰)
痰涂片操作程序
染色步骤
【初染】 将玻片放置染色架上，玻片间距保持10毫米以上距离 火焰固定 固定（5秒钟将玻片过火4次） 滴加石炭酸复红染液，盖满玻片 盖满玻片 火焰加热至出现蒸汽，勿使沸腾 脱离火焰，保持5分钟
痰涂片操作程序
标本的性状
【唾液】 目视观察标本整体外观，以透明或半透明水样、粘度 较低的口腔分泌物为主，标本中有时伴有气泡 涂片染色镜检时，镜下可见少量口腔上皮脱落细胞(形 态不规则、细胞核着色较细胞质深，核质比接近或大 于 1:2)和口腔内寄生菌，有时可见食物残渣 由于此类标本进行AFB检查时的检出率很低，用于对患 者确定诊断时是不合格的标本
常见标本的收集及处理
【胸腹水的采取】 于试管中加20%的枸橼 枸橼酸钠3—5滴，或10%的草酸钾 枸橼 5—6滴，可防止15—20ml 胸腹水凝固。无菌采取胸腹 水以后应立即送检。可采取离心集菌或漂浮集菌法检 查
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理
【纤维支气管镜刷检物】 可将毛刷直接进行抗酸染色,也可将刷检标本洗脱于装有 无菌生理盐水的试管中,再涂片检查
痰盒图例
痰涂片操作程序
痰盒图例
痰涂片操作程序
痰标本的采集
痰标本的采集 通用螺旋盖 痰瓶，或 可 痰容器应标明病人姓 密封塑料 名、编号（检查项 盒 目 和容器序号1、2、 蜡纸盒收 3 集 （1＝当日即时痰， 痰标本 2
如：张三，涂片 58—1，58—2 58--3
痰涂片操作程序
留取标本
留痰时应嘱咐病人尽量深咳，留取痰量3~5毫升 干酪痰、血痰、黏液痰为合格的标本唾液属不合 格痰标本
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理
脓液直接涂片染色镜检 病灶组织或干酪样组织需充分研碎后再涂片检查
痰涂片操作程序
痰标本的采集－容器
当前,贵州省疾病预防控制机构结核病实验室进行痰检 工作的耗材由项目统一提供： 螺旋盖痰瓶 可密封的塑料盒 可密封的蜡纸盒
痰涂片操作程序
痰标本的采集－容器
痰涂片操作程序
第三章
结核病管理及最新进展
第一节 结核病防治实验室痰检工作
第一讲
痰涂片镜检
本节内容导航
痰检工作的目的和意义 国家结核病规划（NTP） 与结核病细菌学实验室网络 检查对象 结核菌的形态和结构
电子显微镜下的结核分枝杆菌 染色特性 萋尼氏染色镜下形态
本节内容导航
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理 痰标本的采集－容器 痰标本的采集 留取标本 痰标本的运送 标本的性状 直接涂片的步骤 染色的步骤
检查对象
确定诊断
凡因结核病症状求诊及转诊的可疑肺结核患 者，均应进行痰直接涂片检查
结核病症状体征 持续咳嗽 咳痰超过 3周
咳血或伴 有血痰
发热或胸 痛超过2周
胸部X线异常
检查对象
确定诊断的涂片检查应采集3个合格的痰标本 就诊当时在门诊留一份“即时痰”标本，同时给 患者2个痰盒，嘱患者留取“夜间痰”和“晨 痰”，于次日交验
菌学（病原学）诊断，发现传染源、决定化疗方 案和评价治疗效果为实现NTP的重要目标服务
2
痰涂片镜检服务必需在健全的细菌学实验
室网络中才能实现
国家结核病规划（NTP）与 结核病细菌学实验室网络
3
结核病高负担国家NTP主要通过实施现代结 核病控制策略（DOTS）来实现
4
痰涂片镜检是结核病细菌学实验室服务中 最重要的内容之一。痰涂片镜检发现传染源是 DOTS策略的重要组成部分
痰瓶上标明病人姓名，初诊门 诊序号（或随访病人登记号） 痰标本留取后，痰盒切勿倒置 切勿倒置、 严防痰液外溢，应立即送检
留取标本
进行细菌学检查时，应在登记 本和检验报告单上注明标本性 注明标本性 状
痰涂片操作程序
痰标本的运送
难以获得合格标本时，也应进行细菌学检查，但 应注明标本性状，以供分析结果时参考 需送上一级实验室检查的痰标本应置4℃冰箱保存， 外送前认真核对检验单与痰瓶上标注，放专用的冰 盒内运送，或用纸袋、塑料袋封装扎牢后顺序放入 包装盒，盒外注明请勿倒置标志
5
6
痰涂片操作程序
染色过程
太厚 太大、不均匀 太大、不均匀、脱色不佳 涂片不佳、不均匀 太小 脱落 脱落 太薄 不均匀、脱落、脱色不佳
痰涂片操作程序
染色后外观
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本节小结
本讲课内容主要从痰涂片镜检的角度讲述了结核
病防治实验室痰检工作中新的进展 本讲中的重点内容是痰涂片的操作程序，辅以开篇 的背景知识帮助理解
痰涂片操作程序
标本的性状
不同痰液涂片阳性率表 （仅供示例）
性质 干酪痰 血痰 粘液痰 唾液 例数 55 46 529 92 阳性数 36 16 56 7 阳性率 65.5% 34.8% 10.6% 7.6%
痰涂片操作程序
标本的性状
细胞核质比，白细胞，说明痰的质量较好
痰涂片操作程序
标本的性状
上皮细胞多，说明标本质量差