破壁松花粉对调节免疫功能的影响

（２００６）０５一Ｉ）６３８一Ｉ）２
［文献标识码］Ａ
［文章编号］１００１—５２１３
松花粉是我国传统营养品，长期以来都被用作延缓衰 老、美容养颜。为观察破壁松花粉的调节免疫作用，我们进 行了小鼠血清溶血素测定、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞 试验、二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应试验（ＤＴＨ）、ＮＫ 细胞活性测定、小鼠抗体生成（溶血空斑数）和胸腺指数、脾 指数等研究，现报道如下。 １材料 供试样品破壁松花粉由淳安千岛湖中新松花粉有限公 司提供，为黄色粉末，用纯化水配制成各剂量，混匀供试。实 验动物为昆明种小鼠，由浙江省中医药研究院实验动物中心 提供，清洁级，旱，体重（２０±２）ｇ。饲料由浙江省实验动物中 心提供，执行标准ＧＢｌ４９２４—１９９４。检测环境条件：温度９１～ ９３℃，相对湿度６（）％～６５％。动物于试验前在动物房环境中 适应３
５０
止，脾细胞悬液２（’肛Ｌ，迅速混匀，倾到于已刷琼脂薄层的６
ｃｍ平皿上，放入到平皿中，继续温育１．５ ｈ后，然后用ＳＡ缓 冲液稀释的补体（１：１０）加入到平皿中，继续温育１．５ ｈ后，计 数溶血空斑数。 表１
Ｔａｂ １
破壁松花粉对小鼠免疫功能的影响（于±即产１０）
Ｐｉｎｅ
ｐｏｌｌｅｎ＇ｓ ｅｆｆｅｃｔｓ
２．６
（５ ｇ・Ｌ～）５０“Ｌ／孔，继续培养４ ｈ，培养结束后，每孔加入Ｉ
ｍＬ酸性异丙醇，混匀，使紫色结晶完全溶解后，以５７０ ｎｍ波 长进行比色。
２．９ ３
数据处理 结果
采用方差分析。
胸腺指数、脾指数的测定各组灌胃给样品，ｑｄ，连续３（）
ｄ。处死动物，取其胸腺及脾脏，称重，计算胸腺指数、脾指 数。
ｏｎ
ｍｉｃｅ＇ｓ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ＆±ｓ。”＝Ｉ Ｏ） 差值
组别激
弱
鬻肿黼ｍｓ嚣器ｇ戮脾删％。Ｘ溶血１０３菜淼，哿器篙监警
注：与对照组相比，８ Ｐ＜Ｏ．０５
４
讨论 松花粉药名松花、松黄，始载于唐代《新修本草》，其性味
粉中的佼佼者，经破壁后，人体更易吸收。药理实验证实，松 花粉能增加小鼠免疫器官的重量，提高小鼠网状内皮系统的 吞噬能力，起到增加免疫力的作用ｒ２］。本实验结果表明，破 壁松花粉可明显增强细胞免疫和细胞吞噬功能，可能与其含 有丰富的营养成分有关。破壁松花粉对免疫功能的调节作 用，其机理尚有待于进一步研究。 参考文献： ［１］（清）叶天士撰．本草经解ＥＭ］．台湾五洲出版社，１９８４．４３． ［２］赵立新．松花粉抗衰老作用的实验研究［Ｊ］．现代医学，２００４，３２
（２）：７４—７６．
甘平，无毒。自古以来就是人们治病强身、延年益寿的食疗 保健品。如清代《本草经解》说：“松花气温，禀天春和之木 气，人足厥阴肝经，味甘无毒，得地中正之土味，入足太阴脾 经，气味俱升，阳也。其主润心肺者，饮食入胃，脾气散精，输 于心肺。松花味轧益脾，气温能行，脾为胃行其津液，输于心 肺，所以润心肺也。益气者，气温益肝之阳气，味甘益脾之阴 气也。风气通疝，气温散肝，所以除风，脾统血，味甘和脾，所 以止血也。可酿酒者，清香芳烈，宜于酒也”［１］。现代研究表 明，松花粉含有多种营养成分，如蛋白质、氨基酸、矿物质、酶 与辅酶、核酸、单糖、多糖等，并且成分稳定、不含激素，是花
２．４
Ｅ１０３王成祥，王惠芳，姜良铎，等．清肺饮对小鼠巨噬细胞吞噬功 能的影响ＥＪ３．中国中医药信息杂志，２００３，１０（１（））：３２—３３． ［１１］陈贵海，刘志新．不同月龄大鼠血清ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６含量比较 口］．实用中医药杂志，２００５，２ｌ（２）：６９—７０． ［收稿日期］２００６—０２—１０
２．２
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耳进行攻击，２４ ｈ处死动物，剪下耳壳，用打孔器取下直径８ ｒａｉｎ的耳片，称重，以左右耳重差计算肿胀率。
２．５
浙江省中医药研究院，浙江杭州３１（）（）０７） ［摘要］目的：观察破壁松花粉在小鼠体内的调节免疫作 ［作者简介］张暾，男，学士，主管药师，电话：０５７８—６８２９（）０９
ＮＫ细胞活性测定（ＬＤＨ测定法）各组灌胃给样品，
脱纤维绵羊红细胞免疫５ ｄ后，动物颈椎脱臼处死，取脾脏， 制成脾细胞悬液，调整细胞浓度为５×１０９个・Ｌ。。。将表层 培养基（１ ｇ琼脂糖加注射水１００ ｍＩ。）加热溶解后，放入４５ ℃水浴保温，与等量ｐＨ ７．２～７．４、２倍浓度的Ｈａｎｋｓ液混 合，分装小试管，每管０．５ ｍＬ，再向管内加入１０％ＳＲＢＣ
０．７
１０８・Ｌ一。取
靶细胞和脾细胞悬液（效应细胞）各１００肚Ｌ（效靶比５０：１）， 置９６孔培养板中，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各
１００
ｔＡ。，靶细胞最大释放孔加靶细胞和ｌ％ＮＰ４０各１００扯Ｌ。
ｍＬ不含小牛血清的ＰＲＭ １６４０培养液，同时加入ＭＴＴ
上述各项均设３个复孔，于３７℃、５％二氧化碳培养箱中培 养４ ｈ，离心，每孑Ｌ吸取上清１００肛Ｌ置平底９６孔培养板中， 同时加入ＬＤＨ基质液１００“Ｌ，反应３ ｍｉｎ，每孔加入１ ｔｏｏｌ・ Ｌ１的盐酸３０“Ｉ。测光密度（ｏＤ）值，计算ＮＫ细胞活性。
二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应试验（耳肿胀 各组灌胃给样品，ｑｄ，连续３０ ｄ，在试验第２５天，每鼠
法）
腹部涂５０／－Ｌ二硝基氟苯溶液（涂皮前２４ ｈ脱毛，面积约３
破壁松花粉对调节免疫功能的影响
张暾１，竹剑平２
（１．浙江省浦江县人民医院，３２２２００；２．
ｃｍ×３ ｃｍ）。５
ｄ后用二硝基氟苯溶液１０皿涂抹于小鼠右
２ ２．１ ｄ。
［２］章莉，王玲．茶与健康研究新进展［Ｊ］．国外医学医学地理分
册，１９９９，２１）（３）：１２８—１２９．
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口］．山西食品工业，２０（）【】，（２）：２４－２５．
用．方法：将小鼠随机分为阴性对照组（纯化水）和低、中、高 三个剂量组，分别给予０．２５，０．５，１．５ ｇ・ｋｇ。体重，相当于人 体临床用量的５，１０，３０倍。结果：与阴性对照组比较，松花 粉中、高两个剂量组小鼠血清溶血素抗体积数水平、小鼠腹 腔巨噬细胞吞噬能力、小鼠ＮＫ细胞活性、小鼠抗体生成（溶 血空斑数）和ＣｏｎＡ诱导的小鼠脾淋巴细胞转化，高剂量组 二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应中小鼠左右耳的差值， 差异均有显著性（Ｐ＜（）．０５）；而小鼠胸腺指数、脾指数和阴性 对照组比较，差异均无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论：破壁松花粉 有调节免疫功能的作用。 ［关键词］松花粉；调节免疫；动物试验 ［中图分类号］Ｒ２８５
１６４０
２．８
ＣｏｎＡ诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的测定各组灌胃给
完全培养液调整细胞浓度为５Ｘ １０９个・Ｌ～。试验前２４ ｈ将 ＹＡＣ－１细胞（靶细胞）传代培养，应用前用Ｈａｎｋｓ液洗３次， 用ＲＰＭＩ １６４０完全培养液调整细胞浓度为１
Ｘ
样品，ｑｄ，连续３０ ｄ。动物颈椎脱臼处死，取脾脏，制成脾细 胞悬液，调整细胞浓度为２×１０９个・Ｌ～，将细胞悬液分两孑Ｌ 加入２４孑Ｌ培养板中，每孔Ｉ ｍＬ，一孔加ＣｏｎＡ液５０“Ｌ（相 当于５ ｍｇ・Ｌ１），另一孑Ｌ作为对照，在５％二氧化碳，３７℃培 养７２ ｈ。培养结束前４ ｈ，每孔轻轻吸去上清液０．７ ｍＬ，加入
茶叶科学，１９９９，１９（２）：９３—１０３．
方法 剂量设计 实验设３个剂量组和一个纯化水对照组。
［５］范妮娜，田力，李新，等．桑白皮挥发油诱发小鼠体内淋巴细 胞转化的实验研究［Ｊ］．沈阳医学院学报，２００４，（６）：１４（）一
１４１．
低、中、高３个剂量分别为０．２５，０．５，１．５ ｇ・ｋｇ：１体重，相当 于人体临床用量的５，１（），３（）倍。
［收稿日期］２㈤６—０２—１ ２
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２．３
［９］石根勇，吕中明，陈新霞，等．建立衰老模型的实验研究［Ｊ］．江
苏预防医学，２００３，１４（２）：６３—６４．
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验（半体内法）
各组灌胃给样品，ｑｄ，连续３０ ｄ。动物处死前４０ ｒａｉｎ，每鼠腹 腔内注射２０％（ｖ／ｖ）鸡红细胞悬液１ ｍＬ，处死后再注入２ ｍＬ生理盐水，取腹腔液滴片，３７℃温箱孵育３０ ｍｉｎ，固定染 色，镜检，计数１００个巨噬细胞，计算吞噬率及吞噬指数。
・６３８
ｉ
中国医院药学杂志２００６年第２６卷第５期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ。２００６ Ｍａｙ，Ｖｏｌ ２６，Ｎｏ．５
指标改变规律基本一致一］，本实验即采取Ｄ半乳糖复制衰老 小鼠模型。结果显示，Ｄ半乳糖致衰老模型小鼠各项免疫指
标异常，较好地反映了衰老的病理特征。通过对各组小鼠胸 腺与脾脏指数的计算，衰老小鼠的免疫器官萎缩，功能减退， 淋巴细胞转化能力降低，巨噬细胞吞噬功能下降，外周血ＩＬ－２ 含量降低，证明模型复制成功。Ｔ细胞功能低下可表现为有 丝分裂原ＣｏｎＡ增殖反应能力下降，Ｔ细胞分裂能力下降。茶 多酚可使小鼠淋巴细胞转化能力增高，说明茶多酚通过促进 淋巴细胞增殖，提高小鼠特异性细胞免疫功能而使机体抵抗 衰老。腹腔巨噬细胞的吞噬功能可反映小鼠非特异性免疫功 能状况，巨噬细胞能吞噬多种抗原，对机体起防御和保护作 用，参与机体非特异性免疫反应［１“］。实验结果显示，茶多酚能 使衰老模型小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能升高，表明茶多酚可 以提高机体的非特异性免疫功能，增强机体的非特异性免疫 和免疫监视作用，是其延缓衰老的途径之一。ＩＬ－２是Ｔ淋巴 细胞增殖分化所不可缺少的细胞因子，并且对淋巴细胞、单核 巨噬细胞、ＮＫ细胞的功能具有调节作用［１’］。ＩＩ，２能促进Ｔ 淋巴细胞增殖分化，调控免疫反应，促进抗体和细胞因子产 生，在免疫系统中具有重要作用。衰老小鼠应用茶多酚后ＩＬ－ ２含量升高，说明茶多酚通过提高Ｔ淋巴细胞产生ＩＤ２，增强 了小鼠免疫功能而达到延缓老化作用。 参考文献： ［１］ 陈海霞，谢笔钧．茶多酚的抗氧化作用及其在食品中的应用
每天１次，连续３０ ｄ。在试验第３（）天，每鼠无菌取脾，置于 盛有适量无菌Ｈａｎｋｓ液的小平皿中，用镊子轻轻撕碎，制成
万方数据
中国医院药学杂志２００６年第２６卷第５期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，２００６ Ｍａｙ，Ｖｏｌ ２６，Ｎｏ．５
・６３９・
单细胞悬液，２（）（）目筛网过滤，洗涤，计数，最后ＲＰＭＩ
２．７
应用破壁松花粉后，对小鼠血清溶血素、腹腔巨噬细胞 吞噬鸡红细胞、小鼠抗体生成、小鼠ＮＫ细胞活性的影响结
抗体生成的测定各组灌胃给样品，ｑｄ，连续３（）ｄ。将
果见表１。由表可见，与阴性对照组比较，中、高二个剂量组 均能提高小鼠血清溶血素抗体积数水平、腹腔巨噬细胞吞噬 鸡红细胞的吞噬率、吞噬指数、小鼠抗体生成和小鼠ＮＫ细 胞活性（Ｐ＜ｏ．０５）。对二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应 的影响，高剂量组小鼠右耳重及肿胀度和阴性对照组比较， 差异有显著性（Ｐ＜ｏ．０５）。对小鼠胸腺指数、脾指数三剂量 组和阴性对照组比较，差异均无显著性（Ｐ＞０．０５）。对Ｃｏ— ｎＡ诱导的小鼠脾淋巴细胞转化，中、高剂量组ＣｏｎＡ诱导的 小鼠脾淋巴细胞转化和阴性对照组比较，差异均有显著性（Ｐ ＜０．０５）。见表１。
大学学报，２００５，６（１）：４３—４６．
小鼠血清溶血素测定（血凝法）
各组灌胃给样品，
ｑｄ，连续３０ ｄ。在试验第２５天，每鼠腹腔注射２％（ｖ／ｖ）压积 绵羊红细胞（ＳＲＩＮ２）悬液０．２ ｍＬ，进行免疫。５ ｄ后，取血离 心，收集血清，用生理盐水将血清倍比稀释，３７℃温箱孵育３ ｈ，观察血球凝集程度，计算抗体积数。