大鼠肝脏移植模型制作

大鼠肝脏移植模型制作
大鼠原位肝移植是研究器官保存、肝脏缺血再灌注损伤、免疫抑制剂、移植排斥反应以及免疫耐受机理等方面常用的动物模型。

最初由Lee在1973年报道，经过许多学者的改进，其手术基本稳定，根据肝上下腔静脉吻合方式，大鼠原位肝移植可分为“二袖套法”和“三袖套法”，下面简单的将大鼠肝脏移植的模型制作介绍一下。

一、手术器械
显微外科手术器械包，手术显微镜1台，自制S拉钩（用橡皮筋一端带弯成S形大头针）4个，眼科剪1把，其它外科器械若干及纱布、棉球、棉片和橡皮条等。

二、供、受者大鼠的选择
根据不同的研究目的选择不同的动物品系，在同种移植模型中，一般采用两种纯系健康大鼠，如Lewis大鼠，Brown Norway 大鼠（BN），DA大鼠等，国内应用Wistar，SD大鼠也比较多。

如果是异种移植可以选用豚鼠－大鼠，仓鼠－大鼠等不同品系的动物。

三、术前准备
供、受者术前禁食14h，自由饮水，采用乙醚吸入麻醉麻醉的方法，提高手术的安全性，受者术前肌肉注射阿托品0.03mg，防治分泌物阻塞呼吸道。

四、供者手术
麻醉成功后，经阴茎背静脉注射50U/ml肝素稀释液3.0ml，使供者全身肝素化。

十字切口入腹，经腹主动脉穿刺灌洗供肝；灌洗前，剪开膈肌，阻断腹主动脉，离断胸腔段肝上下腔静脉，灌洗至流出液澄清为止，约需灌洗液20～30ml。

游离肝下下腔静脉，分离结扎离断右肾静脉和右肾上腺静脉，自肠系膜上静脉置管，缓慢注入20ml含肝素的林格氏液，于右肾静脉下方离断肝下下腔静脉，剪开胆总管前壁，近肝端插入外径1.0mm，长4.0mm 的聚乙烯管约2.0mm（可用硬膜外导管制成），结扎固定后远肝端离断之，分离结扎离断肝固有动脉；游离门静脉，结扎离断其分支幽门静脉、脾静脉，于脾静脉下方离断门静脉，锐性分离肝周韧带，结扎左膈下静脉，绕肝上下腔静脉环切膈肌及其腱膜，保留2.0mm
边缘，取下供肝置于4℃林格氏液中保存。

五、血管套管的准备
供肝置4℃冰浴中，作血管套管放置。

（一）二袖套法，肝下下腔静脉和门静脉分别选用外径2.8mm和1.8mm左右的聚乙烯管，门静脉可利用脾静脉汇合处作一喇叭口，用微血管镊穿过自制袖套管管腔，夹住门静脉端后外翻于套管壁，5-0丝线在袖套管烙痕内结扎，外翻固定。

用丝线结扎胆囊颈部，剪除残余胆囊。

（二）三袖套法，肝上下腔静脉选用外径5.0mm，内径3.8mm的聚乙烯管，体长2.0mm，柄长10.mm，体部中央刻有浅槽，袖套前，剪好肝上下腔静脉胸腔开口处，使肝上下腔静脉腔口扩大，自套管口完整穿出，外翻，3-0丝线双重结扎固定，剪除残余膈肌。

六、受者手术
（一）二袖套法供肝植入：腹部正中切口上至剑突，左右侧腹壁各做2根牵引线将腹壁牵
开，将肝下腔隙内小肠推向左下方，以湿纱布覆盖，在右肾静脉上缘平面游离肝下下腔静脉，带牵引线，结扎、切断右肾上腺静脉，游离肝周韧带，结扎左膈静脉，充分游离肝上下腔静脉，带牵引线，结扎切断左肝至食管血管，游离胆总管，在分叉处切断，将远端胆总管翻向下方，游离结扎切断肝固有动脉，在幽门静脉水平上方游离门静脉，依次贴肝用微血管夹阻断门静脉及肝下下腔静脉，在门静脉分叉处穿刺，注入常温生理盐水2～3ml，驱除肝脏内
血液，用小satinsky钳阻断肝上下腔静脉，近肝切断肝上下腔静脉、门静脉和肝下下腔静脉，移出原肝。

将供肝从4℃的冰浴中取出，原位放入肝脏腔隙内，将供肝左侧8-0血管
缝线与受者肝上下腔静脉左侧角缝合，结扎，连续缝合腔静脉后壁，至右侧角时与供肝右侧牵引线打结，再作腔静脉前壁连续缝合至左侧角，生理盐水冲洗血管腔排出气泡，与线尾打结，完成肝上下腔静脉缝合。

经门静脉袖套管注入常温生理盐水2ml，排出供肝内冷灌注液，微血管夹夹闭供肝肝下下腔静脉，将阻断受者门静脉的微血管夹下移至幽门静脉水平，排出门静脉内血液及血块，冲洗血管腔，迅速插入供者门静脉袖套管，在袖套管凹槽内用5-0丝线结扎，移去门静脉微血管夹及肝上下腔静脉satinsky钳，供肝恢复血流，结束无肝期，供肝胆管内有胆汁流出，将受者肝下下腔静脉微血管夹下移至右肾静脉上缘，去除下腔静脉内的血液及血凝块，肝素生理盐水冲洗后立即插入供肝肝下腔静脉下腔静脉袖套管，5-0丝线结扎固定。

将胆总管支架管插入受者胆总管管腔内，5-0丝线结扎，大网膜覆盖
固定，腹腔内注入含青霉素20万u的温生理盐水2ml，关腹。

术后予以复温，完全清醒
后自由进糖水，术后第一天自由进食。

（二）三袖套法供肝植入：与二袖套法肝移植的区别在于肝上下腔静脉采用袖套法吻合将受
者的原肝移出以后，在肝上下腔静脉后方放置0号和3-0丝线各一根，供肝植入原位，供肝的肝上下腔静脉套管插入受者的肝上下腔静脉，环绕袖套凹槽用0号丝线结扎固定，如不可靠加扎一道3-0线，即可完成肝上下腔静脉的套管吻合，其余肝下下腔静脉、门静脉
和胆总管的吻合方法与二袖套法相同。

七、注意事项
1.减少游离肝脏时的机械损伤
在整个供者和受者肝脏游离过程中，自肝下下腔静脉起，依次按逆时针方向操作，尽量避免对肝脏的反复翻动而造成的机械损伤。

尤其在游离心脏停搏供者的肝脏时显得更为重要。

研究发现，在供肝游离过程中的手术操作本身，将会影响Kuppffer细胞的状态，而该细胞在原发性移植物无功能中扮演重要角色。

2.血管的游离
在大鼠肝移植过程中，需要游离的多支供、受者的血管，不仅要防止血管壁损伤所造成的不可逆大出血，而且对于血管周围的筋膜和结缔组织要尽可能剥离干净，以防止在静脉壁外翻完成血管套管时，因残余组织造成对门静脉或肝下下腔静脉的狭窄。

3.缓慢均匀的灌洗
采用经腹主动脉灌洗，这样灌洗液不仅可以经肝动脉入肝，而且经肠系膜上、下动脉和肠系膜上、下静脉后，在经门静脉入肝，从而起到双重灌洗的作用。

供者手术初时理顺肠段，可以防止肠系膜血管的扭曲，在灌洗过程中需要不断的向供肝校注4℃的林格氏液，以保证肝脏内外温度的一致。

同时用棉签轻柔的点拨供肝，以使肝叶血管畅通。

有效的灌洗并不在于灌洗总量的加大，缓慢均匀的灌洗是获取色泽均匀，质地柔软的高质量供肝的重要保障。

4.提高血管吻合质量
在肝上下腔静脉的吻合过程中，防止镊子用力钳夹血管壁而造成血管内膜的损伤，保持适当的针距，保证无张力缝合，并且不宜将缝线收的过紧，防止血管狭窄。

肝上下腔静脉缝合结束以后，不必再次检查吻合口，以防吻合口撕裂。

受者的门静脉和肝下下腔静脉与供肝相应的血管套管连接时，要防止扭曲和成角。

5.缩短无肝期时间
虽然Kamada提出大鼠肝移植中无肝期26min以内尚是安全的，将无肝期和肝下下腔静
脉阻断时间分别控制在18min和20min以内是完全可能的。

这是提高手术存活率，防止
术后并发症的发生。

随着门静脉淤血时间的延长，再灌注后肠道内菌群移位而使内毒素骤升，
由此将激活肝脏Kupffer细胞，大量TNF-α的表达和级联引发的各类细胞粘附分子等诸
多炎症介质将会对供肝以及受者的肺脏产生严重的损伤。

肝下下腔静脉血流的尽早恢复，有利于全身血流动力学恢复稳定，保证重要脏器的有效灌注。

术后肺部感染的发生往往与较长时间的血管阻断有关。

6.控制感染
改善手术条件和饲养环境，并应用抗生素，预防感染。

7.防止胆道梗阻
选用胆总管插管的口径应略大于胆总管的内径，防止钳夹变形，长度不宜超过5mm，防止
胆总管滑入肝内胆管。

此外，插管连接前的冲洗、防止供、受者胆总管连接时的扭曲，减少插管对胆总管内壁的损伤，都有利于减少术后胆道梗阻的发生。