通过AOM及AOM联合DSS建立C57BL6J小鼠结肠癌诱导模型的对比研究

通过AOM及AOM联合DSS建立

C57BL/6J小鼠结肠癌诱导模型的对比研究作者：曾一文黎洁瑶田旷怡于涛许稷豪陈其奎

来源：《新医学》2018年第10期

【摘要】目的探討使用氧化偶氮甲烷（AOM）及AOM联合葡聚糖硫酸钠（DSS）中不同药物剂量、给药周期及暴露时间对C57BL/6J小鼠建立结肠癌诱导模型效果的影响。方法分别予低、中、高浓度AOM（10、15、20 mg/kg，每周1次，共4周，每组24只，AOM对照组24只）或AOM（10 mg/kg）联合DSS（一、二、三循环，小鼠数量分别为50、41、29

只，DSS对照组40只）干预，对给药后不同时间点处死的小鼠结直肠进行大体与组织病理学评估。结果单独使用AOM可使小鼠结肠产生异常隐窝灶（ACF），随着AOM药物浓度和（或）暴露时间增加，ACF数量显著增加（P均

【关键词】氧化偶氮甲烷；葡聚糖硫酸钠；结肠癌；动物模型

Comparative analysis between application of AOM and AOM/DSS to establish C57BL/6J mouse models with colonic carcinogenesis Zeng Yiwen， Li Jieyao， Tian Kuangyi， Yu Tao， Xu Jihao， Chen Qikui Department of Gastroenterology， Sun Yatsen Memorial Hospital， Sun Yatsen University， Guangzhou 510120， China

Corresponding author，Tian Kuangyi， Email： sttupac@yahoocom

【Abstract】 Objective To evaluate the effect of drug dose， cycle of drug administration and exposure time between azoxymethane （AOM） and AOM combined with dextran sodium sulfate （DSS） in the establishment of C57BL/6J mouse models with colonic carcinogenesis Methods Mice were treated with subcutaneous administration of 10， 15 or 20 mg/kg AOM once a week for 4 weeks （n=24 for each dose group and control group）， or with 10 mg/kg AOM followed by one， two，or three cycles of 2% DSS administration （n=50， 41 and 29 for each cycle group， and n=24 for control group） The colon tissues were collected at different time points after drug administration for gross and histopathological examinations Results Single use of AOM could yield aberrant crypt foci （ACF） The quantity of ACF was significantly increased along with the increasing AOM concentration and/or exposure time （all P

【Key words】 Azoxymethane； Dextran sulfate sodium； Colonic carcinoma； Animal model

目前，结肠癌已成为世界第三高发肿瘤，在中国其致死率已达到第4位[12]。结肠癌的主要病理类型为结肠腺癌，人类大部分结肠腺癌呈现“早期癌前病变的异常隐窝灶（ACF）腺瘤腺癌”的发展规律[3]。在结肠癌研究中，使用氧化偶氮甲烷（AOM）这一致癌剂已成为啮齿类

动物结肠癌化学诱导建模的主要方法之一[45]。但不同研究使用AOM的药物浓度及药物暴露时间不一，AOM对小鼠结肠肿瘤的诱导效果结论不一[67]。而在AOM基础上联合使用葡聚糖硫酸钠（DSS）这一促炎剂，在减少建模时间的同时可提高成瘤数量及体积。然而，不同的研究采用不同的DSS给药循环方案，报道的结肠癌成模效果/效率不一，尚未有研究比较DSS不同循环方案小鼠的成模效果/效率，以便研究者根据自己的研究需要选择合适的诱导方案并加以优化[89]。本实验拟研究C57BL/6J小鼠在单独给予不同剂量AOM或AOM联合不同循环方案的2%DSS在不同暴露时间下结肠癌的诱导效率，探寻较为合理的AOM及AOM/DSS给药的诱导方案，为研究结肠癌发生发展的化学诱导模型建立提供动物实验的比较数据，使研究者在根据自己的研究需要选择结肠癌化学诱导方案时有可循的科学研究基础，推动结肠癌发生发展相关的科学研究进展[910]。

材料与方法

一、主要试剂和动物

AOM（Sigma公司，美国），DSS（分子量36000 50000，MP Biomedicals公司，美国）。SPF级C57BL/6J小鼠，雄性，4周龄，256只。小鼠均由中山大学实验动物中心提供，饲养于中山大学实验动物中心，实验室环境温度为（23±3）℃，相对湿度为（55±15）%，昼夜明暗交替时间为12 h/12 h。小鼠进行普通饮食，每3 d更换垫料，水和食物随时供应，饲料与垫料均由中山大学实验动物中心提供。所有有关动物的实验过程均在中山大学实验动物伦理委员会的监督指导下完成，符合实验动物伦理学要求。

二、主要方法

1造模及分组

小鼠经适应性饲养1周（W）后，随机分别单独给予AOM或予AOM联合DSS诱导结肠癌。

对于单独给予AOM处理的小鼠，随机分成4组（低AOM、中AOM、高AOM及AOM 对照组），每组24只，于W1、W2、W3、W4分别给予低、中、高浓度AOM（10 mg/kg、15 mg/kg、20 mg/kg）皮下注射，同期小鼠皮下注射01 ml/10 g生理盐水作为对照。每组分别于W5、W8、W11、W14随机各处死6只小鼠。

对于AOM联合DSS处理的小鼠，随机分为4组（DSS1、DSS2、DSS3及DSS对照组），小鼠于W1皮下注射10 mg/kg的AOM，1周后予2% DSS溶液自由饮用7 d，随后予正常饮用水2周。每1周DSS与2周正常饮用水为1个循环周期，DSS1、2、3组小鼠分别予以循环1次、2次、3次，小鼠数量分别为50只、41只、29只。DSS对照组有40只小鼠，于

W1皮下注射01 ml/10 g生理盐水。DSS1组和DSS对照组分别于W5、W8、W11、W14随机