板蓝根颗粒开发方案

三、临床前研究
新药临床前研究内容 板蓝根 药学评价
药材产地、产量、提取路线和制剂工艺、物质基础及质量标准草案 制订等。
药理研究
药效学、一般药理学、药代动力学及可能的作用机制研究。
毒理评价
急性毒性、长期毒性、特殊毒性（致畸、致癌、致突变）及其它毒 性（刺激性、溶血、过敏、药物依赖性）研究 。
一、药学评价
显微镜检判定板蓝根不同处理方式下的红细胞经流感病毒侵染后的形态学差 异, 通过毛细管电泳结合显微镜镜检、血凝滴度指标进一步阐述板蓝根抗流感病毒 的生化机制。 结果:经过板蓝根保护过的细胞, 能阻止病毒对细胞的吸附, 推测其可能是通过与细 胞膜的作用来保护细胞。 结论:板蓝根通过结合到细胞膜上而起到保护细胞的作用, 有效抑制了流感病毒对细 胞的结合, 从而达到抗病毒的目的。
1.6.2板蓝根颗粒对甲型H1N1 流感病毒感染小鼠平均生存天数及延长生命 率的影响
实验结果提示，板蓝根可明显可延长小鼠的存活天数，与模型组比较差异显 著，提示板蓝根甲型H1N1 流感病毒感染的小鼠有保护作用( 表2)
二、药理研究
1.6.3 病理学检查
空白对照组动物肺脏均未见明显病理改变。阳性对照( 模型) 组动物感染甲型 H1N1 病毒第5 天后肺脏呈弥漫性肺炎改变；阳性药( 达菲) 组部分动物(4 例/10 例) 肺脏病变范围较模型组小，病变程度与模型组基本一致，其余动物(6 例/10 例)与模 型组病变范围与程度基本一致；板蓝根颗粒组部分动物( 2 例/10 例) 肺脏病变范围 较模型组小，病变程度与模型组基本一致，但其数量较阳性药( 达菲) 组，其余动 物(8 例/10例) 与模型组病变范围与程度基本一致。具体病变范围结果见表3
2.4 方法
2.4.1血浆中表告依春的测定 2.4.1.1 色谱条件 2.4.1.2 血浆样品处理 2.4.1.3 血浆中表告依春的工作曲线制备 2.4.1.4 回收率和精密度试验 2.4.2动物试验
SD 大鼠6只, 禁食12 h , 可自由饮水, 给药剂量按表告依春6.8 mg/kg 进行给药。灌胃体积1 mL/100 g 体重。给药前及给药后0.083 , 0.25 , 0.5 , 0.75 , 1 , 2 , 3 , 4 , 6 ,8 , 10 , 12 , 15 h 经眼球后静脉丛取血0.3 mL, 置肝素化试管中, 离心取血浆0.1 mL 进行分析。给药4 h后腹腔补充生理盐水1 mL/100 g 体重。
一、药学评价
1.3.3 分析方法的建立
1.3.3.1色谱条件的确定
1.3.3.2标准曲线的建立
1.3.3.3精密度试验 1.3.3.4稳定性试验 1.3.3.5重现性试验 1.3.3.6加样回收率试验
1.3.4 醇溶液提取工艺条件的研究 1.3.5 醇溶液提取最佳提取工艺的考察
1.3.5.1响应面试验设计 1.3.5.2提取工艺的验证性试验
2.1.1药品名称 2.1.2药材来源 2.1.3性状——本品为浅黄棕色至棕褐色的颗粒；稍有清香气，味微苦。 2.1.4鉴别——表告依春、腺苷的鉴别。 2.1.5检查——粒度、水分、溶化性、装量差异、重金属、砷盐、微生物限度 2.1.6浸出物的测定 2.1.7含量测定
质量标准：板蓝根配方颗粒每袋含板蓝根分别以其 4 种成分计， 尿苷不少于 0.1mg，鸟苷不少于 0.1mg，表告依春不少于 0.2mg，腺 苷不少于 0.1mg。
二、药理研究
2.4.2 数据处理
用矩量法求算药代动力学参数, 即AUC 用梯形面积法计算, tmax和cmax用实测 值进行计算, 用末端相浓度(3 个点)对时间直线回归后求得末端消除速率常数λZ , 从 而计算t1/2 。并用t 检验进行统计。
二、药理研究
3 毛细管电泳法研究板蓝根水提物抗流感病毒的作用机制
板蓝根颗粒 开发方案

姓名：张锐 学号：1522210550015
目
1
前言
录
2
32 4 5
新药的寻找
临床前研究 临床研究
3
4
新药申报与注册
新药研发项目
新药的发现 临床前研究 临床研究
Ⅰ
申报及后续工作
基 础 和 应 用 研 究
发 现 并 筛 选 药 物 来 源
药 学
药 理 学
毒 理 学
期 临 床 期 试 临 验 床 期 试 临 验 床 试 验 Ⅱ Ⅲ
1.6 工艺流程图 1.7包装材料选择——聚丙烯药品包装用复合膜袋 1.8 规格的确定——1.5g/袋 1.9 七批小试样品试验研究——板蓝根配方颗粒的制备工艺、成品质量稳定 1.10 三批中试样品试验研究——板蓝根配方颗粒的制备工艺具有可行性及合
理性。
一、药学评价
2 板蓝根配方颗粒质量标准的研究 采用薄层色谱（TLC）法对板蓝根配方颗粒有效成分表告伊春和腺 苷进行了鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）对腺苷、鸟苷、尿苷、 表告依春进行了含量测定，对板蓝根配方颗粒的质量标准进行进一步的 提高及完善。 2.1 质量标准起草说明
1.5 成型工艺条件的确定
制粒方法、辅料、颗粒性质进行考察，最终确定最佳成型工艺。 取板蓝根饮片，加入水 1.5 倍量，浸泡 1h 后，用 70%乙醇（液料比=12： 1），提取 1 次，时间为 1h，滤过，药渣进行水提，每次加水 8 倍量，提取 2 次，每次1.5h，滤过，合并醇提水提的滤液，滤液减压浓缩至相对密度1.05～ 1.1（580℃），喷雾干燥，加入糊精适量，干法制粒，干燥，整粒，即得。
二、药理研究
1.7 讨论 板蓝根组可明显延长甲型H1N1 病毒感染小鼠的存活天数，提高 存活率，与模型组比较差异显著(P < 0. 05) ，提示板蓝根颗粒对甲型 H1N1 病毒感染致肺部病变具有减轻作用。
二、药理研究
2 板蓝根抗病毒成分表告依春在大鼠体内的药代动力学 2.1 动物：SD 大鼠, 雌雄各半, 体重250 ～ 300 g 2.2 分组：板蓝根溶液组 2.3 剂量：表告依春6.8 mg/kg
风热型感冒（高热、咳嗽痰为黄稠脓性痰，不怕冷，头痛，咽喉痛，舌 苔微黄、口干、出汗多、舌苔白而干燥、脉浮数（较快））
暑湿型感冒（高热、头晕脑涨、心中燥热，容易感到疲倦，无汗、口干 ，伴有呕吐、恶心，尿量少而黄，舌苔黄腻） 西医分类：细菌性感冒、病毒性感冒
二、新药的寻找
板蓝根
板蓝根Radix Isatidis 为十字花科植物菘蓝 Isatis indigotica Fort. 的干燥根，始载于《 神农本草经》，已有2000多年的历史。《中 国药典》1985 年版开始收载。具有清热解 毒、凉血利咽之功效，临床上常用于病毒性 疾病及细菌感染性疾病。 作用： 抗病毒（流感病毒、肝炎病毒、单纯疱疹病毒、
一、药学评价
3 板蓝根配方颗粒初步稳定性的研究
3.1考察内容 样品的性状、鉴别、含量测定、水分、粒度、溶化性及微生物限度检查。 3.2考察方法 本药品为颗粒剂，试验方法采用加速试验和长期试验同时进行。
3.3考察时间
长期稳定性试验：0 月、3 月、6 月，共 3 次。加速稳定性试验：0 月、1 月 、2 月、3 月、6 月，共 5 次。
1板蓝根配方颗粒制备工艺的研究 1.1药材种类
板蓝根饮片。板蓝根又称北板蓝根，气微，味微甜而苦涩。
1.2 有效成分
多数学者还是认可板蓝根中的有效成分为核苷类成分和表告依春。
1.3提取工艺研究
1.3.1提取方法：水提醇沉法 由于表告依春是脂溶性成分，而腺苷是水溶性成分 ，所以为了最大限度的提高有效成分的含量，故采用先醇提再水提的提取工艺 ，增加了板蓝根中有效成分的含量和提取率。提取方式选择加热提取方法，即 热提取法，且固液分离时应注意趁热滤过，使药效物质较少损失。
期 临 床 试 验
填 写 新 药 申 请
后 续 登 记 活 动
IV
一、前
言
感 冒
定义：感冒是由于上呼吸道感染引起的
一种自愈性疾病，是包括鼻腔、咽或喉部急 性炎症的总称，一般7 d 左右就会自行康复。
分类及症状 中医分类：风寒型感冒（怕冷、发低热、无汗、头痛全身痛、痰稀、咳嗽痰为白粘 痰，四肢酸痛、舌苔薄而润，脉浮）
结论：板蓝根颗粒对感冒有一定的治疗效果。
三、毒理评价
• • • • 急性毒性、 长期毒性、 特殊毒性（致畸、致癌、致突变）、 局部用药毒性、
其他种类病毒）
抗菌（金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、流感杆菌 、脑膜炎双球菌等）
抗内毒素、抗炎、解热镇痛以及增强免疫等
板蓝根
化学成分
1、有机酸类化合物 吡啶三羧酸，顺丁烯二酸，2- 羟基- 1, 4- 苯二甲酸和 羟甲基糠酸
2、生物碱类化合物 2.1吲哚类生物碱 2, 5- 羟基吲哚，2, 3- 二氢- 4- 羟基- 2- 氧- 吲哚- 3- 乙腈 ，吲哚- 3- 乙腈- 6- O-β- D- 葡萄糖苷， (E)- 二氧羟苄吲哚酮 2.2 喹唑类生物碱 3- ( 2- hydroxyphenyl)- 4- (3H) - quinazolinone和 isaindigotonet 2.3 其他类型生物碱 依靛蓝双酮 3、微量元素 K，Ca，Mg，Zn，Fe，Cu，Mn，Pb，Hg，Ce, Co,Ni, Cd 和As 其中Ca, Mn, Zn, Fe 含量较为丰富 4、其他化学成分 告依春、表告依春、1 硫氰基-2-羟基-3-丁烯、(+)异落叶 松树脂醇，2- 羟基- 3- 丁烯基- 硫氰酸酯，1- 硫氰酸- 2- 羟基- 3- 丁烯，5 羟甲基糖醛，正丁基-β- D - 吡喃型果糖
1.3.2提取工艺路线确定：第一步选择乙醇作为提取溶剂，以醇浓度、液料比、 提取时间为主要影响因素，通过单因素和响应面试验对醇溶液提取最优条件进 行优化，以其有效成分（表告依春）的含量为考察指标；第二步选择水作为提 取溶剂，选择药材的浸泡时间、加水量、提取时间及次数等以其核苷类（尿苷 、鸟苷和腺苷）和表告依春的总含量为考察指标。
1.3.6 水溶液提取工艺条件的研究
1.3.6.1药材平均吸水量的考察
1.3.6.2水提取工艺条件的考察
1.3.6.3提取工艺的验证性试验
一、药学评价
1.4 浓缩、干燥方法的确定
药材提取后，药液与药渣采用 120 目滤布趁热滤过分离；减压浓缩法，浓 缩至相对密度 1.05～1.15（80℃）；采用喷雾干燥法干燥。
1.5.2病理学检查:无菌取小鼠的肺，福尔马林溶液中固定24 h，脱水，石蜡包埋
、切片，常规HE 染色，显微镜下下观察其病理变化。
1.6 结果 1.6.1板蓝根颗粒对甲型H1N1 流感病毒感染小鼠存活率的影响
实验结果提示，板蓝根可明显降低甲型H1N1 流感病毒感染小鼠的死亡率， 与模型组比较差异显著( P < 0. 05 ) ，提示板蓝根对甲型H1N1 流感病毒感染的小 鼠有保护作用（表1）。
1. 4.2 给药:板蓝根组攻毒2 h 后灌胃给药200 μL、达菲组攻毒2 h 后灌胃给药200 μL，正常对照组及模型组灌胃给予生理盐水200 μL，每日1 次，连续用药5 d。
二、药理研究
1.5 观察与检查
1.5.1 观察指标:用于观察板蓝根对感染小鼠肺组织的保护作用的小鼠共观察14 d
，记录小鼠的死亡数及生存天数，并计算存活率及延长生命率。用于观察板蓝根 对甲型H1N1 流感病毒感染小鼠死亡的保护作用的小鼠在第5 天安乐，取肺组织 留做病理检查。
“板蓝根配方颗粒”贮存条件为：密封 “板蓝根配方颗粒”有效期为：18 个月
二、药理研究
1 板蓝根颗粒的药效学研究——对甲型流感病毒小鼠的作用
1.1 动物：SPF 级雌性BALB / c小鼠，80只，4 ～ 6 周龄(体重18 ～ 20 g)
1.2 分组：小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、达菲组（阳性对照组 ）、板蓝根组4 组。 1.3 剂量：板蓝根组的给药量为4. 67 g / ( kg· d)( 参照临床剂量) ，达菲组 的给药量为0. 03 g / ( kg· d)。 1.4 方法
1.4.1鼠的感染性: 将小鼠乙醚吸入麻醉后，106 TCID50（半数组织培养感染剂量） 病毒液通过滴鼻途径感染小鼠，每只小鼠的接种剂量为50 μL，建立甲型流感病毒 小鼠模型，对照组小鼠经鼻腔滴入等量的生理盐水。通过小鼠肺组织的PCR、肺 组织病理结果可证实甲型H1N1 病毒小鼠模型的成功建立。