分子生物学实验室内部质量控制制度1.doc

分子生物学实验室内部质量控制制度1

分子生物学实验室内部质量控制制度

1.目的

对分子生物学实验室开展的检测项目进行室内质量控制，是为了监测、控制本实验室测定工作的精密度，并监测其准确度的改变，提高常规测定工作的批间、批内标本检测结果的一致性。连续的评价本室测定工作的可靠程度，判断检验报告是否可发出的过程。规范实验室管理，保证室内质控工作能切实执行。

2.范围

检验中心分子生物学实验室检测项目。

3.职责

3.1组长负责具体项目室内质控程序及失控处理程序的制定、执行及监督指导工作，和质控监督员一起撰写室内质控月总结报告和年度总结报告。

3.2工作人员须掌握室内质控方法，遵守相关制度及操作程序，熟练操作。

4.程序

4.1质控品的选择

质控品是保证质控工作的重要物质基础，必须选择合适的质控品，理想的质控品至少具备以下条件：

（1）人血清基质，分布均匀

（2）添加剂和调制物的数量少，无传染性

（3）瓶间差异小

（4）稳定性好，在规定的条件下至少可以保存1-2年，冻干品复融后稳定，2-8℃保存稳定不少于24小时，-20℃保存不少于20天

（5）在使用定值或不定值质控品时，必须在本实验室的检测系统上确定自己的均值和标准差

4.2质控品的正确使用与保存

（1）严格按质控品说明书操作

（2）冻干质控品的复融要确保所用溶剂的质量

（3）冻干质控品复融时加溶剂的量要准确，并尽量保持每次加入量的一致性

（4）冻干质控品复融时应轻轻摇匀，使内容物完全溶解，切忌剧烈振摇

（5）质控品应严格按使用说明书规定的方法保存，不使用超过保质期的质控品

（6）质控品要在与患者标本相同测定条件下进行测定

4.3质控品分析的个数、浓度水平及频率

每个工作日，所有测定项目进行一次室内质控测定，包括二个不同浓度及阴性质控品，与常规标本检测同等条件。

4.4室内质控的实际操作

4.4.1质控品设置、数量

（1）定性检测：已知弱阳性质控样本（基质与待测标本相同）：至少带1份，监测核酸提

取和扩增检测的有效性；已知阴性质控样本（基质与待测标本相同）：至少带1份，判断核酸提取过程中是否发生污染（实验室的以前扩增产物的污染、标本间的交叉污染、强阳性标本气溶胶经加样器导致污染、强阳性标本经操作者手导致污染翻盖离心管在较高温度温育时盖子崩开、扩增反应试剂的污染）。

（2）定量检测：已知高、低质控品（基质与待测标本相同）；已知阴性质控样本（基质与待测标本相同）。

（3）室内质控品在扩增仪中的排列顺序：不宜固定位置，尽可能监测每一个孔扩增有效性。

4.4.2血清质量控制品制备及操作

4.4.2.1质控品均值建立：

（1）暂定均值的建立：20d内得到20个数值，或至少在5d 内，每天作不少于4次重复检测获得20个数值。对数据进行离群值检验（剔除超过3S外的数据），计算出均值，作为暂定均值。

（2）若使用定值质控品，均值必须在实验室内使用自己现

行的测定方法进行确定，质控品说明书上的原有标定值只能作参考。

（3）常规均值的建立：以最初20个数据和三至五个月在控数据汇集的所有数据计算的累积平均数作为质控品有效期内的常规均值，并以此作为以后室内质控图的均值。

4.4.2.2质控品制备：

乙肝病毒室内质控品的制备：

（1）收集本室检测的临床样本，编号QHBV2015-CH代表HBV DNA定量为高值（107copies/ml），QHBL2015-CL代表HBV DNA定量为低值（104copies/ml）。

（2）分别将高值血清、低值血清样本混匀，并分装于0.5ml 的离心管中，每支10µl，编号后-20℃保存。

丙肝病毒室内质控品的制备：

（1）收集本室检测的临床样本，编号QHCV2015-CH代表HCV RNA定量为高值（106copies/ml），QHCV2015-CL代表HCV RNA定量为低值（104copies/ml）。

（2）分别将高值血、低值血清的样本混匀，并分装于0.5ml 的离心管中，每支210µl，编号后-80℃保存。

4.4.2.3 操作：

每次检测过程中将此分装的室内质控品与样本同时检测，记录此标本的检测结果；计算前20次检测结果的平均值作为本批

质控品的靶值。

4.4.3 室内质控图的使用方法

4.4.3.1 描点

a）图中均值线为中心线，±2S为警告线，±3S为失控线。对于同一批号的质控血清不论使用几个月，其靶值均不变化。

b）每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病人的标本同时检测。将日期、检测结果和操作者如实记录在图下方的相应位置，并按前面的方法画出图上的对应点，用直线将该点与前一天的点连接。

c）月底计算当月全部质控血清检测结果的X、S和CV，并进行图形分析和小结，将质量控制图存入质控资料档案。

4.4.3.2 图形分析

a）如果在±3S线以外，则为失控，应立即报告有关负责人，迅速查找原因。必要时复测标本，然后方可发出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。

b）如果在±2S线以外，或出现连续6点以上在一侧等规律变化，均应即使向有关负责人反映，并积极查找原因。但当天的检验结果一般可以发出。

4.4.3.3 通过观察图形的规律性变化进行误差分析，消除误差来源

a）曲线漂移：提示有系统误差，准确度发生了一次性的向

上或向下改变。这种变化往往是由于一个新的情况引起的。如更换不同批号试剂，启用新批号的质控血清、操作人员的变换等。在找原因时，应重点注意“漂移”前后发生了那些变动的因素。

b）趋势性变化：向下或向上的趋势性变化表明检测的准确度发生了渐渐地变化。这种变化往往是由于一个逐渐改变的因素造成的。如质控血清的降解，试剂效价的降低等。

c）连续多点分布在靶值同一侧：目前，一般认为质控血清的检测结果连续6天以上出现在靶值同一侧，则应迅速查找原因，争取尽快使之回复围绕在靶值随机分布的状态。因为按照统计学原理，由纯随机误差造成的这种情况的可能性很小。连续6天以上出现在靶值同一侧可能性小于1.5％。因此凡出现连续6天以上出现在靶值同一侧者均有可能存在非随机误差因素。如结果与靶值偏离并不太大，不会给临床使用带来太大影响时，一般检验报告可以照常填发。

d）其他规律变化：（周期性等）

4.4.3.4 通过图形的资料对比进行误差分析，消除误差来源

a）每个月的月底将该月的全部质控血清检测结果的X和S 与该批测定的X和S进行比较。如果X发生了变化，说明准确度发生了变化提示有非随机误差存在。如果当月S不同则表明检测的精密度发生了变化。

b）将使用同一批号质控血清的CT值的X和S按月份列出。如果X逐月上升，应考虑保存不当造成的试剂效价降低或质控血清本身出现降解。如果各月份X基本一致而S逐月加大，则