植物组织培养PPT

3、为了探究6-BA和IAA对某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影响，某 研究小组在MS培养基中加入6-BA和IAA，配制成四种培养基(见下表)， 灭菌后分别接种数量相同、生长状态一致、消毒后的茎尖外植体，在适宜 条件下培养一段时间后，统计再生丛芽外植体的比率(m)，以及再生丛芽 外植体上的丛芽平均数(n)，结果如下表。
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4. 生根培养基：1 000mL MS 培养基+含 0.38mg NAA 的溶 液+30g 蔗糖+20g琼脂，再加蒸馏水至 2 000mL，混合均匀 ，加热至琼脂融化后，分装至 100mL 的三角瓶中，每瓶 40mL，共 50 瓶。灭菌操作同步骤 3。
三角瓶加上封口膜后 1kg 压力下在灭菌锅中灭菌 20min
基中,盖上 封口膜 。
生芽培养 在日光灯下保持18~25 ℃ 的温度培养,每天 光照 不少
于14.5 h,培养(2~3周后)至长出 丛状苗
生根培养 在 无菌 条件下,将丛状苗转入 生根 培养基中,在
适宜条件下继续培养
移栽和定 植
待生根后,将苗移至 草炭土或蛭石 中,逐渐降低 行 锻炼 。最后转移至土中培养( 定植 )
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4、培养
⑴在日光灯下保持18-25℃培养，每天的光照不少于 14.5h ⑵先生芽培养，然后再生根培养 2～3 周后将生长健壮的丛状苗 在无菌条件下一个个 转入生根培养基中，在上述条件下继续培养。
注意事项：
①无菌箱中培养并定期消毒
②如果培养顺序颠倒，则不容易诱导芽的形成
③一般情况下，愈伤组织形成不需要光，试管苗形成后需要见光培养
外植体上残留的杂菌会和外植体争夺培养基中的营养物质，并 且产生大量对外植体有害的物质，导致外植体死亡，所以要先 消毒再接种。
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3、接种 ⑴将已消毒的外植体插入培养基，形态学上端朝上。 ⑵在酒精灯旁，每个锥形瓶接种2-3外植体。
注意事项： ①注意无菌操作 ②注意别烫伤植物材料 ③注意植物材料插入方向
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2、激素的用量比例对细胞分裂和分化的影响
生长素／细胞分裂素比值 比值高时
结果 促根分化，抑芽形成
比值低时 含量少且比值适中
促芽分化，抑根形成 促进愈伤组织生长
植物组织培养时，使用人工合成的激素，还是植物中存在的 天然激素？为什么？
人工合成的激素，原因：植物中存在的天然激素都有相应的 使之分解的酶，这样，天然激素在植物体内作用和存在的时 间就较短，而人工合成的激素在植物中没有相应分解它的酶 ，所以作用和存在的时间长，作用效果明显。
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【典例】辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域。辣 椒素的获得途径如图。
⑴图中①和②分别表示辣椒组织培养中细胞的 脱分化 和 再分化 过程。
⑵图中培养外植体的培养基中常用的凝固剂是 琼脂 。培养基中的生长素 和细胞分裂素用量的比值 低 (选填 “高”或“低”)时,有利于芽的分
化。对培养基彻底灭菌时,应采取的灭菌方法是 高压蒸汽灭菌 。
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0.5 60.0 5.0 细__胞_比__分率__裂_和_素_外_类植生体长上调的节丛剂芽。
⑵在该实验中，自变量是I_A__A_的___浓__度__，因变量是_平__均__数___________________，
⑶从实验结果可知，诱导丛芽总数最少的培养基是___1_____号培养基。
⑷为了诱导该菊花试管苗生根，培养基中一般不加入_6__-_B_A___(填“6-BA”
⑴下列设备及用品中,该实验无需使用的是 D .
A．酒精灯 B．灭菌锅 C．封口膜 D．玻璃刮刀
⑵培养过程中涉及的培养基有: MS 培养基、发芽 培养基、 生根 培养
基。与微生物培养基相比,植物组织培养一般要添N加AA
B、A
作为生长调节剂。
⑶离体组织接种后脱分化形成愈伤组织 ,在不同配比激素的诱导下,依次经
1、外植体带菌
2、培养基及接种 器具灭菌不彻底
3、接种操作时带入
4、环境不清洁 26
植物组织培养用的培养基，含有植物生长发育所需要的各 种营养物质，这些营养物质同样为细菌等微小的生物提供了适 合的营养。在这种培养基上，细菌等微小的生物比植物细胞具 有更强的新陈代谢能力，它们比植物细胞生长、繁殖得更快， 而且它们会产生毒素，使培养的植物细胞很快中毒死亡。因此， 植物组织培养要想取得成功，必须有效地防止细菌等的污染， 保证培养材料、培养基、培养用具完全无菌。为了达到这一要 求，就要在植物组织培养过程中进行一系列的消毒、灭菌，并 且要求无菌操作。
培养基 浓度/mg·L－1 编号 6BA IAA
m/%
n/个
回答下列问题： ⑴按照植物的需求量，培养
1
0
76.7 3.1
基中无机盐的元素可分为
2 3
0.5
0.1 0.2
77.4 66.7
6.1 5.3
大__量__元__素__和_微___量__元__素__两类。 上述菊培花养再基生中丛，芽6外B植-A体属的于
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5、移栽锻炼 将生根的苗从锥形瓶中移至草炭土或蛭石中，用玻璃罩或 塑料布保持80%以上的湿度，2-3天后打开玻璃罩逐渐降 低湿度进行锻炼，直到将罩全部打开处于自然湿度为止。
6、定植 苗健壮后移至土中培养（定植），即可长成植株并开花。
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例题：右图是实验室进行植 物组织培养的一般过程。请 回答下列问题：
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防止外植体带菌植、物保组证织培培养养基的及条接件种器 具彻底灭菌、严格遵守无菌操作规程
无菌环境
一定的温度
MS培养基
一适定时的光照
含有全部营养成分的培养基
适量空气 适合的PH
适宜的外植体 植物激素比例合适
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MS培养基配方表：
由 大量元素 、微量元素和 有机成分 三大成分组成
其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐 含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要
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成分
MS培养基中各成分的作用 作用
微量和大量元素
提供植物细胞生活所必需的无机盐
蔗糖
提供碳源，维持细胞渗透压
甘பைடு நூலகம்酸、维生素、 满足离体植物细胞在正常代谢途径受一定影 烟酸、肌醇等 响后所产生的特殊营养需求
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植物激素和人工合成的植物激素
天然植物激素
植物激素类似物
生长素 细胞分裂素
萘乙酸（NAA） 苄基腺嘌呤（BA）
⑵脱分化和再分化过程中都需要植物激素发挥作用
⑶因植物细胞都具有全能性,故菊花组织培养实验中 选材不会影响实验结果
⑷野生菊花苗段在接种前要用酒精和次氯酸钠溶液 进行消毒,再用自然水清洗。
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植物组织培养技术
1、概念：
取一部分植物组织，在 无菌 的条件下接种在 培养基上，给予一定的 温度 和 光照 ，使 之产生 愈伤组织 ，或进而生根发芽，培养为成 熟植株的技术。
结果 诱导芽生成 愈伤组织继续生长而不分化 诱导根生成
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2. 萘乙酸(NAA)需用少量 0.1mol/L 氢氧化钠溶液溶 解，苄基腺嘌呤(BA)需用少量0.1mol/L 盐酸溶解。也 可配成母液冰箱中保存。
3. 发芽培养基：3 000mL MS 培养基+含 1.5mg BA 的溶液+含 0.02mg NAA的溶液+30g 蔗糖+40g 琼 脂，再加蒸馏水至 4 000mL，混合均匀，加热至琼脂 融化后，通过三角漏斗分装至 100mL 三角瓶中，每瓶 40mL，共 100 瓶。三角瓶加上封口膜后 1kg 压力下 在灭菌锅中灭菌 20min。
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(3)基本过程
①愈伤组织：由离体的植物组织或细胞经 脱分化 形成的一 种 相对没有分化 的活的薄壁细胞团组成的新生组织。 ②脱分化：又叫去分化，是由_高__度__分__化___的植物组织或细胞产 生_愈__伤___组__织__的过程。 ③再分化：愈伤组织继续培养，重新分化成_根__或___芽__等器官的 过程。
2、原理： 植物细胞的全能性 。
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3、培养基 ⑴MS培养基：由 大量元素 、微量元素 和 有机成分 组成。可将 各成分分别配成浓度为配方的5～10倍的 母液 ，用时稀释 ⑵发芽培养基：由MS培养基、 BA 溶液、 NAA 溶液、蔗糖和 琼脂，再加水混合均匀。用 高压蒸汽灭菌 法灭菌后待用
⑶生根培养基：由MS培养基、NAA 溶液、蔗糖、琼脂和水混合 ⑷培养基中植物激素的配比与细胞的分化：
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菊花组织培养操作步骤:
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1、配制MS培养基 ⑴配制各种母液→配制培养基→灭菌
⑵培养基由大量元素、微量元素和有机成分组成
在菊花组织培养中，可以不添加植物激素，因为其茎段 培养比较容易
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2、外植体消毒 一般选择未开花植株的茎上部新萌发的侧枝 若使用自然生长的茎进行组织培养，则可取一段茎在 70%的乙醇中浸泡10分钟，在放入5%的次氯酸钠溶液 中浸泡5分钟，然后用另一次氯酸钠溶液浸泡5分钟，最 后在超净台中用无菌水冲洗，将茎的切段培养在生芽培 养基中。
植物组织培养
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一般不需要光
取一部分植物组织,在无菌的条件下接种在培养基上,给予一定的 温度和光照,使之产生愈伤组织,或进而生根发芽,培养为成熟植株 的技术。
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1．植物组织培养的基本过程
(1)理论基础：植物细胞的_全___能__性____。
(2)细胞分化：在植物的个体发育过程中，细胞在 __形__态____、__结__构____和生理功能上出现__稳__定__性__差___异__的 过程。
时, 大量元素 、 微量元素 和有机物要浓缩5～10倍。 细胞分
⑶该过程中a、c的启动关键在于培养基中所加生长素 和 裂素 的浓度配
比。
植物细胞具有全能性
⑷离体的植物细胞能发育成完整植株的原因是
。
⑸醋杆菌是生产苹果醋必用的菌种,可以从食醋中分离得到纯化的醋杆菌。 扩大培养醋杆菌时,一般采防用止平培板养倒皿置盖培上养凝,结原的因水是珠落入培养基造成污30染。
从历状苗 和生根苗两个阶段,形成试管苗。定植前还需要将试管苗移
栽至草蛭炭石土或
中继续培养,其目湿的度是锻炼/炼苗(适应土壤种植)
。
⑷下表所列B 该实验设备、用品及材料与其灭菌或消毒方法的对应关系中,
错误的是
。
A. 三角瓶 高压蒸汽灭菌 B. 培养基 G6玻璃砂漏斗过滤
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[判一判]
⑴实验过程中先使茎段生根,再使生根苗长叶
或“IAA”)。
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2017/4 回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题：
⑴制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳 酸菌。取少量酸奶，用无菌蒸馏水稀释后，再用 ____接__种__环____蘸取少量的稀释液，在MRS 乳酸菌专 用培养基的平板上划线，以获得乳酸菌单菌落。下 图所示的划线分离操作，正确的是___B_____。
湿度 进
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理论依据
菊花组织培养 植物细胞全能性
基本过程
离体的植物组织、器官 愈伤组织 根、 芽 完整植株
培养基 影响因素 选材（细胞类型） 幼苗处理 自然生长茎段消毒
MS培养基、生根、生芽培养基 材料种类、营养、激素、pH、温度、光照
体细胞 降低湿度锻炼 70%乙醇、5%次氯酸钠浸泡，无菌水冲洗
比例 细胞分裂素浓度>生长素浓度 细胞分裂素浓度=生长素浓度 细胞分裂素浓度<生长素浓度
结果
诱导芽的形成 愈伤组织不分化 诱导根的形成
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菊花组织培养操作步骤:
制备离体 取无菌培养的菊花幼苗用无菌镊子和无菌解剖刀切成 植物组织 几段,或取自然生长的茎充分消毒 ,用无菌水 清洗后,
切成几段,每段至少有 1 张叶片 接种 在 酒精灯火焰 旁,将切取的茎段接种到 生芽 培养
⑶图中外植体的消毒所需酒精的体积分数是 70% ，除此以外，还
需用到 5%次氯酸钠溶液 。用酶解法将愈伤组织分离成单细胞时,常用的
酶是纤维素酶和 果胶酶 。
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2、下面是宁夏农林科学院进行苹果试管苗培养的一般过程:
⑴请填写a～c所表示的内容。a. 脱分化 ； b. 愈伤组织 ；c. 再分化 。
⑵实验室一般使用保存的培养基母液来制备MS固体培养基,配制母液
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思考:
1、在整个植物组培的操作过程中，是如何来实现无菌环境的？ ⑴培养基的灭菌；（ 高压蒸汽灭菌 ） ⑵外植体的消毒；（ 酒精、次氯酸钠 ） ⑶接种的无菌操作；（ 超净台酒精灯火焰旁 ） ⑷无菌箱中的培养；（ 无菌箱定期消毒 ） ⑸移栽到草炭土或蛭石中进行湿度锻炼。（ 生存环境消毒 ）
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污染途径
植物中存在的天然激素都有相应的使之分解的酶，这样，天 然激素在植物体内作用和存在的时间就较短，而人工合成的 激素在植物中没有相应分解它的酶，所以作用和存在的时间 长，作用效果明显。
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生长素和细胞分裂素在植物组织培养中的相互作用
比例 细胞分裂素浓度>生长素浓度 细胞分裂素浓度=生长素浓度 细胞分裂素浓度<生长素浓度