谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定

谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定

一、实验目的 1.用纸层折法观察肝脏丙转氨酶ALT的转氨作用 2.用分光光度法测定血清丙转氨酶的活力 3.学习治疗检测SGPT的方法及原理 4.了解检测肝损伤模型的制备及SGPT在科研中的应用。二、仪器与试剂1实验材料动物肝脏2实验试剂10.9NaCl溶液2海砂31谷氨酸溶液

1KOH溶液中和41丙酮酸钠溶液用1KOH溶液中和

50.1KHCO3溶液60.025一溴乙酸溶液用1KOH中和72乙酸溶液8酚的饱和水溶液将2份酚和2份水按重量计算混合

放入分液漏斗中振荡。静止24h以后分层将下部酚层放入瓶

中备用。新配制的酚展层剂可以反复使用1周。90.1水合茚三酮的正丁醇溶液100.1标准谷氨酸溶液110.1标准丙氨酸溶液121KOH溶液谷丙转氨酶活性的鉴定纸层析法一、实验原理观察肌肉糜中谷丙转氨酶所催化的氨基移换反

应。通过纸层析法检查底物谷氨酸的减少和产物丙氨酸的生

成。为防止丙酮酸被肌肉糜中的其它酶所氧化或还原在反应

系统中加入了抑制剂溴乙酸。二、实验操作 1.谷丙转氨酶提取液制备2g肝脏0.9NaCL 6mL海砂200mg在低温下研磨成浆用稀薄的脱脂棉过滤得提取液滤液不清。 2.转氨作用

取试管2支按下表加入试剂加入试剂的单位为mL 试剂对照管测试管1谷氨酸0.50 0.50 1丙酮酸钠0.50 0.50

0.1KHCO3 0.50 0.50 0.025一溴乙酸可不加0.25 0.25 煮沸