TLC-SERS法快速检测降压类中药中非法添加的四种化学成分

第３４卷，第４期 光谱学与光谱分析Ｖｏｌ畅３４，Ｎｏ畅４，ｐｐ９９０‐９９３

２０１４年４月 ＳｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙａｎｄＳｐｅｃｔｒａｌＡｎａｌｙｓｉｓＡｐｒｉｌ，２０１４　

ＴＬＣ‐ＳＥＲＳ法快速检测降压类中药中非法添加的四种化学成分

朱青霞１，２，曹永兵１，２，曹颖瑛１，２，陆　峰１，２倡

１畅福建中医药大学药学院，福建福州　３５０１０８２畅第二军医大学药学院，上海　２００４３３

摘　要　建立了薄层色谱（ＴＬＣ）与表面增强拉曼光谱（ＳＥＲＳ）联用方法对降压类中药中四种非法添加的化学成分，即盐酸尼卡地平、甲磺酸多沙唑嗪、盐酸普萘洛尔及氢氯噻嗪进行快速检测的新方法。利用ＴＬＣ法将掺杂成分与中药基质进行简单分离，采用ＳＥＲＳ法对薄层板上的微量物质进行定性检测。实验中通过优化银胶浓度和薄层展开体系，并考察掺杂成分的最低检测限，初步建立可用于降压类中药非法添加化学成分的ＴＬＣ‐ＳＥＲＳ检测方法。结果表明，该方法用于检测这四种化学成分时专属性较好，检测限低可至０畅００５μｇ，最终检测出十种降压类中药中有两种非法添加了化学成分。本方法简便快速，能实现降压类中药中非法添加化学成分的快速检测，有望成为中药掺杂化学成分的现场检测的新方法。

关键词　薄层色谱；表面增强拉曼光谱；中药；非法添加

中图分类号：Ｏ６５７畅３ 文献标识码：Ａ ＤＯＩ：１０畅３９６４／ｊ畅ｉｓｓｎ畅１０００‐０５９３（２０１４）０４‐０９９０‐０４

　收稿日期：２０１３‐０６‐３０，修订日期：２０１３‐１１‐０９

　基金项目：国家重大科学仪器专项项目（２０１２ＹＱ１８０１３２）和上海市科委重点科技攻关项目（１１４３１９２２５０２）资助　作者简介：朱青霞，女，１９８９年生，福建中医药大学药学院硕士研究生 ｅ‐ｍａｉｌ：ｚｑｘ１９８９０３２８＠ｈｏｔｍａｉｌ畅ｃｏｍ

倡通讯联系人 ｅ‐ｍａｉｌ：ｆｅｎｇｌｕｆｅｎｇ＠ｈｏｔｍａｉｌ畅ｃｏｍ

引　言

中药副作用小，对一些慢性病和疑难杂症具有特殊疗效，但服用时间长，起效相对较慢。近年来，一些不法分子为了牟取暴利，在中药制剂中擅自非法添加功效相似的化学药物，这种造假现象屡禁不止，其中降压类中药制剂是被添加情况较严重的品种之一。患者在不知情的情况下，长期服用含有化学降压药物的中药制剂，极易造成多种不良反应甚至危害生命。因此，亟需建立一种能够快速筛查降压类中药掺杂化学成分的现场检测方法。

结合药品快检的实际需求，用于中药掺杂现场快检的方法应当具备专属性强、灵敏度高、简便、快速并能实现现场检测等特点。对于中药掺杂的现象，目前研究较多的检测方法是ＬＣ‐ＭＳ［１‐３］，尽管该方法准确、可靠、灵敏度高，但其费用昂贵，且分析周期长，无法实现现场检测。表面增强拉曼光谱（ｓｕｒｆａｃｅ‐ｅｎｈａｎｃｅｄＲａｍａｎｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ，ＳＥＲＳ）是近年研究较多的现场检测方法，它能提供分子振动能级的指纹图谱，信号强度为常规拉曼的１０４～１０７倍，将其用于定性鉴别具有灵敏度高、特征性强、检测时间短等［４‐６］优点。考虑到中药体系的复杂性，在对其掺杂成分定性鉴别之前应进行适当分离。ＴＬＣ作为经典的分离分析方法，具有经济、快速、可靠等优点，但其用于定性鉴别时检测手段原始、结果稳定性差，且需要随行对照及显色剂，不利于现场检测。若将ＴＬＣ法与ＳＥＲＳ法相结合，利用ＴＬＣ实现中药复杂体系的简单分离，再利用ＳＥＲＳ实现待检成分的定性鉴别，两种方法互相补充，简便、快速、灵敏度高、专属性强并能实现现场检测。目前，ＴＬＣ‐ＳＥＲＳ联用技术已被用于水污染的现场检测［７］、中草药中立体异构体的定性鉴别［８］、中草药中结构类似物的定性鉴别［９］、血液中吗啡的测定［１０］等领域，但其在中药掺杂化药快速检测方面的研究尚未见文献报道。

本研究建立了ＴＬＣ‐ＳＥＲＳ方法检测降压类中药中非法添加的盐酸尼卡地平、甲磺酸多沙唑嗪、盐酸普萘洛尔及氢氯噻嗪等四种化学成分，有望成为中药掺杂化药现场快速检测的备选方法。

１　实验部分

１畅１　仪器与试剂

便携式拉曼光谱仪（ＢＷＳ４１５，Ｂ＆ＷＴｅｋＩｎｃ畅，ＵＳＡ），激发波长７８５ｎｍ，分辨率５ｃｍ－１。离心机（ＴＧ１６‐ＷＳ，上海卢湘仪离心机有限公司）。ＫＱ‐２５０ＤＢ型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。ＷＦＨ‐２０３Ｂ型三用紫外分析仪（上海精科实业有限公司）。

盐酸尼卡地平（Ａ，批号：１００５８６‐２００４０１）、甲磺酸多沙唑嗪（Ｂ，批号：１００５６６‐２００４０１）、盐酸普萘洛尔（Ｃ，批号：１００７８３‐２００４０１）、氢氯噻嗪（Ｄ，批号：１００３０９‐２０１１０３）标准品均购自中国药品生物制品检定所；硝酸银、柠檬酸三钠（ＡＲ，国药集团化学试剂有限公司）；薄层板ＨＳＧＦ２５４（涂层厚度：（０畅２±０畅０３）ｍｍ，硅胶粉粒度：（８±２）ｍｍ≥８０％，烟台江友硅胶开发有限公司）；其他试剂均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；实验用水为二次蒸馏水；实验中所用的十种降压中药样品（样品编号依次为１，２，３，４，５，６，７，８，９，１０）均由山东省食品药品检验所提供。

１畅２　溶液制备

对照品溶液的制备分别称取Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ标准品适量，加甲醇溶解，分别制成每１ｍＬ含１ｍｇ的溶液，作为对照品溶液。

模拟阳性样品溶液制备取某种降压样品适量，研细，精密称取Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ适量加入其中，加甲醇溶解，超声１０

ｍｉｎ，离心后取上清液，使各个成分添加量均为１％，作为模拟阳性样品溶液，备用。

真实样品溶液制备取样品适量（片剂一颗，胶囊一粒取内容物），研细，混匀，加甲醇５ｍＬ，超声２０ｍｉｎ，以１００００ｒ・ｍｉｎ－１，离心５ｍｉｎ，取上清液备用。

１畅３　银胶溶液制备

取９０ｍｇ的硝酸银溶于５００ｍＬ去离子水中加热至沸腾，加入１０ｍＬ１％的柠檬酸钠，然后保持沸腾１ｈ，冷却［１１］。取４ｍＬ银胶离心后移去３５００μＬ上清液，加入５００μＬ超纯水，得到４倍浓缩的银胶溶液，备用。

１畅４　检测方法

吸取对照品溶液和样品溶液各１μＬ，点于同一硅胶ＨＳ‐ＧＦ２５４板上，以二氯甲烷‐甲醇‐水（９∶１∶０畅１）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（２５４ｎｍ）下检视定位。在阳性样品色谱条带中与对照品相同Ｒｆ处滴加５μＬ银胶，用便携式拉曼光谱仪对滴加银胶的点位直接进行拉曼检测，积分时间１０ｓ，激光功率１００ｍＷ。

２　结果与讨论

２畅１　银胶浓度考察

银胶的浓度会影响ＳＥＲＳ检测信号［１２］。实验考察了点样沉积量为１μｇ时，不同浓度（浓缩１～１０倍）银胶的表面增强效果，以浓缩倍数为横坐标，谱图中最强峰（其中Ａ为１０００ｃｍ－１、Ｂ为７０３ｃｍ－１、Ｃ为１３８１ｃｍ－１、Ｄ为１０９５ｃｍ－１处）的相对强度为纵坐标作图（图１），结果发现浓缩后银胶的增强效果放大，随着银胶浓度的增加，拉曼信号逐渐增加，随后达到相对稳定的水平后有所降低。可能是因为［１３］银胶浓度适当增加有利于银纳米粒子形成单层聚集，此时纳米银增强效果最佳但浓度过大，银纳米粒子在薄层板上聚集，不再成单层分布，这种递增趋势便不太明显，若银纳米粒子发生团聚，可能会导致拉曼信号减弱。且浓缩倍数过大时，银胶颜色加深，滴加在色谱斑点上，易被激光点燃，不利于ＳＥＲＳ谱采集。综合考虑，最终采用浓缩４倍的银溶胶进行实验，此时银胶浓度为２畅５×１０－４ｍｏｌ・Ｌ－１。

Ｆｉｇ畅１　Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ

ａｎｄｒｅｌａｔｉｖｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙｏｆｈｉｇｈｅｓｔｐｅａｋ

２畅２　薄层色谱条件的优化

实验中考察了氯仿‐甲醇‐水９∶１∶０畅１及苯‐乙酸乙酯‐异丙醇‐浓氨１２∶３∶３∶０畅２的展开效果，结果均较合适。考虑到药品快检方法应尽量简便快捷，最终选用更为简单的氯仿‐甲醇‐水体系作为展开剂；由于氯仿毒性较大，以二氯甲烷替代，展开效果也较理想。因此，最终采用二氯甲烷‐甲醇‐水９∶１∶０畅１作为展开剂。在考察最低检测限时，通过配制不同掺杂量的阳性样品，固定点样体积为１μＬ，从而得到不同的点样沉积量。检测四种化学成分的最低检测限为０畅０１％～０畅１％，已明显低于常规的掺杂量１％～５％。实际检测时，也可以通过增加点样体积来增大点样沉积量，从而进一步提高检测结果的灵敏度与准确性。

２畅３　模拟阳性样品检测

四种对照品分离效果较好，Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ的Ｒｆ值分别为０畅８３，０畅４７，０畅３５，０畅２１。模拟阳性样品溶液中其他组分对四种对照品斑点无干扰，阴性样品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上无斑点。从图２可以看出模拟阳性样品色谱中在与对照品色谱相应位置的ＳＥＲＳ谱，与相应对照品色谱斑点ＳＥＲＳ谱的主要特征峰一致，

表明本方法专属性较好。

Ｆｉｇ畅２　ＴＬＣ‐ＳＥＲＳｒｅｓｕｌｔｓ

ａ：ＳＥＲＳｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆｓｐｏｔｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｂａｎｄｏｆｓｔａｎｄａｒｄｓｕｂ‐ｓｔａｎｃｅ；ｂ：ＳＥＲＳｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆｓｐｏｔｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｂａｎｄｏｆｐｏｓｉｔｉｖｅｓａｍｐｌｅ

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第４期 光谱学与光谱分析