猪蓝耳病讲课材料分析

B.流行状况 经典PRRSV全国性分布。高致病性PRRSV爆发流行，除西藏 外，其他省份均有分布。欧洲型目前仅发现于北京和内蒙。 流行毒株多且毒株变异迅速。
国内PRRS疫苗使用情况
产品名称 毒株名称 生产企业 批准时间
PRRS 灭活苗
PRRS 活苗 PRRS活苗 高蓝灭活苗 高蓝活苗
Ch-1a 株
猪高致病性蓝耳病免疫效果评估
河北省动物疫病预防控制中心 2011年3月29日
主要内容



蓝耳病简介 蓝耳病目前流行情况 疫苗应用情况 疫苗免疫策略及免疫评估 ELISA实验介绍
蓝耳病（PRRS）简介
蓝耳病 是由PRRSV引起的，以母猪繁殖障碍、早产、流产、死胎、木乃伊 胎及仔猪呼吸综合征为特征的高度接触性传染病。

蓝耳病的抗体监测与免疫评估
抗体监测

免疫荧光实验（IFA）


免疫过氧化物酶单层分析法（IPMA）
中和实验（SN）感染后1~2个月产生。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
免疫胶体金技术 效果有待评估
ELISA特点

特异性强、敏感性高 可进行批量样品的检测 操作简便、节省时间 结果客观准确 安全性高
B.亚型分布情况 美洲型分布范围大于欧洲型，前者主要分布于美洲和亚洲， 后者主要集中于欧洲。新型变异株分布范围小于经典亚型。
蓝耳病（PRRS）全球流行现状
2009年PRRSV全球分布图（OIE数据）
高致病性猪蓝耳病（NA4型）全球分布图
蓝耳病（PRRS）流行现状
国内流行状况 A.起源 1995年 北京和广东引种。年末北京及周边地区大规模爆发 PRRS。1996年分离PRRSV。

病猪主要通过呼吸道和消化道排毒。飞沫、唾液、粪便、血液和乳 及精液均能检测到病毒。其中粪便是高致病性PRRSV的重要排毒途径 之一。
蓝耳病（PRRS）流行现状
全球流行状况
A.原因：引种、动物及其产品国际贸易、免疫接种。 据OIE疫情统计数据表明，PRRSV已蔓延全球大多数养猪 国家。未发现的地区有新西兰及澳大利亚，阿曼和伊朗 （不消费猪相关产品）。
Βιβλιοθήκη Baidu
B.欧洲型(EU-PEESV)
1991年荷兰分离LV株 2006年北京分离BJEU06-1 2006年立陶宛分离Eigir株 2007年白俄罗斯分离Lena株
致病机理

PRRSV 猪 肾脏、脑（JXA1）
巨噬细胞中复制
淋巴器官及肺脏

感染24h后，血液中病毒滴度迅速增加，造成病毒血症。7-14天在血 清、淋巴结和肺脏中病毒滴度达到最大峰值。
蓝耳病的抗体监测与免疫评估
ELISA试剂盒的选用 1、以核衣壳蛋白（N蛋白）作为主要包被抗原的 PRRSV抗体间接ELISA检测试剂盒 2、以GP蛋白作为包被抗原的PRRSV抗体间接ELISA检 测试剂盒
有 效！
包被不同蛋白试剂盒之间的区别
蛋白
N
优点
毒株间保守性高（80%） 活毒接种后抗体在10天出现
主要蛋白的作用
非结构蛋白

Nsp1α、Nsp1β、Nsp2~Nsp8、Nsp9~Nsp12。高致病性 PRRSV（如JXA1株）在Nsp2区存在特异的30多个氨 基酸缺失。因此可作为PRRSV变异的独特标记。
蓝耳病病毒分型
A.美洲型（NA-PRRSV）
1992年美国分离VR2332株 1996年北京分离BJ-4株和Ch-1a株 1997年美国分离JA-142株 2001年美国分离MN184B株 2006年 江西分离NVDC-JXA1株
试剂盒的选择


N 蛋白不能诱导产生病毒中和抗体，因此以N 蛋白作为包被抗原的ELISA 试剂盒无法反应机 体的免疫状态，不适合用于对疫苗免疫效果监 测。 GP蛋白包被的试剂盒与其他检测中和抗体的 方法，如IFA、IPMA 有很好的相关性。适合 用于疫苗免疫效果的评估。
ELISA基本原理

以免疫学反应为基础，通过抗原、抗体的特异 性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来 的一种敏感性很高的试验技术。
主要蛋白的作用
结构蛋白



N蛋白是碱性磷酸蛋白；免疫原性最强，抗原域高度 保守，感染PRRSV后N蛋白最早出现体液免疫应答，约 为1周左右。但N蛋白抗体无中和作用。 M蛋白是非糖基化蛋白；为跨膜蛋白，抗原域高度保守。 也是感染PRRSV后出现免疫应答的主要抗原。 gp5蛋白为囊膜糖蛋白，是PRRSV变异最大的结构蛋白 之一。是病毒主要的免疫原性蛋白，具有病毒中和作 用和机体保护作用。
间接法
高致病性蓝耳病 是由PRRSV变异株引起高度接触性、出血性、致死性传染病。特 征是仔猪发病率可达100%、死亡率可达50%以上，母猪流产率可 达30%以上。 2008年新修订的《一、二、三类动物疫病病种名录》将其列为一类动 物疫病。
病 原
PRRSV 动脉炎病毒科动脉炎病毒属RNA病毒
图1. PRRSV病毒粒子结构示意图（结构蛋白） （引自The role of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus structural and non-structural proteins in virus pathogenesis. Anim Health Res Rev, 2010: p. 1-29）
不足
抗体持续时间大约在2个月与 SN无相关性 抗体不能区分毒株
gP
抗体持续时间在4-5个月 与SN (保护抗体）相关性高 免疫评估最有效的工具
毒株间gp蛋白保守性差(50%) 活毒接种抗体在13天出现
法国LSI蓝耳病抗体试剂盒特异性研究
选择2组母猪，各18头，gp抗体、N蛋白抗体与SN的相关性
包被不同蛋白的区别
Ch-1R株 R98株 NVDC-JXA1株 JXA1-R株
哈维科
哈维科、海利、南农高 科 瑞普 金宇、中牧等19家企业 中牧、吉林元亨等9家 企业
2007年
2008年/2010年 2009年 2007年 2009年
PRRS活苗
VR-2332株
勃林格
2009年
各国疫苗免疫策略



不免疫(瑞典、智利) 灭活苗（英国） 活苗（美国、中国等） 中国的免疫策略： 从争议到趋向统一 强制免疫 JXA1-R株