植物组织培养常规技术

C.要根据灭菌对象的性质严格把握灭菌时间和灭菌温 度。
2. 过滤灭菌法
A.适用于液体培养基
❖ 驯化移植室1、2
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二、常用仪器设备与器械
（一）常用仪器设备：
超净工作台 ；高压蒸汽灭菌锅 ；冰箱 ；烘箱 ； 天平 ；蒸馏水器 ；酸度计 ；摇床与转床 ；光照 培养箱
（二）常用器皿与器械
1．培养器皿 (图2)
2．盛装器皿
3．计量器皿
4．灭菌器械
台或烘片器、恒温箱、染色缸等 。
➢ 照相冲洗设备等 :照相机、近视镜、测光表、显影罐、 放大机、暗袋或暗箱等 。
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离心机
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（五）驯化移植室
❖ 用途：主要用于试管苗的驯化和移栽；也可用于 母株的预栽培。
❖ 设施：室内应备有弥雾装置、荫棚、移植床（苗 床）、恒温恒湿控制仪、光照调节装置等设施以 及培养土、培养盆（钵）、育苗盘等器材。
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（四）观察鉴定室
❖ 用途:对培养物进行观察鉴定的场所。
❖ 设备:
➢ 显微观察设备:双筒实体显微镜、高倍显微镜、倒置显微
镜及其相应的显微照相设备、离心机、测微尺和血球计数 器等 。
➢ 组织切片染色设备:普通和超薄切片机、磨刀机、烤片
接种室
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超净工作台
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紫外灯
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缓冲室
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消毒药
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消毒器
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滑门
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（三）培养室
❖ 用途：培养室是培养接种材料的场所。 ❖ 设备：摇床、光照培养箱、培养架、空调、加湿
除湿设备、时间程控器械。 ❖ 要求： ➢ 优越的照明条件：日光灯 ➢ 良好的温控条件：自动控温电炉或空调等 ➢ 能够保持一定的湿度：除湿机、加湿机（器） ➢ 能进行通风换气。通风窗口或加装排风扇 ❖ 环境条件的控制与要求
二、污染类型
真菌污染与细菌污染 （区别表）
三、造成培养物污染的途径及防除措施
①培养器皿；
⑤培养室环境；
②培养基本身； ⑥操作器械；
③植物材料；
⑦操作人员。
④接种室环境；
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表4 细菌污染与真菌污染的主要区别
污染 类型
细菌 污染
特征
黏液状或发酵泡状 菌斑；出现浑浊或 云雾状痕迹
来源途径
发生 时间
➢ 室内应尽量少放设备和器械，除在出入口安装移动滑门外， 其他门窗均应密闭，以保证没有通风和空气对流，通风换 气必须通过空气调节装置进行。
➢ 定期用甲醛和高锰酸钾或其他药剂进行消毒灭菌，室内的 上方和门口也应安装紫外灯，使室内保持良好的无菌或少 菌状态。
➢ 无菌室外应设缓冲室
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材料带菌
接种后
操作人员不慎
1-2天
培养基灭菌不彻底
真菌 污染
形成不同颜色和形 状的霉层
材料带菌 接种环境 超净工作台失效
接种后 5-10天
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真菌污染2
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（一）培养器皿的清洗和灭菌
1．培养器皿的清洗 :
简单清洗 去除污物
泡于 洗涤液
自来水 刷洗
➢冷凉性植物：18~22℃或<25℃较为适宜（如百 合科、十字花科、鸢尾科、菊科等）。
❖湿度：一般控制在60%~80%之间 。
❖通气状况 ：
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（一）光照
1．光周期 :一般采用周期性关照的方法。但对不同植物、不 同培养物的特性、不同培养阶段所采取的措施不同。
❖ 通常在愈伤组织诱导阶段，一般采用三种方法：全暗、周 期性光照、散射性光照。多数植物适宜全暗或弱光下培养； 而在器官分化阶段，则需要一定时间的光照。
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（一）化学实验室
❖用途: 化学实验室是进行预处理和前期准备的场所 ➢器皿、用具的洗涤、干燥、灭菌和保存 ➢培养基配制 ➢植物材料的清洗和预处理 ➢存放各种器皿、设备和药品等 ❖需要的装备: ➢化学实验室应有实验台、药品柜、防尘橱或防尘柜 ➢冰箱、烘箱、天平、酸度计、水浴锅、电炉、灭菌锅、蒸馏
清水 反复冲洗
使用或暂存
烘干或凉干
蒸馏水漂洗
2．培养器皿的灭菌
（1）高压蒸汽灭菌法。
（2）干热灭菌法。烘箱中150 ℃ （40分钟）或120 ℃
（2小时）。
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（二）培养基的灭菌
1. 高压蒸汽灭菌法
A.装锅不可过满，要使锅内留有一定空间，便于热蒸 汽的畅通。
B.正式灭菌前将锅内冷空气排尽。
第三章 植物组织培养常规技术
第一节 组织培养所需要的基本条件 第二节 组织培养中的无菌技术 第三节 培养基及其配制 第四节 组织培养的基本程序 第五节 外植体的褐变与玻璃化苗
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第一节 组织培养所需要的基本条件
实验室设置
所需条件
仪器设备
无Leabharlann Baidu条件
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一、实验室的设计与要求
❖实验室的设计和装备程度应依据工作目的、规模以 及实际的经济状况而定。 （一）化学实验室 （二）无菌操作室 （三）培养室 （四）观察鉴定室 （五）驯化移植室
5．接种器械
6．其他 ：漏斗、玻璃棒、落水架、器械支架、洗瓶、毛刷等。
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三、环境条件的控制与要求
❖光照
❖温度
➢对大多数植物而言，25℃±2℃的培养温度是适 宜的，低于15℃和高于35℃的温度对培养都不利。 ➢喜温性植物：在26~28℃（如茄科、葫芦科、兰 科、芸香科、禾本科、蔷薇科等）；
❖ 一般每天10~16h的光照即可满足大多数培养的需要； 2.光照强度 ：一般光强在1000~3000lx；一般在培养的后期如
生根阶段增强光照强度。
3.光质 ：离体培养条件下，一般采用日光灯进行光照，光谱 成分主要是蓝紫光，光谱的波长为419~467nm。
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第二节 组织培养中的无菌技术
一、控制污染的重要性
水器等设备也可存放于该室的不同位置，相应的操作也在该 室中进行。 ❖要求 ➢干净明亮，气流畅通。
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（二）无菌操作室
❖ 用途：无菌操作室也称无菌室或接种室，它是组织培养中 进行无菌操作的场所 。
❖ 设备：超净工作台 、灭菌器等。
❖ 要求：
➢ 一般要求室内干爽、整洁、明亮，墙壁光滑平整不易积染 灰尘，地面平坦无缝便于清洗和消毒。