电泳技术的临床应用 (2)

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将会在下列情况下出现下降:
- 蛋白流失 - 肝功能不全 - 先天性抗胰蛋白酶缺乏症
出现两个条带:
- 抗胰蛋白酶的不同基因型
出现增加:
- 炎症症状
A1AT不同的基因型
急性炎症电泳图谱
Alpha 2 globulins(α2球蛋白区带)主要有 α2巨球蛋白,结合珠蛋白
下列情况中出现下降:
- 肝功能不全 - 血管内溶血
临床实例
MGUS
意义未明的单克隆免疫球蛋白疾病: Benign MC
在法国,在对献血者进行检测时,会检测到 0,15% 比例的单克隆免疫球蛋白携带者. 在老龄人群中检测到的携带者比例更高 (80岁以上人群). 在对60到99岁人群的检测显示, 出现Ig的比例
从2,6%上升至19,2%. (平均值= 5%)
- 遗传性双白蛋 - 暂时性的双白蛋白血症可能是由于药物刺激导
致的 - 急性胰腺炎导致的双白蛋白血症 : 大量的胰酶
的出现可以导致白蛋白降解
双白蛋白血症
在下列情况中白蛋白会出现增加:
- 脱水症状 - 血液浓缩 - 白蛋白注射
Alpha 1 globulins(α1球蛋白区带)主要α1 抗胰蛋白酶, α1酸性糖蛋白, α1脂蛋 白,,甲胎蛋白
➢ 琼脂糖凝胶电泳 : 琼脂糖凝胶适用于蛋白质和核酸 的电泳支持介质, 成本低, 结果易保存.
➢ 聚丙烯酰胺凝胶电泳 : 最常用的定性分析蛋白质的 电泳方法, 特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白 质分子量, 一般用于科研.
毛细管电泳 :经典电泳技术和现代微柱分离 相结合的产物
电泳技术的医学应用
蛋白质电泳分析是实验室必备的检测手 段, 可全面精确, 描绘出患者蛋白质的 全貌. 对疾病的早期诊断, 疗效观察及 预后判断具有非常重要的临床价值.
6.弥漫性肝损害型
↓N
7.弥漫宽γ球蛋白血症型

8.M蛋白血症型
9.高α2(β)球蛋白血症
10.妊娠型(高α型)
↓N
11.蛋白质缺陷型
↓↓
N↑
N

↓↓

↑↑
↓↓
N↓
N↓
↓N





↓↓
↑↓
↓N
在α-γ区带中出现M蛋白峰-M区带峰



↑↑


个别区带出现特征性缺乏
γ
N↑ 不定 β-γ↑桥 N ↑ ↑ ↑↑
BJ assay
Ig Baidu Nhomakorabea k 单克隆免疫球蛋白
寡克隆免疫球蛋白 Ig G (k + l)
双克隆免疫球蛋白 Ig G k 和 Ig A k
免疫固定结果显示为单独的 l 成分: 需要使用抗 l游离轻链和/或抗 Ig D和Ig E的抗血清确认
characterized on HYDRAGEL BENCE JONES
N
免疫固定电泳
结果分析指南
什么情况下必须要进行免疫固定电泳检测?
在血清蛋白电泳时,检测到异常条带的出现,或者 是某一个条带的蛋白出现异常增加
电泳结果显示为低免疫球蛋白血症, 或者免疫球 蛋白定量结果显示可能是游离轻链病
尿蛋白检测结果异常(检测到单克隆游离轻链), 查看患者是否做过血清蛋白电泳,如果有必要需 要进行血清的免疫固定电泳
正常血清标本
Ig G l单克隆免疫球蛋白(近正极端)
Ig G k 单克隆免疫球蛋白, 伴随有k 型游离轻链
BENCE JONES蛋白检测结果
本周氏 蛋白检测
出现在 a2 区域的Ig A l
Ig A k 单克隆免疫球蛋白伴随有k 型游离轻链
characterized on HYDRAGEL BENCE JONES
寡克隆免疫球蛋白
由于药物原因导致的免疫缺陷:
- 在器官或者骨移植之后
- 自身免疫病:
(类风湿关节炎, 干燥综合征(66%), 系统性红斑狼疮….)
由于细菌或病毒感染导致的免疫缺陷:
- 病毒 : HIV (63%), EBV, CMV, viral hepatitis,… - 细菌,寄生虫感染:
使用范围和检测原理
电泳技术就是利用在电场 的作用下, 由于待分离样品 中各种分子带电性质以及 分子本身大小, 形状等性质 的差异, 使带电分子产生不 同的迁移速度, 从而对样品 进行分离, 鉴定或提纯的技 术.
在生化检测中, 主要用于分 离各类蛋白分子.
发展历程
1809年俄国科学家列伊斯首 先发现电泳现象
临床意义
将电泳作为常规检测之一, 基于蛋白含量的 变化, 有助于我们对以下疾病的筛查 :
炎症 营养不良 肺气肿
临床意义
对异常条带的筛查,有助于我们检测下列疾病: 骨髓瘤 巨球蛋白血症(Waldenstrom) 细菌和病毒感染
在这些情况下, 必须要做其他辅助测试, 比如 说免疫固定, 使用不同类型的抗血清对异常蛋 白进行检测. (对于后期治疗有很重要的指导意义)
这种情况下的随访检测,一定要选择相同的技术方法.
如果随访结果显示出现异常区带, 一定要进行免疫 固定电泳确认这些异常蛋白的成分.
异常血清蛋白质电泳图谱的分型及其特征
血清蛋白质的图谱类型 总蛋白 Alb α1
α2
β
1.低蛋白血症
↓↓
2.肾病型
↓↓
3.肝硬化型
↓N↑
4.急性炎症或急性时相反应症 N
5.慢性炎症型
蛋白的电泳检测
根据使用的染料或者是底物的不同,我 们可以检测到不同类型的蛋白:
血清蛋白 脂蛋白(运送脂类) 各种酶类(CK-MB,LDH) 血红蛋白(地中海贫血) 尿蛋白(选择性蛋白尿,非选择
性蛋白尿)
电泳技术在临检中的应用
急,慢性炎症
造血系统疾病: 多发 性骨髓瘤, 巨免疫球 蛋白血症
肾脏疾病
溶血的标本
下列情况下Alpha2区域会出现增加现象:
- 炎症症状 - 肾病综合征 - 出现游离轻链
肾病综合征
Beta globulins(β球蛋白区带)主要有血红 素结合蛋白,转铁蛋白,β脂蛋白,补体 C3、C4,纤维蛋白原
在下列情况下会出现下降 :
- 肝功能不全 - C3 长期缺乏 或者 C3 代谢过快
在20%的情况中, MGUS 将会转化成恶性疾病 (6-10 years)
Kyle report显示,通过对1384名含有MGUS的患者的 20–35(average : 22 years)年的跟踪监测发现, 24%的患者最终演变成恶性的淋巴细胞增生症 (multiple myeloma, macroglobulinemia, amyloidosis,…).
- 单克隆免疫球蛋白 - 寡克隆免疫球蛋白
高免疫球蛋白血症
血清蛋白021216-狼疮病 血清蛋白030127-酒精肝B-r桥
与下列各类疾病相关的寡克隆免疫球蛋白(多个条 带) :
- 自身免疫病 - 先天性免疫缺陷症 - 病毒感染
(C Hepatitis, HIV disease, CMV(巨细胞病毒),
EBV,…)
- 免疫抑制治疗
Oligoclonal pattern(寡克隆免疫球蛋白)
血清蛋白电泳是 M蛋白 (Monoclonal Protein) 多克隆 (polyclonal Protein) 寡克隆 (Oligoclonal Protein)
的首选检测项目
什么是M蛋白
M蛋白疾病(Monoclonal gammapathies, MG)是由 于单一克隆浆细胞无限增殖产生的均一单克隆蛋白 (Monoclonal-proteins)所导致的一组疾病
(脑膜炎, 脑炎,…)
在一些肿瘤中: (慢性淋巴细胞性白血病CLL: 29%) 在5 % 正常群体中 (MGUS) 在多发性硬化患者中: (CSF 90%)
检测结果阐述
电泳的结果是以%的形式给出的, 但是对 于临床诊断, 结果必须要以浓度的形式给 出g/L
蛋白浓度出现异常时,必须要进行其它的 补充检测
电泳检测
电泳结果的临床应用及常见电泳结果分析
什么情况下必须进行电泳检测?
A/G比例变化
血液沉降速度发生异常变化
出现恶性疾病征兆
在免疫球蛋白定量检测中发现 某一种免疫球蛋白出 现大量异常增加
电泳区带分析
白蛋白区带
双白蛋白,或者一条宽峰,或者在白蛋白条带出现 附属条带可能是由以下原因造成 :
患者的随访
首次被发现的患者:
如果检测到的异常M蛋白峰值不多, 同时其他免 疫球蛋白的含量未发生变化,也没有临床症状, 怀疑可能是 MGUS, 第一年每4 至 6个月对患者进行随访,从第二年 起, 每年进行一次随访.
已确诊的患者:
如果电泳结果和先前检测相同, 利用异常峰值进行量 化以便于检测异常M蛋白的浓度是否发生变化.
型别
IgG型骨髓瘤 IgA型骨髓瘤 IgM型骨髓瘤 IgD型骨髓瘤
重链病 轻链病 半分子病 7S IgM BMG 双M蛋白病
例数
205 93 56 12 5 214 1 2 49
8
%
31.73 14.40
8.67 1.86 0.77 33.13 0.15 0.31 7.59 1.24
多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)
MM的临床表现多样化,常常因此就诊于 骨科、肾脏内科等,延误诊治
多发性骨髓瘤的免疫学特征
血中出现M蛋白,正常Ig水平明显减低 尿中出现M蛋白和轻链蛋白(BJP) 骨髓中浆细胞明显增加 无免疫活性Ig导致免疫功能低下
多发性骨髓瘤病人溶骨报告(骨盆)
多发性骨髓瘤病人溶骨报告
多发性骨髓瘤病人溶骨报告(颅骨)
MM是造血系统的恶性肿瘤,占整个恶性肿瘤的1%
常见于中、老年人(50-70岁居多,40岁以下少 见).以往对此病认识不足,漏诊、误诊可达到 70%以上.随着寿命的延长对此病认识的提高病 例数显著增加.
MM临床表现特点
骨痛,骨骼肿块与病理性骨折,骨质疏松和溶骨现象 贫血 免疫功能低下,反复感染 肾脏损害 高钙,高粘(血浆相对黏度6以上)高尿酸血症表现
游离轻链病
Gamma globulins (γ免疫球蛋白区带)主要
有IgA,IgM,IgG,CRP
在下列情况中会出现下降现象:
- 部分的或全部的免疫缺陷 - 免疫抑制治疗 - 游离轻链病或非分泌型骨髓瘤
低免疫球蛋白血症
多克隆免疫球蛋白的增加:
- 炎症 - 肝硬化 - 亚急性和慢性感染
检测到其他条带
肝脏疾病
中枢神经系统疾病: 多发性硬化症
遗传性疾病: 地中海 贫血
代谢性疾病: 糖尿病 心血管疾病: 心梗,动
脉粥样硬化
恶性肿瘤
正确解释电泳结果 为临床对疾病的判断提供可靠参考
血清蛋白电泳的目的是什么?
检测异常 :
含量的变化 : 条带中蛋白含量的增加或 减少
性质的变化 : 异常条带的出现
MGUS携带者特征:
-未出现临床和影像学特征 -未出现不良反应, 未检测到血钙升高,也未出现肾功 能衰竭 -未见骨髓瘤的临床特征 -单克隆免疫球蛋白 < 20g/l -其他免疫球蛋白都是正常的,同时在患者尿液中未检
测到本周氏蛋白 -单克隆免疫球蛋白的浓度随着时间的推移未发生增 加现象 -其他的免疫球蛋白的浓度也未随时间推移而出现下降
M蛋白疾病的“M”含义是Myeloma(骨髓瘤), Macroglobulinemia(巨球蛋白血症), Malignant lymphoma(恶性淋巴瘤)和Monoclonal Gammapathies(单克隆免疫球蛋白病)均以“M” 开头. M蛋白在电泳上表现为高而狭窄的尖峰.
表1 646例M蛋白类型分类
在下列情况下会出现两个条带:
- 长期存放的标本或者是高胆固醇的标本, LDL 有不同的迁移率; 从而导致LDL电泳是偏移 Beta位置
Beta球蛋白在下列情况下会出现增加现象:
- 胆管阻塞 - 肾病综合征 - 肝硬化 - 缺铁性贫血 - 血球蛋白异常 - 高脂蛋白血症 - 大量溶血
酒精性肝硬化中的β-γ 桥
1937年瑞典科学家 Tiselius(提塞留斯)建立了 界面电泳技术, 并首次证明了 血清是由白蛋白及α, β, γ球蛋 白组成的因此获得1948年诺 贝尔化学奖.
1950年后, 区带电泳从发展 到成熟. 1980年以来, 毛细 管电泳逐渐受到重视
常用的电泳技术
滤纸电泳 醋酸纤维素薄膜电泳 凝胶电泳
从检测到单克隆免疫球蛋白,直到作出多发性骨髓瘤的诊 断报告,这段时间是不定的,从2-29年(平均是10年左 右).
大量报告显示,在下列情况中,发展成为恶性淋巴细胞 增生疾病的可能性很小 :
- 单克隆免疫球蛋白: IgG < 15 g/L IgA < 10 g/L IgM < 5 g/L
- 尿蛋白中未出现本周氏蛋白 - 其他类型的免疫球蛋白未出现下降
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