叔丁基对苯二酚对热应激小鼠肝脏氧化损伤的缓解作用-论文
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平 。２ ） 与ｔ Ｂ ＨＱ（ 一） 组相 比， 热应激 ０ ｄ ， ｔ Ｂ Ｈ Ｑ（ ＋ ） 组 肝 脏 总超 氧化 物歧 化 酶 （ Ｔ — Ｓ ＯＤ） 活 力显 著 升高（ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 在热应激 ４ ｄ时 ， 还 原型 谷 胱 甘肽 含 量 以及 Ｔ — ｓ Ｏ Ｄ、 铜， 锌 超 氧化 物 歧 化 酶 、 谷 胱 甘 肽 过 氧 化物 酶 和 过 氧化 氢 酶 活 力 显 著 降 低 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。３） 热 应激 ２ ｄ ， ｔ Ｂ Ｈ Ｑ（ 一） 组比 ｔ Ｂ ＨＱ （ ＋ ） 组肝 脏 损 伤 情 况 更 为 严 重 。４ ） 热应激 ０ ｄ ， ｔ Ｂ ＨＱ（ 一） 组 未检 测 到 Ｎ ｒ ｆ ２蛋 白在 肝 脏 组 织 表
４ ２℃全身热应激 ， 发现热应激后小 鼠体重减轻 ， 体 表 温度 和 直 肠 温 度 显 著 升 高 ， 睾 丸 和 附 睾 组 织 丙 二醛（ ＭＤＡ） 含 量 以及 活 性 氧 自由基 （ Ｒ Ｏ Ｓ ） 、 超 氧 化 物歧 化 酶 （ Ｓ ＯＤ） 和谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶 （ ＧＳ Ｈ—
达， 热 应 激后 各 时 间点都 检 测 到 Ｎ ｒ ｆ ２蛋 白的表 达 ， 而ｔ Ｂ ＨＱ（ ＋ ） 组在各阶段均有表达 ； ｔ Ｂ ＨＱ（ 一 ）
组在 热 应 激 ０ 、 ｌ 、 ４和 ８ ｄ都检 测 到 ＨＯ一 １ 蛋 白 的表 达 ， 而ｔ Ｂ ＨＱ（ ＋ ） 组在 热 应 激 ０ 、 ｌ和 ２ ｄ时检 测 到 了 ＨＯ・ １ 蛋 白 的表 达 。５ ）与 ｔ Ｂ Ｈ Ｑ（ 一） 组相 比 ， ｔ Ｂ ＨＱ（ ＋ ） 组 多个 Ｋ ｅ ｌ ｃ ｈ样 Ｅ Ｃ Ｈ相 关蛋 白 （ Ｋ ｅ ａ ｐ １ ） 一 Ｎｆ ｆ ２ ／ Ａ Ｒ Ｅ信 号 通路 相 关基 因表 达 量 均 显 著 升 高 （ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） 。综上所述 ， 饲粮 添 加 ｌ ％
氧化应激是 指机体 在遭受 各种有 害刺 激时 ，
体 内高活性 分子 如 Ｒ Ｏ Ｓ和活性 氮 自由基 产生 过
多， 氧化 速 度 超 出 氧化 物 的清 除速 度 ， 氧 化 系 统 和 抗氧化系统 失衡 ， 从 而 导 致 组 织 损 伤 。过 多 的 自
１ ． ２ ． １ 试 验 设 计
叔 丁 的 缓 解 作 用
周 鑫 黄 毅 李延森 李春 梅
（ 南京农 业大学动 物科技学 院 ， 南京 ２ １ ０ ０ ９ ５ ）
摘
要 ：本 试验 旨在研 究叔 丁基 对苯 二 酚 （ ｔ ＢＨＱ） 对 热应 激 小鼠 肝 脏 氧 化 损 伤 的 影 响 。 试验 选
Ｐ ｘ ） 活力 升 高 。Ｋ ｉ ｍ 等 研 究 发 现 ， 热应 激 后 大 鼠 肝 脏 中脂 肪 酸 合 酶 和 氧 化 还 原 类 酶 活 力 以 及 脂 质 过 氧化 物 相 关 的基 因 转 录 水 平 显 著 升 高 ， ＭＤＡ 含
物 造成 的负 面 影 响 ， 已受 到越 来 越 多 的学 者 关 注 。 小 鼠在 急 性 热 应 激 后 ， 会出现急躁不安 ， 心 率
挥抗 氧 化作 用 。Ｎ ｒ ｆ ２下 游 靶 基 因主 要 包 括 辅 酶 Ｑ 氧 化还 原 酶 ｌ （ ＮＱＯ１ ） 、 谷胱 甘肽 ｓ 一 转移 酶 、 葡 糖
在热 应激 前 （ 热 应激 ０ ｄ ） 和热 应激 １ 、 ２、 ４ 、
８ ｄ ， 每 组 随机 取 ５只 小 鼠在 热 应 激 后 马 上 进 行 颈 椎 脱 臼处 死 ， 解剖小 鼠， 采 集肝 脏 样 品 。
ｔ Ｂ Ｈ Ｑ 对 热 应激 造 成 的 小 鼠肝 脏 氧 化损 伤 能 够起 到 一 定 的缓 解 作 用 。
关 键 词 ：叔 丁基 对 苯二 酚 ； 肝脏 ； 热应 激 ； 氧化 损 伤 中图分类号 ： Ｓ ８ ５ ２ ． ２ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ６ － ２ ６ ７ Ｘ（ ２ ０ １ ４ ） ０ ９ ． ２ ７ ７ ９ — １ ０
１ ． ２ ． ３ 测 定 指标 和方 法 １ ． ２ ． ３ ． １ 肝 脏 指数
醛酸基转 移酶 、 血红 素加 氧酶 １ （ ＨＯ一 １ ） 等¨ Ｊ 。 近 年研 究 表 明 ， 饲 粮饲 喂 ｔ Ｂ ＨＱ可 以提 高 大 鼠 肾脏
加快 ， 体表 和直肠温 度升 高 ， 身 体水 分蒸 发加 剧 ， 进 而导 致脱 水 ， 血 清渗 透压 升 高 ， 体重 减少 。 姜 忠玲 利 用 化 学 恒 温 培 养 箱 对 小 鼠 实 施 持 续
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ４ － ０ ３ － ０ １
量 显 著 升 高 。本 实 验 室 研 究 发 现 ， 体 表 温 度 和 直 肠 温度 在 热 处 理 后 都 极 显 著 高 于 热 处 理 前 ； 组 织
连续 ８ ｄ 。在 热 应 激之 前 （ 热应 激 ０ ｄ ） 和热 应 激 ｌ 、 ２ 、 ４ 、 ８ ｄ， 每 组 各 取 ５只 小 鼠 处 死 ， 采 集肝 脏 ，
测 定肝 脏 重 量和 抗 氧 化 指标 ， 免 疫组 织化 学方 法检 测 转 录 因子 Ｅ ２相 关 因子 ２ （ Ｎｒ ｆ ２ ） 和血 红 素加 氧酶 ｌ （ ＨＯ — １ ） 蛋 白表 达 ， 实时 定 量 Ｐ Ｃ Ｒ 法 测 定 Ｎｒ ｆ ２及 其 调控 表 达 基 因的表 达 量 。 结果 表 明 ： １ ） ｔ Ｂ ＨＱ（ 一） 组肝 脏 指 数在 热 应 激 ４ ｄ恢 复 正 常 水 平 ， 而ｔ Ｂ ＨＱ（ ＋） 组在 热应激 ２ ｄ即恢 复 正 常 水
Ｔ ａ Ｋａ Ｒａ Ｐ ｒ ｉ ｍｅ Ｓ ｃ ｒ ｉ ｐ ｔ 固Ｒ Ｔ ｒ ｅ ａ ｇ ｅ ｎ ｔ Ｋ ｉ ｔ 反转 录试 剂 盒 和Ｔ ａ Ｋ ａ Ｒ ａ Ｓ Ｙ Ｂ Ｒ ＠Ｐ ｒ ｅ ｍｉ ｘ Ｅ ｘ Ｔ ａ ｑ Ｔ Ｍ 定 量 试 剂 盒 为
日本 Ｔ ａ Ｋａ Ｒａ 公 司产 品 ； 小鼠Ｎ ｒ ｆ ２特 异 性 抗 体 购
２ ７ ８ ０
动
物
营
养
学
报
形 态学 观 察 发 现 ， 热 处 理 导 致 小 鼠 肝 脏 组 织 充 血 和 肝 细胞 水 肿 ； 小 鼠肝 脏 ＭＤ Ａ含 量在热处理 ２ ｄ 较 对 照组 显 著 升 高 ， 还 原 型谷 胱 甘 肽 （ Ｇ Ｓ Ｈ） 含量 、 ＧＳ Ｈ— Ｐ ｘ活力 和 Ｔ － Ｓ ＯＤ 活力 在 热处 理 ４和 １ ２ ｄ都 有 升 高 Ｊ 。上述 研 究 结 果 表 明 ， 小 鼠热 处 理 后 ， 肝 脏 中产生 了显 著 的氧 化 应激 。
信 号 通 路被 认 为 是 抗 氧 化 应 答 机 制 中最 重 要 的 一
条信 号 通路
。Ｋ ｅ ａ ｐ ｌ — Ｎ ｒ ｆ ２ ／ Ａ Ｒ Ｅ信 号通 路 在
养， 自由采 食 和饮 水 ， 按 照 南 京 农 业 大 学 试 验 动 物 常规 饲 养 操 作 规 程 进 行 饲 养 。饲 喂 １ ４ ｄ后 ， 小 鼠 进行 连 续 ８ ｄ热 应 激 处 理 ， 每 天 在 相 同 时 间 （ １ ｌ ： ０ ０ 一ｌ ３ ： ０ ０ ） 将小 鼠置于恒温生 化培养箱 （ 温
在 现代 畜 牧 生 产 过 程 中 ， 高密度 、 集 约 化 生 产 带来 的各 种 应 激 因素 越 来 越 受 到 人 们 的 重 视 ， 其 中高 温带 来 的热 应 激 是 一 种 常 见 的危 害 畜 牧 业 的
不 利 因 素 。通 过 营 养 调 控 手 段 ， 缓 解 热 应 激 对 动
叔 丁基 对 苯二 酚 （ ｔ ｅ ｒ ｔ — ｂ ｕ ｔ ｙ ｌ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｏ ｎ ｅ ， ｔ Ｂ —
Ｈ Ｑ） 是抗 氧 化 蛋 白强 诱 导 剂 ， 主要 通过促 进 Ｎ ｒ ｆ ２
蛋 白入 核 ， 激 活 抗氧 化 蛋 白基 因 的表 达 ¨ ， 从 而 发
５ ０只 ６周 龄 雄 性 Ｉ Ｃ Ｒ小 鼠［ （ ３ ５ ＋１ ）ｇ ］ 随 机 分 为 ２组 ， 每组 ２ ５只 ， ｔ Ｂ ＨＱ（ 一 ） 组饲喂基础饲粮 ， ｔ Ｂ ＨＱ（ ＋ ） 组 饲喂基 础饲粮 添加 ｌ ％ｔ Ｂ Ｈ Ｑ 的 试 验 饲 粮 。ｌ ％的 ｔ Ｂ ＨＱ 添 加 量 参 考 Ｌ ｉ 等 剐和 Ｓ ｈ ｉ ｈ 等＿ １ 的研 究 结果 设 定 。小 鼠饲 养 在人 工 控 制 的环 境中， １ ２ ｈ光 照 （ ０ ７ ： ０ ０ 一ｌ ９： ０ ０ ） 和 １ ２ ｈ黑 暗 ， 温 度（ ２ ３ ±２ ）ｏ Ｃ， 湿度 （ ５ ０ ±１ ０ ） ％， 每 笼 ５只 混 合 饲
基金项 目： 国家 自然科学 基金 （ ３ １ ２ ７ ２ ４ ８ ５ ）； 青蓝工程 ； “ 十二五”国家科技 支撑计划 （ ２ ０ １ ２ Ｂ Ａ Ｄ３ ９ Ｂ０ ２ ） 作者简介 ： 周 鑫（ １ ９ ８ ８ ～） ， 男， 浙江金华 人 ， 博士研究 生 ， 动物营养 与饲料科学专业 。Ｅ ． ｍａ ｉ ｌ ： ｚ ｈ ｏ ｕ ｘ ｉ ｎ ＿ ２ （ ０ ４ ６ ＠１ ２ ６ ． ｃ ｏ ｍ ｝通讯作者 ： 李春梅 ， 教授 ， 博 士生 导师 ， Ｅ － ｍａ ｉ ｌ ：ｃ ｈ ｕ ｎ ｍｅ ｉ ｌ ｉ ＠ｎ ｊ ａ ｕ ． ｅ ｄ ｕ ． ｃ ｎ
自美 国 Ｓ ａ ｎ ｔ ａ Ｃ ｒ ｕ ｚ 公司 ； 小 鼠 ＨＯ — ｌ 特 异性 抗 体 购
自武汉 博 士 德 生 物 工 程 有 限 公 司 ； 免 疫 组 织 化 学
ＡＢ Ｃ 染 色 试 剂 盒 购 自武 汉 博 士 德 生 物 工 程 有 限 公 司。
１ ． ２ 方法
由基 会攻 击 蛋 白质 、 脂肪 酸、 磷 脂 和 核 酸 等 生 物 大
分子 ， 改 变 其 生 物学 功 能 ， 使 机 体 的正 常代 谢 发 生 紊乱¨ Ｊ ， 如 蛋 白质 肽 链 主 链 的氧 化 ， 肽 键 的 断 裂 和 侧 链 的 氧 化 ８ Ｊ 。 Ｋｅ ｌ ｃ ｈ样 Ｅ Ｃ Ｈ 相 关 蛋 白 （ Ｋ ｅ ａ ｐ １ ） 一 转 录 因子 Ｅ ２相 关 因 子 ２ （ Ｎｒ ｆ ２） ／ ＡＲ Ｅ
用５ ０只 ６周龄 Ｉ Ｃ Ｒ雄 性 小 鼠 随机 分 为 ２组 ， 每组 ２ ５只 ， ｔ Ｂ ＨＱ（ 一 ） 组 饲喂 基 础 饲粮 ， ｔ Ｂ ＨＱ（ ＋ ） 组 饲 喂 基 础 饲粮 中添加 １ ％ｔ Ｂ ＨＱ 的试 验 饲粮 。饲 喂 １ ４ ｄ后 ， 小 鼠每 天进 行 ４ ２℃ ２ ｈ热 应激 处 理 ，
度４ ２℃ ， 相 对湿 度 ６ ０ ％） 中２ ｈ 。在 热 应 激 的 ８ ｄ 里， 小 鼠饲粮 维 持 不变 。
１ ． ２ ． ２ 样 品 收集
机体 受 到 氧 化 应 激 时 ， 调 节 体 内 的 抗 氧 化 酶 基 因 表达 ， 保护 机体 抵抗 自由基 的攻 击 ， 减 少 氧 化 损 伤， 对 机体 维 持 内环 境 的 稳定 具 有 重要 作 用 。
动物营养学报 ２ ０ １ ４ ， ２ ６ （ ９ ） ： ２ ７ ７ ９ — ２ ７ ８ ８
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ａ ｎ ｉ ｍａ ｌ Ｎｕ ｔ ｒ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ６ － ２ ６ ７ ｘ 。 ２ ０ １ ４ ． ０ ９ ． ０ ４ １
４ ２℃全身热应激 ， 发现热应激后小 鼠体重减轻 ， 体 表 温度 和 直 肠 温 度 显 著 升 高 ， 睾 丸 和 附 睾 组 织 丙 二醛（ ＭＤＡ） 含 量 以及 活 性 氧 自由基 （ Ｒ Ｏ Ｓ ） 、 超 氧 化 物歧 化 酶 （ Ｓ ＯＤ） 和谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶 （ ＧＳ Ｈ—
达， 热 应 激后 各 时 间点都 检 测 到 Ｎ ｒ ｆ ２蛋 白的表 达 ， 而ｔ Ｂ ＨＱ（ ＋ ） 组在各阶段均有表达 ； ｔ Ｂ ＨＱ（ 一 ）
组在 热 应 激 ０ 、 ｌ 、 ４和 ８ ｄ都检 测 到 ＨＯ一 １ 蛋 白 的表 达 ， 而ｔ Ｂ ＨＱ（ ＋ ） 组在 热 应 激 ０ 、 ｌ和 ２ ｄ时检 测 到 了 ＨＯ・ １ 蛋 白 的表 达 。５ ）与 ｔ Ｂ Ｈ Ｑ（ 一） 组相 比 ， ｔ Ｂ ＨＱ（ ＋ ） 组 多个 Ｋ ｅ ｌ ｃ ｈ样 Ｅ Ｃ Ｈ相 关蛋 白 （ Ｋ ｅ ａ ｐ １ ） 一 Ｎｆ ｆ ２ ／ Ａ Ｒ Ｅ信 号 通路 相 关基 因表 达 量 均 显 著 升 高 （ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） 。综上所述 ， 饲粮 添 加 ｌ ％
氧化应激是 指机体 在遭受 各种有 害刺 激时 ，
体 内高活性 分子 如 Ｒ Ｏ Ｓ和活性 氮 自由基 产生 过
多， 氧化 速 度 超 出 氧化 物 的清 除速 度 ， 氧 化 系 统 和 抗氧化系统 失衡 ， 从 而 导 致 组 织 损 伤 。过 多 的 自
１ ． ２ ． １ 试 验 设 计
叔 丁 的 缓 解 作 用
周 鑫 黄 毅 李延森 李春 梅
（ 南京农 业大学动 物科技学 院 ， 南京 ２ １ ０ ０ ９ ５ ）
摘
要 ：本 试验 旨在研 究叔 丁基 对苯 二 酚 （ ｔ ＢＨＱ） 对 热应 激 小鼠 肝 脏 氧 化 损 伤 的 影 响 。 试验 选
Ｐ ｘ ） 活力 升 高 。Ｋ ｉ ｍ 等 研 究 发 现 ， 热应 激 后 大 鼠 肝 脏 中脂 肪 酸 合 酶 和 氧 化 还 原 类 酶 活 力 以 及 脂 质 过 氧化 物 相 关 的基 因 转 录 水 平 显 著 升 高 ， ＭＤＡ 含
物 造成 的负 面 影 响 ， 已受 到越 来 越 多 的学 者 关 注 。 小 鼠在 急 性 热 应 激 后 ， 会出现急躁不安 ， 心 率
挥抗 氧 化作 用 。Ｎ ｒ ｆ ２下 游 靶 基 因主 要 包 括 辅 酶 Ｑ 氧 化还 原 酶 ｌ （ ＮＱＯ１ ） 、 谷胱 甘肽 ｓ 一 转移 酶 、 葡 糖
在热 应激 前 （ 热 应激 ０ ｄ ） 和热 应激 １ 、 ２、 ４ 、
８ ｄ ， 每 组 随机 取 ５只 小 鼠在 热 应 激 后 马 上 进 行 颈 椎 脱 臼处 死 ， 解剖小 鼠， 采 集肝 脏 样 品 。
ｔ Ｂ Ｈ Ｑ 对 热 应激 造 成 的 小 鼠肝 脏 氧 化损 伤 能 够起 到 一 定 的缓 解 作 用 。
关 键 词 ：叔 丁基 对 苯二 酚 ； 肝脏 ； 热应 激 ； 氧化 损 伤 中图分类号 ： Ｓ ８ ５ ２ ． ２ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ６ － ２ ６ ７ Ｘ（ ２ ０ １ ４ ） ０ ９ ． ２ ７ ７ ９ — １ ０
１ ． ２ ． ３ 测 定 指标 和方 法 １ ． ２ ． ３ ． １ 肝 脏 指数
醛酸基转 移酶 、 血红 素加 氧酶 １ （ ＨＯ一 １ ） 等¨ Ｊ 。 近 年研 究 表 明 ， 饲 粮饲 喂 ｔ Ｂ ＨＱ可 以提 高 大 鼠 肾脏
加快 ， 体表 和直肠温 度升 高 ， 身 体水 分蒸 发加 剧 ， 进 而导 致脱 水 ， 血 清渗 透压 升 高 ， 体重 减少 。 姜 忠玲 利 用 化 学 恒 温 培 养 箱 对 小 鼠 实 施 持 续
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ４ － ０ ３ － ０ １
量 显 著 升 高 。本 实 验 室 研 究 发 现 ， 体 表 温 度 和 直 肠 温度 在 热 处 理 后 都 极 显 著 高 于 热 处 理 前 ； 组 织
连续 ８ ｄ 。在 热 应 激之 前 （ 热应 激 ０ ｄ ） 和热 应 激 ｌ 、 ２ 、 ４ 、 ８ ｄ， 每 组 各 取 ５只 小 鼠 处 死 ， 采 集肝 脏 ，
测 定肝 脏 重 量和 抗 氧 化 指标 ， 免 疫组 织化 学方 法检 测 转 录 因子 Ｅ ２相 关 因子 ２ （ Ｎｒ ｆ ２ ） 和血 红 素加 氧酶 ｌ （ ＨＯ — １ ） 蛋 白表 达 ， 实时 定 量 Ｐ Ｃ Ｒ 法 测 定 Ｎｒ ｆ ２及 其 调控 表 达 基 因的表 达 量 。 结果 表 明 ： １ ） ｔ Ｂ ＨＱ（ 一） 组肝 脏 指 数在 热 应 激 ４ ｄ恢 复 正 常 水 平 ， 而ｔ Ｂ ＨＱ（ ＋） 组在 热应激 ２ ｄ即恢 复 正 常 水
Ｔ ａ Ｋａ Ｒａ Ｐ ｒ ｉ ｍｅ Ｓ ｃ ｒ ｉ ｐ ｔ 固Ｒ Ｔ ｒ ｅ ａ ｇ ｅ ｎ ｔ Ｋ ｉ ｔ 反转 录试 剂 盒 和Ｔ ａ Ｋ ａ Ｒ ａ Ｓ Ｙ Ｂ Ｒ ＠Ｐ ｒ ｅ ｍｉ ｘ Ｅ ｘ Ｔ ａ ｑ Ｔ Ｍ 定 量 试 剂 盒 为
日本 Ｔ ａ Ｋａ Ｒａ 公 司产 品 ； 小鼠Ｎ ｒ ｆ ２特 异 性 抗 体 购
２ ７ ８ ０
动
物
营
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形 态学 观 察 发 现 ， 热 处 理 导 致 小 鼠 肝 脏 组 织 充 血 和 肝 细胞 水 肿 ； 小 鼠肝 脏 ＭＤ Ａ含 量在热处理 ２ ｄ 较 对 照组 显 著 升 高 ， 还 原 型谷 胱 甘 肽 （ Ｇ Ｓ Ｈ） 含量 、 ＧＳ Ｈ— Ｐ ｘ活力 和 Ｔ － Ｓ ＯＤ 活力 在 热处 理 ４和 １ ２ ｄ都 有 升 高 Ｊ 。上述 研 究 结 果 表 明 ， 小 鼠热 处 理 后 ， 肝 脏 中产生 了显 著 的氧 化 应激 。
信 号 通 路被 认 为 是 抗 氧 化 应 答 机 制 中最 重 要 的 一
条信 号 通路
。Ｋ ｅ ａ ｐ ｌ — Ｎ ｒ ｆ ２ ／ Ａ Ｒ Ｅ信 号通 路 在
养， 自由采 食 和饮 水 ， 按 照 南 京 农 业 大 学 试 验 动 物 常规 饲 养 操 作 规 程 进 行 饲 养 。饲 喂 １ ４ ｄ后 ， 小 鼠 进行 连 续 ８ ｄ热 应 激 处 理 ， 每 天 在 相 同 时 间 （ １ ｌ ： ０ ０ 一ｌ ３ ： ０ ０ ） 将小 鼠置于恒温生 化培养箱 （ 温
在 现代 畜 牧 生 产 过 程 中 ， 高密度 、 集 约 化 生 产 带来 的各 种 应 激 因素 越 来 越 受 到 人 们 的 重 视 ， 其 中高 温带 来 的热 应 激 是 一 种 常 见 的危 害 畜 牧 业 的
不 利 因 素 。通 过 营 养 调 控 手 段 ， 缓 解 热 应 激 对 动
叔 丁基 对 苯二 酚 （ ｔ ｅ ｒ ｔ — ｂ ｕ ｔ ｙ ｌ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｏ ｎ ｅ ， ｔ Ｂ —
Ｈ Ｑ） 是抗 氧 化 蛋 白强 诱 导 剂 ， 主要 通过促 进 Ｎ ｒ ｆ ２
蛋 白入 核 ， 激 活 抗氧 化 蛋 白基 因 的表 达 ¨ ， 从 而 发
５ ０只 ６周 龄 雄 性 Ｉ Ｃ Ｒ小 鼠［ （ ３ ５ ＋１ ）ｇ ］ 随 机 分 为 ２组 ， 每组 ２ ５只 ， ｔ Ｂ ＨＱ（ 一 ） 组饲喂基础饲粮 ， ｔ Ｂ ＨＱ（ ＋ ） 组 饲喂基 础饲粮 添加 ｌ ％ｔ Ｂ Ｈ Ｑ 的 试 验 饲 粮 。ｌ ％的 ｔ Ｂ ＨＱ 添 加 量 参 考 Ｌ ｉ 等 剐和 Ｓ ｈ ｉ ｈ 等＿ １ 的研 究 结果 设 定 。小 鼠饲 养 在人 工 控 制 的环 境中， １ ２ ｈ光 照 （ ０ ７ ： ０ ０ 一ｌ ９： ０ ０ ） 和 １ ２ ｈ黑 暗 ， 温 度（ ２ ３ ±２ ）ｏ Ｃ， 湿度 （ ５ ０ ±１ ０ ） ％， 每 笼 ５只 混 合 饲
基金项 目： 国家 自然科学 基金 （ ３ １ ２ ７ ２ ４ ８ ５ ）； 青蓝工程 ； “ 十二五”国家科技 支撑计划 （ ２ ０ １ ２ Ｂ Ａ Ｄ３ ９ Ｂ０ ２ ） 作者简介 ： 周 鑫（ １ ９ ８ ８ ～） ， 男， 浙江金华 人 ， 博士研究 生 ， 动物营养 与饲料科学专业 。Ｅ ． ｍａ ｉ ｌ ： ｚ ｈ ｏ ｕ ｘ ｉ ｎ ＿ ２ （ ０ ４ ６ ＠１ ２ ６ ． ｃ ｏ ｍ ｝通讯作者 ： 李春梅 ， 教授 ， 博 士生 导师 ， Ｅ － ｍａ ｉ ｌ ：ｃ ｈ ｕ ｎ ｍｅ ｉ ｌ ｉ ＠ｎ ｊ ａ ｕ ． ｅ ｄ ｕ ． ｃ ｎ
自美 国 Ｓ ａ ｎ ｔ ａ Ｃ ｒ ｕ ｚ 公司 ； 小 鼠 ＨＯ — ｌ 特 异性 抗 体 购
自武汉 博 士 德 生 物 工 程 有 限 公 司 ； 免 疫 组 织 化 学
ＡＢ Ｃ 染 色 试 剂 盒 购 自武 汉 博 士 德 生 物 工 程 有 限 公 司。
１ ． ２ 方法
由基 会攻 击 蛋 白质 、 脂肪 酸、 磷 脂 和 核 酸 等 生 物 大
分子 ， 改 变 其 生 物学 功 能 ， 使 机 体 的正 常代 谢 发 生 紊乱¨ Ｊ ， 如 蛋 白质 肽 链 主 链 的氧 化 ， 肽 键 的 断 裂 和 侧 链 的 氧 化 ８ Ｊ 。 Ｋｅ ｌ ｃ ｈ样 Ｅ Ｃ Ｈ 相 关 蛋 白 （ Ｋ ｅ ａ ｐ １ ） 一 转 录 因子 Ｅ ２相 关 因 子 ２ （ Ｎｒ ｆ ２） ／ ＡＲ Ｅ
用５ ０只 ６周龄 Ｉ Ｃ Ｒ雄 性 小 鼠 随机 分 为 ２组 ， 每组 ２ ５只 ， ｔ Ｂ ＨＱ（ 一 ） 组 饲喂 基 础 饲粮 ， ｔ Ｂ ＨＱ（ ＋ ） 组 饲 喂 基 础 饲粮 中添加 １ ％ｔ Ｂ ＨＱ 的试 验 饲粮 。饲 喂 １ ４ ｄ后 ， 小 鼠每 天进 行 ４ ２℃ ２ ｈ热 应激 处 理 ，
度４ ２℃ ， 相 对湿 度 ６ ０ ％） 中２ ｈ 。在 热 应 激 的 ８ ｄ 里， 小 鼠饲粮 维 持 不变 。
１ ． ２ ． ２ 样 品 收集
机体 受 到 氧 化 应 激 时 ， 调 节 体 内 的 抗 氧 化 酶 基 因 表达 ， 保护 机体 抵抗 自由基 的攻 击 ， 减 少 氧 化 损 伤， 对 机体 维 持 内环 境 的 稳定 具 有 重要 作 用 。
动物营养学报 ２ ０ １ ４ ， ２ ６ （ ９ ） ： ２ ７ ７ ９ — ２ ７ ８ ８
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ａ ｎ ｉ ｍａ ｌ Ｎｕ ｔ ｒ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ６ － ２ ６ ７ ｘ 。 ２ ０ １ ４ ． ０ ９ ． ０ ４ １